dPCR LNA Mutation Assays

• デュプレックスアッセイ設計により、変異型と野生型の配列を検出
• FAMとHEXまたはAtto 550とROXの蛍光色素の組み合わせを選択可能
• LNAを組み込んだプライマーとプローブがアッセイの特異性と感度を向上
• 200以上のターゲットのdPCRアッセイをウェットラボで検証済み
• 循環腫瘍DNA、リキッドバイオプシー、FFPE、およびその他の組織サンプルでの使用に最適
• QIAcuity Probe PCR Kitとの併用を想定

dPCR LNA Mutation Assaysは、COSMICのような包括的なキュレートデータベースから選択された各配列変異の検出を可能にします。アッセイデザインはdPCRウェットラボで検証済みで、そのデータも利用可能です。ターゲットの変異の検出感度は、QIAcuity Nanoplateの1ウェルでの野生型バックグラウンドにおいて0.1%です。反応を複数のウェルに分割し、解析を組み合わせることで、さらに高い感度を得ることができます。2種類の蛍光色素を組み合わせることで、1つのウェルで2つのターゲット変異を同時にマルチプレックス解析でき、変異体と野生型の配列の検出も可能になります。

dPCR LNA Mutation Assaysは、変異型と野生型に対応した2つのプライマーとプローブで構成され、すぐに使用できる30倍濃度のアッセイとしてチューブで提供されます。本アッセイは、QIAcuity Probe PCR Kitと組み合わせて使用します。

dPCRは、レアイベント/配列変異の検出と絶対定量において感度を向上させることができ、野生型ゲノムDNAのバックグラウンドで0.1%の突然変異を検出することが可能です。パーティショニングにより、ターゲットの濃度を高めることが可能になりました。エンドポイントでの増幅およびノイズ検出は、ポジティブ/ネガティブのバイナリターゲットを見出すことで、（PCR阻害剤が原因となるなどの）増幅効率に依存しない正確な定量を可能にします。

dPCR LNA Mutation Assaysは、特定の変異配列の存在を同定する加水分解プローブベースのデュプレックスアッセイです。一方のプローブが変異型アレルを検出し、もう一方のプローブが野生型アレルを検出します。デジタルPCRは、野生型バックグラウンド中の変異型DNA配列を検出するための高感度かつ高信頼性の手法です。dPCR LNA Mutation Assaysは、LNAを組み込んだプローブとプライマーを使用し、1つのナノプレートウェルで野生型ゲノムDNAのバックグラウンド中に存在する0.1%の変異の検出を可能にする特異的かつ高感度なアッセイです。

2つの蛍光検出オプションを使い、1つのウェルで2つの変異ターゲットのマルチプレックス分析を実現できます。製品構成において、変異体および野生型の検出に対応したFAMとHEX、またはAtto 550とROXの組み合わせを選択できます。

dPCR実験のセットアップには、ゲノムDNAサンプル（新鮮、凍結、または固定サンプルから分離）のアリコートをQIAcuity Probe PCR KitマスターミックスとdPCR LNA Mutation PCR Assayに添加します。各反応はQIAcuity Nanoplateの1つ以上のウェルで分析されます。

ナノプレートをロードおよびシールした後、QIAcuity装置で推奨されるサイクルプログラムを選択します。QIAcuity Software Suiteの絶対定量解析では、1マイクロリットルあたりのコピー数が示されます。突然変異解析では、変異型ターゲットの計算上の存在比とそれに対応する数値データが示されます。

dPCR LNA Mutation PCR Assaysは、新鮮、凍結、または固定サンプルのDNAに存在する特異的な配列変異を迅速かつ正確に同定するのに最適です。