QIAseq 1-Step Amplicon DNA Library Kit

最速ライブラリー調製ソリューションであるQIAseq 1-Step Amplicon Library Kit を利用して、ターゲットリシークエンシングおよびアンプリコンシークエンシングアプリケーションで時間を節約できます。 エンド修復とライゲーションを組み合わせることで、この新しいキットは、QIAGEN GeneRead Targeted DNA Panel、Ampli-Seq、Tru-SeqまたはPCRアンプリコンから、高品質でアーティファクトのないライブラリーを迅速に30分で作製できます。得られたNGSライブラリーは、イルミナNGS機器で使用できます。

アンプリコンから高品質NGSライブラリーまで ― わずか30分で大幅な時間短縮

従来のNGSライブラリー調製は、骨の折れる作業でした。QIAseq 1-step Amplicon Library kitは、遺伝子のパネルやマルチプレックスPCRからのPCRフラグメントのプールから信頼性の高いNGSライブラリを調製できる、より速くより効率的な手段です。新規のエンド修復/ライゲーション反応の組み合わせを利用して、NGSライブラリー調製をわずか30分で完了します（ 最適化されたワンステップライブラリー構築 と  QIAseq 1-step Amplicon Library kit を含むターゲットリシーケンスNGSワークフロー参照）。 ワンチューブ反応により時間を節約して、シークエンシングとデータ分析に専念できるようになります。全工程を室温で行うことができ、サーモブロックのない機器でも自動化が可能になります。ワンチューブ・プロトコルは、試薬を移す作業をなくし、インサートアンプリコンを捕捉する効率を高め、また、手動処理で発生するコンタミまたはサンプル混入のリスクを低減します。シーケンスデュープリケイトやPCRバイアスを避けるために必要に応じてPCRフリーのプロシージャーも選択でき、任意のイルミナシークエンシング装置用の高品質ライブラリーを生成します。

優れたシークエンシングマトリックス

典型的なライブラリーは、優れたシーケンシング・マトリクス、最小のアダプターアダプターライゲーション産物、特異性を有し、インプットプロダクトの均一性および感受性を正確に反映しています（ 典型的な結果を参照）。

遺伝子パネルまたはマルチプレックスPCRから精製されたアンプリコンは、単一の酵素ライブラリー構築ステップをとおして、イルミナ適合性NGSライブラリーに変換されます。 この反応の間に、アンプリコンをライゲーション用に調製し、バーコードアダプターをDNAインサートの両端にライゲーションします。 アダプターは、後続のライブラリーのPCR濃縮、ブリッジ増幅中のフローセル結合、およびペアードエンドおよびマルチプレックスシークエンスのためのシークエンシングプライマー結合部位に必要な配列を含みます。

ライブラリー構築後、過剰のアダプター、アダプターダイマーおよび他の反応成分を、Agencourt AMPure XPビーズをとおして除去します。 この手順は室温で実施できるので、ハイスループット用途のための様々な液体処理プラットフォーム上で容易に自動化することができます。 ライブラリー精製の後、高フィデリティのライブラリー濃縮工程を実施して、少量の出発物質から十分なライブラリーを生成します。 この反応は、高フィデリティDNAポリメラーゼと最適化されたバッファー条件に依存しているため、最小のGCバイアスと非常に低いエラー率が保証されます。

このキットは以下のものに適用可能です：

• GeneRead v2 DNAseq Targeted Panelsで生成されたPCR産物
• 他のカスタムまたは市販遺伝子パネルで作製されたPCR産物
• vQIAGEN Multiplex PCR Kitまたは他のQIAGEN PCR試薬で生成されたPCR産物
• TaqまたはTaq誘導体で生成されたマルチプレックス PCRアンプリコン

新規ワンステップ反応は、効率的なライゲーションのためにPCRアンプリコンに3'Aオーバーハングが必要です。 最も一般的に使用される熱安定性DNAポリメラーゼであるTaqポリメラーゼおよびその誘導体は、デフォルトでPCR反応中にこの非鋳型A付加を行います。 TaqおよびTaq誘導体には、マルチプレックスPCRに適した特性があり、多くの市販遺伝子パネルにはTaqベースの酵素が用いられています。 Taqとは対照的に、強力な3'-5 'エキソヌクレアーゼ活性を有する他のポリメラーゼはこの反応を行いません。 一般的にこれらの酵素はマルチプレックスPCRには使用されませんが、このような酵素で作製されたアンプリコンでもライゲーション前にA-tailing を行えば、QIAseq 1-Step Amplicon Library Kitと互換性があります。 詳細はハンドブックを参照してください。

対応シークエンシング機器:

• Illumina HiSeq
• Illumina MiSeq
• Illumina NextSeq
• Illumina MiniSeq

QIAseq 1-Step Amplicon Library Kitは、標準的なターゲットリシークエンシングライブラリー調製よりも大幅に時間を節約します。キットは、新規の組み合わされたエンド修復／ライゲーション反応を利用して、NGSライブラリー調製プロセスを合理化して全体をわずか30分で完了します。ワンチューブ反応により時間を節約できるので、シークエンシングとデータ分析に専念できるようになります。全体の手順は室温で行うことができ、サーモブロックのない機器でも自動化することができます。ワンチューブプロトコールは、試薬を移す必要性をなくし、効率を高め、インサートアンプリコンをより効果的に捕捉し、手作業で起こりうるコンタミやサンプル混入のリスクを低減します。シーケンスデュープリケイトやPCRバイアスを避けるために必要に応じてPCRフリーのプロシージャーも選択でき、任意のイルミナシークエンシング装置用の高品質ライブラリーを生成します。

QIAseq 1-Step Amplicon Library Kitは、Illuminaの任意のプラットフォーム上で、アンプリコンおよび遺伝子パネル配列決定のための、効率的で合理的な単一反応のソリューションを提供します。