TAGZyme System

• TAGZyme酵素による除去のために最適化された発現Hisタグ
• 37°Cでわずか30分で95％を超える効率的なHisタグ除去
• N末端Hisタグ付加タンパク質が高レベルで発現
• 高純度の最終産物
• Ni-NTA法による混入物質の完全な除去

TAGZyme Enzyme DAPaseには、最大10 mgのHisタグタンパク質から特異性が高い効率的な方法でHisタグを除去するための十分な酵素が含まれます。TAGZymeシステムは、TAGZyme pQE-2ベクターを使用して、発現する固有のDAPaseストップポイントを含むタンパク質からHisタグを除去するために使用できます。

TAGZyme DAPase Enzymeは、TAGZyme pQE-2ベクターを使用して、発現するN末端のHisタグから、「ストップポイント」まで連続して効率的にジペプチドを除去します。

Hisタグ遺伝子組換えタンパク質は、タンパク質の構造や機能の研究において重要なツールとなっています。Hisタグのサイズが小さく、免疫性が低いことは、その除去が通常は必要ないことを意味します。しかし、X線またはNMRによる構造決定研究、または治療薬の生産など、いくつかのアプリケーションには、ベクター由来のアミノ酸のないタンパク質産物が好まれます。

TAGZyme pQE-2ベクターは、固有のDAPaseストップポイントを含むタンパク質に適しています。 

TAGZymeシステムは、遺伝子組み換えタンパク質から、高特異的で効率的な方法でN末端のHisタグを除去します。DAPase酵素を使用して、精製されたHisタグタンパク質のN末端からジペプチドを連続して切り離します（図  「Hisタグの除去」”を参照）。酵素が“ストップポイント”、すなわち基質として機能できないアミノ酸モチーフに達したとき、消化は停止します（表 「DAPaseのストップポイント」を参照）。

DAPaseストップポイント

固有のストップポイントを含む遺伝子組み換えタンパク質では、TAGZyme pQE-2 vectorベクターを使用した発現により、DNAインサートのクローン化した部位に関係なく、N末端のHisタグを完全にかつ効率的に除去することができます（図  「Hisタグの除去」を参照）。DAPase酵素と共にインキュベートした後、反応混合物は、Ni-NTAマトリックスを使用した減法固定化金属アフィニティクロマトグラフィー（IMAC）で処理します（図  「タグ除去されたタンパク質の精製」を参照）。HisタグフラグメントとTAGZyme DAPase Enzyme（C末端に6xHisタグのある）はマトリックスに結合し、純粋なタグ除去済みの標的タンパク質がフロースルー分画に回収されます。

TAGZymeシステムは、特異的な開裂を生じさせ、遺伝子組み換え試薬を使用し、混入物質全てを完全に除去するため、以下を含むアプリケーションのためのHisタグフリータンパク質を産生するのに最適な方法です。

• NMRまたはX線結晶構造解析によるタンパク質の構造決定
• 治療用タンパク質の産生