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Cat. No. / ID: 34850
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実績のある6xHisタグと短いStrep-tag IIに基づく2ステップアフィニティー精製システムにより、迅速で、かつ標準化された手順により、シンプルかつ高い効率で超高純度タンパク質の精製が可能になります。両タグを持つ組み換えタンパク質は、Ni-NTAマトリックスとStrep-Tactinマトリックス上で連続精製されます(図 2ステップで超高純度タンパク質を参照)。これら2つのシンプルなアフィニティー精製により、あらゆるダウンストリームアプリケーションに適した完全活性、完全長の超高純度タンパク質が得られます。
2つの小さなアフィニティタグ(6xHisタグとStrep-tag II)を持つ組み換えタンパク質は、pQE-TriSystem His·Strepベクターを用いて、E. coli、昆虫、哺乳動物細胞で効率的に発現します。細胞を溶解し、溶解物を澄明にしてから、まずタンパク質を、実績のある6xHis-tag-Ni-NTA相互作用に基づく固定化金属アフィニティークロマトグラフィー手順を用いて精製します。イミダゾールを用いてNi-NTAマトリックスから溶出後、組み換えタンパク質(Strep-tag IIエピトープも持つ)をStrep-Tactinマトリックスに直接ロードします。バッファー交換は不要です。タンパク質は、ビオチンまたはデスチオビオチンを用いて、Strep-Tactinマトリックスから溶出します。この2ステップアフィニティー精製により、超高純度(純度98%以上)のタンパク質が得られます(図 2ステップアフィニティ精製手順を参照)。精製の順序を逆にすることもできます(すなわち、 Strep-Tactin精製の後にNi-NTA精製を行う)。タンパク質はマウスモノクローナルStrepタグまたはAnti·His抗体を用いて高い特異性と感度で検出できます。
検出にStrep-tag Antibodyを使用する2ステップアフィニティー精製システムは、高純度が重視される、あるいは達成が困難なアプリケーションに非常に適しています。標準化された精製手順により、タンパク質特異的精製プロトコールの開発と最適化が不要になり、スループットも向上します。2ステップアフィニティー精製システムが提供する超高純度と利便性により、以下の用途に最適な方法となっています:
Highly sensitive detection of proteins carrying a Strep-tag.
Features | Specifications |
---|---|
Applications | ウェスタンブロット、ドットブロット、ELISA、免疫沈降、免疫組織化学 |
検出 | 二次抗体が必要 |
Sensitivity in Western blots (chemiluminescent detection) | 1 ng |
Substrate for blot detection | 二次抗体によって異なる |
Substrates for assay procedure | 二次抗体によって異なる |
Tag | Strepタグ |
Epitope detected | SAWSHPQFEK |