Ni-NTA Superflow 96 BioRobot Kit

• ウェルあたり最大2 mgのタンパク質を完全自動精製
• クロスコンタミネーションのない高純度タンパク質
• 天然または変性条件下での精製

Ni-NTA Superflow 96 BioRobot Kitでは、96サンプルから最大300 µgの組み換えタンパク質を並行して自動精製できます（標準プロトコール、1サンプルあたり5 mlの培養量）。澄明な細菌細胞溶解物は、BioRobotワークステーションによって、Ni-NTA Superflowを事前にロードしたフィルタープレート上を流れます。このユニークな96ウェル金属キレートアフィニティークロマトグラフィーモジュールは、Hisタグ付きタンパク質を強力かつ選択的に結合します。天然または変性条件下での精製用に、すぐに使えるプロトコールが用意されています。

自動化手順で、より大量のタンパク質を必要とするお客様のニーズに応えて、QIAGENは、Ni-NTA Superflow 96 BioRobotのプロトコールを改良し、より大量の培養量の処理と、ウェルあたり最大2 mgのHisタグ付きタンパク質の精製を可能にしました。この手順で使用するNi-NTA Superflow樹脂の量をウェルあたり200 µl に増やし、溶解緩衝液の製剤設計を最適化することにより、最大25 ml（天然条件下での精製）または15 ml（変性条件下での精製）の培養物を処理できます（高収量プロトコール）。細胞培養を24ウェルブロックに移し、処理します。これに対応してバイオマスが増加し、ウェルあたりの純粋なHisタグ付きタンパク質の収量が増加します（表と図  ウェルあたりのHisタグ付きタンパク質のミリグラム量を参照）。これによって、同じバッチのタンパク質に対して複数のアッセイを実行し、必要なタンパク質調製物の総量を削減することができます。図  自動発現クローンスクリーニングも参照。シングルステップ精製により、幅広い収量の高純度タンパク質が得られ、大きなタンパク質複合体の精製も可能です。

Ni-NTA Superflow 96 BioRobot Kitを含む QIAexpress Ni-NTAタンパク質精製システムは、6個以上のヒスチジン残基のアフィニティタグを含むタンパク質に対する特許取得済みのNi-NTA（ニッケル-ニトリロ三酢酸）樹脂の優れた選択性に基づいています。この技術により、天然または変性条件下で、あらゆる発現系から、ほぼすべてのHisタグ付きタンパク質をワンステップ精製できます。ニッケルイオンに対して4つのキレート部位を持つNTAは、金属イオンとの相互作用に利用できる部位が3つしかない金属キレート精製システムよりもしっかりとニッケルに結合します。余剰なキレート部位がニッケルイオンの浸出を防ぐため、他の金属キレート精製システムを使用した場合よりも結合能が高く、高純度のタンパク質調製物が得られます。QIAexpressシステムを使用すると、バキュロウイルス、哺乳類細胞、酵母、細菌など、あらゆる発現系からHisタグ付きタンパク質を精製できます。（図  Ni-NTAタンパク質精製システムによるタンパク質の精製を参照）。

Ni-NTA Superflow 96 BioRobot KitはBioRobot 3000、8000、9600ワークステーション用です。

NQIAexpress Ni-NTAタンパク質精製システムは、以下を含む多くのアプリケーションに適したタンパク質を高い信頼性でワンステップ精製します。

• 構造および機能研究
• 三次元構造決定のための結晶化
• タンパク質-タンパク質およびタンパク質-DNA相互作用を含むアッセイ
• 抗体を産生するための免疫付与