Ni-NTA Superflow Cartridges
液体クロマトグラフィーシステムを用いたHisタグ付きタンパク質精製用
液体クロマトグラフィーシステムを用いたHisタグ付きタンパク質精製用
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Cat. No. / ID: 30761
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Hisタグ付きタンパク質の精製で最もよく引用される樹脂であるNi-NTA Superflowは、FPLC、ÄkTA、BioLogicシステムなどの液体クロマトグラフィーシステムでの自動精製、またはシリンジを使用する手動精製用に、1 mlおよび5 mlの充填済みカートリッジでご利用いただけます。
Ni-NTAは、他の樹脂と比較して、高収量の高純度タンパク質の提供に優れた性能を発揮します(図 高収量の高純度タンパク質の提供において他の樹脂よりも優れているNi-NTAを参照)。他の市販のニッケル樹脂と独自に比較し、Ni-NTA Superflowはニッケルの浸出が最も少ないことが実証されています(図 独立した試験によると、Ni-NTAは試験した他の樹脂と比較してニッケルの損失が少ないを参照)。ここで重要なのは、樹脂からニッケルが浸出すると、残った荷電リガンドがイオン交換体として機能し、溶出画分を汚染する非タグタンパク質と結合するということです。Ni-NTAの安定性が高いということは、10 mM DTTの存在下でも、完全に活性のある高純度タンパク質を得るために使用できるということです(図 Ni-NTAの余剰な配位部位は、IDAよりも強固にニッケルイオンに結合するを参照)。
表に示すように、どのような規模の精製でも、一貫して高い純度が得られます。Ni-NTA Superflow Cartridgesは、QIAGENが提供するHisタグ付きタンパク質の包括的かつ補完的なソリューションの一部を形成しています(図 ナノグラムからグラム量までのHisタグ付きタンパク質のスケーラブルな精製を参照)。
マトリックス | マトリックス 量 |
培養物 量 |
収量 | 回収率(%) | 純度* |
---|---|---|---|---|---|
Ni-NTA Magnetic Agarose Beads(微小規模) | 100 μl | 1 ml | 33 μg | ~90% | ~97% |
Ni-NTA Superflow(小規模) | 500 μl | 320 ml | 6 mg | ~80% | ~96% |
Ni-NTA Superflow(中規模) | 10 ml | 1.7 l | 109 mg | ~80% | ~98% |
Ni-NTA Superflow(大規模) | 100 ml | 18 l | 2 g | >88% | ~97% |
Ni-NTAマトリックスは、Hisタグ付きタンパク質の精製に最適なアフィニティークロマトグラフィー溶液です(図 Hisタグ付きタンパク質の効率的なワンステップ精製を参照)。安定性が高いということは、強力な変性剤、洗浄剤、さらには還元剤を含む広範なバッファー成分に適合するということです(表「His/Ni-NTA相互作用に適合する試薬」を参照)。この柔軟性により、研究者はNi-NTAが提供する優れた分離特性の恩恵を受けながら、最適の精製スキームを開発することができ、多くの場合、2回目のクロマトグラフィープロセスが不要になります。
変性剤 | 界面活性剤 | 還元剤 | その他 | 塩 | 長期保存 |
---|---|---|---|---|---|
6 M Gu·HCl | 2% Triton X-100 | 20 mM β-ME | 50%グリセロール | 4 M MgCl2 | 最大30%エタノール |
8 M 尿素 | 2% Tween 20 | 10 mM DTT | 20%エタノール | 5 mM CaCl2 | または100 mM NaOH |
1% CHAPS | 20 mM TCEP | 20 mM TCEP | 20 mMイミダゾール | 2 M NaCl |
Ni-NTAマトリックスを使用して、構造研究(タンパク質結晶学やNMRなど)用Hisタグ付きタンパク質の精製をスケールアップしたり、バイオ医薬品生産用のグラム量を製造することができます。
Features | Specifications |
---|---|
Applications | プロテオミクス |
Gravity flow or spin column | FPLCまたはシリンジ |
Binding capacity | 最大50 mg/ml |
FPLC | はい |
N- or C-terminal tag | 両方 |
Bead size | 60~160 µm |
Processing | 手動/自動 |
Scale | 大規模 |
Start material | 細胞溶解物 |
Support/matrix | Superflow |
Tag | 6xHisタグ |
Yield | 最大50 mg(1 mlカートリッジ)、最大250 mg(5 mlカートリッジ) |