QIAseq Ultralow Input Library Kit

次世代シークエンシング（NGS）は、がん研究、幹細胞研究、メタゲノミクス、集団遺伝学、医学研究など、多くの新しくエキサイティングなアプリケーションの原動力です。 NGS技術は継続的に改善されていますが、ライブラリー調製は多くのラボで、プロセスのボトルネックであり、NGSデータを正常に生成できるサンプルタイプにおける制限要因です。

その結果、限られたDNAサンプルまたは損傷したDNAサンプルから開始する場合、NGSライブラリー内で可能な限り最大限のゲノム情報を捕捉することは重大かつ困難です。循環する無細胞DNA、FFPE DNA、古代DNAおよびChIP-seq DNAなどの多くのサンプルタイプに適用される標準的なライブラリー調製方法は、品質に関連する問題を引き起こす可能性があります。 これらの問題は、低いライブラリー収率または変換率から、アダプター二量体分子由来の高い読み取り率への、生成されたデータの有用性を制限します。

ライブラリー構築

QIAseq Ultralow Input Library Kit の反応は、酵素的、化学的、機械的または自然に断片化された二本鎖DNAからスタートします。キットは、QIAGEN独自のHiFi PCRマスターミックスとともに、最適化されたエンドポリッシング反応と、新しいUltralow Input Ligation試薬を使用します。この組み合わせは、サンプルDNAのNGSライブラリーへの変換速度を最大化し、ゲノムの高GC含量領域および低GC含量領域でも効率的かつ均一に増幅します。このプロトコールは、アダプターダイマーコンタミネーションのない、10〜100 pg* のDNAから、可能な限り高いシーケンスライブラリーの収量を可能にします。キットのプロトコールは自由度が高いので、同じキットでわずか10 pgインプットDNAからのPCRフリーライブラリー調製、あるいは、100 ngインプットDNAからのPCRフリーライブラリー調製が可能です。
*実験に必要なゲノム複雑度は、生物のゲノムサイズおよび目的の標的領域に含まれるゲノムの割合に依存して変化します。

反応クリーンアップ

アダプターライゲーションおよびライブラリー増幅ステップに続いて、Agencourt AMPure XPビーズを使用することにより、反応のクリーンアップおよび残存アダプターダイマーの除去が可能で、様々なハイスループットの自動化プラットフォームで容易に自動化することができます。

ライブラリーDNAの増幅（オプション）

インプットDNA量が100 ng未満の場合は、オプションのプロトコールでPCRベースのライブラリー増幅を行います。キットに含まれているQIAseq HiFi PCRマスターミックスを使用してDNAライブラリーの高忠フィデリティ増幅を可能にします。

製品内容とアクセサリー 

96反応サイズのQIAseq Ultralow Input Library Kitには、デュアルバーコードのプレートフォーマットアダプターが付属しています。 96プレックスアダプタープレートの各ウェルは、2つの8ヌクレオチド識別バーコードのユニークな組み合わせからなるシングルユースアダプターを含みます。96反応QIAseq Ultralow Input Kitは、i5 バーコードとi7 バーコードを各アダプターに組み合わせることにより、シーケンシング前ライブラリーにおいて最大96プレックスが可能です。
12反応サイズキットにはアダプターは含まれていません。6ヌクレオチドバーコードを持つ2種類の12プレックスアダプターをそれぞれ別々に注文することができます（QIAGEN Cat. no. 180985 および 180986）。