Certal Residual DNA Detection Kits

内部コントロールを含む残存CHO宿主細胞DNAの高感度プローブベース検出用

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Certal CHO Detection Kit (100)

Cat. No. / ID:  211822

100 x 25 µl反応の場合:1.25 ml Certal Residual DNA PCR Master Mix、Certal Internal Control DNAおよびAssay、CHO DNA Positive controlおよびCHO-Assay、100 µl Uracil-N-Glycosylase、210 µl High-ROX Dye Solution、210 µl ROX Dye Solution、Nucleic Acid Dilution Buffer、TE Buffer
¥241,000
Certal Residual DNA Detection Kitsは、医薬品検査での分子生物学アプリケーション向けです。この製品は、病気の診断、予防、治療を目的とはしていません。商標を参照

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特徴

  • 優れた再現性を備えた低い定量下限
  • 高い直線範囲
  • 信頼性の高い正確な内部コントロール
  • 幅広いリアルタイムPCRサイクラー用に最適化されたプロトコール
  • 内部コントロールと陽性コントロールを含む完全なキット

製品詳細

バイオ医薬品を扱う場合、最終的な治療材料を評価して、宿主細胞からの残存DNAなどのコンタミネーションがないことを確認することが不可欠です。Certal Residual DNA Detection Kitは、二重標識加水分解(TaqMan®としても知られる)プローブを用いて、宿主細胞の残存ゲノムDNAを高感度かつ迅速にリアルタイムPCRで定量できるように設計されています。Certal CHO Detection Kitには、CHO残存宿主細胞DNAのデュプレックスreal-time PCR検出用試薬と、Certal Internal Controlが含まれています。このキットにはまた、CHO宿主細胞DNAからのシグナルがない場合のPCRアッセイの機能を確認するCertal Residual DNA Positive Controlと、濃度の異なる2種類のROXパッシブレファレンス色素も含まれており、実質的にあらゆるリアルタイムPCR装置で使用できます。

パフォーマンス

Certal Residual DNA Detection Kitsは、安全で信頼性の高いバイオ医薬品の製造に不可欠な残留ゲノムDNA(gDNA)の高感度で信頼性の高い検出と定量を可能にします(図「 高感度で信頼性の高い検出」参照)。Certal CHO Detection Kitは、チャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞からの残存gDNAを、低い検出限界と高い直線範囲で検出し、低レベルの残存gDNAであっても信頼性の高い検出を保証します(図「 低い検出限界」参照)。Certal Residual DNA Detection Kitsは幅広いサイクラーに対応しており、高感度で信頼性の高いデータを提供します(図「 幅広いサイクラーでの高感度で信頼性の高い検出」と 「 Rotor-Gene QでのCHOゲノムDNAの高感度で信頼性の高い検出」参照)。

プロセスの安全性を高めるために、Certal Residual DNA Detection KitsにはQIAGEN Internal Controlが含まれています。これは、陰性結果の正しい解釈を可能にし、ターゲットアッセイに干渉しないよう特別に設計されています。QIAGEN Internal Controlは、ゲノムDNAと共増幅すると確実に検出されます(図「  QIAGEN Internal Controlの確実な検出」参照)。

図参照

原理

バイオ医薬品の製造に使用される宿主細胞株からのコンタミネーションが最終治療材料に含まれていないことを保証するために、Certal Residual DNA Detection Kitsは、CHO宿主細胞DNAを特異的に検出するように事前に設計したアッセイを提供しています。各Certal Residual DNA Assayは、残存CHOゲノムDNAを確実に検出できるように、最適化されたプライマーペアとFAM標識加水分解プローブで構成されています。ヒトバックグラウンドDNAとCertal Internal Control DNAは、Certal Residual DNA Assayに干渉しません。

プレミックスしたCertal Internal Control Assayには、Certal Internal Control DNAを検出するためのフォワードプライマーとリバースプライマー、MAX標識加水分解プローブが含まれています。これは、Certal Residual DNA Assaysとの干渉を防ぐように特別に最適化されています。このCertal Residual DNA Positive Controlは、増幅反応自体の機能をテストすることにより、陰性結果を正しく解釈できるようにします。

Certal ResDNA PCR Bufferは、高感度で信頼性の高い定量的デュプレックスreal-time PCR結果を得ることができるように最適化されています。マスターミックスにはdUTPも含まれており、PCR開始前にウラシル-N-グリコシラーゼ(UNG)で前処理を行うことで、PCR産物のコンタミネーションがその後のPCR反応に影響を与えないようにすることができます。

Certal Residual DNA Detection Kitコンポーネント
コンポーネント 特徴 メリット
Certal Residual DNA AssaysとコントロールDNA
50x Certal Residual DNA Assay 事前に設計し、最適化し、検証したプライマー・プローブセット(FAM標識) 残存CHO宿主細胞DNAの確実な検出
Certal Residual DNA Positive Control Certal Residual DNA Assayで増幅される陽性コントロールDNA サンプル中に残留宿主細胞DNAが検出されない場合、Certal Residual DNA Assayが正しく機能していることを検証
50x Certal Internal Control Assay Certal Internal Control DNA検出のための事前に設計、最適化、検証したプライマー・プローブセット(MAX標識)  Certal Internal Control DNAのみを特異的に検出します。Certal Residual DNA Assaysと干渉しないように最適化
Certal Internal Control DNA Certal Internal Control Assayで増幅されるInternal Control DNA PCR阻害物質の存在を排除、もしくは精製ステップ中に添加することで精製と増幅をコントロールするために使用可能
Certal ResDNA PCR Master Mix
HotStarTaq DNA Polymerase    95°C 15分で活性化 室温でqPCR反応をセットアップ
Certal ResDNA PCR Buffer KClと(NH4)2SO4イオンのバランスの取れた組み合わせ 特異的なプライマーアニーリングにより信頼性の高いPCR結果を保証
合成Factor MP 同じチューブで最大4つの遺伝子を高い信頼性でマルチプレックス分析
dNTPミックス dTTPの一部を置き換え、オプションでUNG処理を可能にするdUTPを含む ウラシル-N-グリコシラーゼ(UNG)で反応を前処理すると、PCR産物のキャリーオーバーが効果的に除去されます
追加コンポーネント
50x ROX Dye Solution Applied Biosystems 7500 real-time PCRシステムで蛍光シグナルを正規化するためのパッシブレファレンス色素の個別チューブ。オプション:AgilentのStratagene装置で使用できます ROX色素を必要とするサイクラーで正確な定量。 どのリアルタイムPCRサイクラーでもPCRに干渉しません
50x High-ROX Dye Solution Applied Biosystems 7900とStepOne real-time PCRシステムで蛍光シグナルを正規化するためのパッシブレファレンス色素の個別チューブ
Uracil-N-Glycosylase (UNG) ヌクレアーゼフリーの高純度組換え酵素の個別チューブ PCR産物のキャリオーバーを効果的に除去
QuantiTect Nucleic Acid Dilution Buffer 核酸スタンダードの希釈および保存のための独自のバッファー組成 希釈および反応セットアップ中のRNAおよびDNAスタンダードを安定化し、チューブやピペットチップなどのプラスチック表面での核酸のロスを防ぎます。

操作手順

Certal Residual DNA Detection Kitは、宿主細胞 DNA、Certal Internal Control、およびCertal Residual DNA Positive Controlを検出するための簡単な手順を提供します(図 Certal Residual DNA Detection Kitの手順参照)。付属のマスターミックスとCertal Residual DNA Assay、Certal Internal Control Assay、Certal Internal Control DNAを混合し、サンプルDNAまたはCertal Residual DNA Positive Controlを加えるだけです。キットのハンドブックには、さまざまなサイクラーで使用できるように最適化されたプロトコールが含まれています。ROXは濃度の異なる2本のチューブで提供され、どのリアルタイム装置でも使用できます(表「正しいROX濃度の選択」参照)。

正しいROX濃度を選択
装置 ROX Dye Solution
  不要 ROX Dye Solution High-ROX Dye Solution
Rotor-Gene Q X    
Rotor-Gene 6000およびRotor-Gene 3000 X    
Applied Biosystems 7500、ABI ViiA7   X  
Applied Biosystems 7900HT、StepOneおよびStepOne Plus、ABI PRISM 7700、7000、および7300     X
Mx3000P、Mx3005P、Mx4000 X オプション  
iCycler iQ System X    
LightCycler 480 X    
図参照

アプリケーション

Certal Residual DNA Detection Kitsは、内部コントロールを含む宿主細胞DNAの検出に配列特異的プローブを使用する高感度リアルタイムPCRを可能にします。このキットは、QIAGEN、Applied Biosystems、Bio-Rad、Roche、Agilentなどを含む幅広いリアルタイムPCRサイクラーで使用できます。

裏付けデータと数値

リソース

クイックスタートプロトコール (1)
MSDS (1)
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
キットハンドブック (1)
For sensitive real-time PCR detection of residual host cell DNA and an internal control using sequence-specific probes
Safety Data Sheets (1)
Certificates of Analysis (1)

FAQ

Can the Certal CHO Positive Control DNA be used to create a qPCR standard for relative quantification?
For quantification, it is recommended that a gDNA standard from your production cell be prepared using, for example, the QIAamp DNA Mini Kit. The positive control provided with Certal Residual DNA Detection Kits is not suitable for use as a qPCR standard for relative quantification.
FAQ ID -2979
How many freeze-thaw cycles can the Internal Control supplied with Certal Residual DNA Detection Kits tolerate?

The Internal Control supplied with Certal Residual DNA Detection Kits can be freeze-thawed up to 6 times without a decrease in performance. However, great care should be taken to avoid inadvertently introducing RNases or DNases into the Internal Control template solutions. In general, in order to avoid repeated freeze-thaw cycles, we recommend preparing aliquots of the Internal Control template.

Note:  The Internal Control supplied with Certal Residual DNA Detection Kits cannot be ordered separately

FAQ ID -2975
On which cyclers can Certal Residual Detection Kits be used?
Certal Residual Detection Kits can be used on virtually any real-time cycler. The master mix supplied with the Kits does not contain ROX. Instead, 2 different ROX concentrations are supplied in separate tubes. “High-ROX Dye Solution” is for use with all Applied Biosystems cyclers except the Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR Systems and the ViiA7 System, and “ROX Dye Solution” is for use with the Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR Systems, the ViiA7 System, and, optionally, instruments from Agilent. Recommendations are provided in the handbook (page 11).
FAQ ID -2973
What is the label of the probe that is used in the Internal Control Assay to detect the Internal Control supplied with Certal Residual DNA Detection Kits?
The probe is labeled with the MAX-NHS ester (MAX) reporter dye, which has a spectrum equivalent to HEX, JOE, or VIC dyes. IowaBlack is used as the quencher dye. IowaBlack is a non-fluorescent quencher (dark quencher).
FAQ ID -2976
If a cycler from Applied Biosystems is used in combination with the Certal Residual DNA Detection Kit, should dye calibration for MAX be performed?

No, calibration is required if the instrument is already calibrated for VIC (which is normally the case). Simply create a new detector, for example, “MAX/IowaBlack”, and assign VIC as the reporter dye and “none” as the quencher (Table 3, page 17 of the Certal Residual DNA Detection Kit handbook describes the procedure in the footnote). 

MAX spectrum is nearly identical to VIC and the requirement for calibration has been thoroughly tested. There is no risk of crosstalk from the VIC channel to the FAM channel. However, crosstalk may occur from the FAM channel to the VIC channel if the pathogen target is present in very high copy numbers. Although this may slightly change the signal for the Internal Control, if a positive signal is detected in the FAM channel, then the Internal Control signal is no longer required.

FAQ ID -2977
On what cyclers have Certal Residual DNA Detection Kits been validated?
Certal Residual DNA Detection Kits have been validated on the Rotor-Gene Q and the Applied Biosystems 7900HT Fast Real-Time System.
FAQ ID -2978
Is there a risk of crosstalk from the FAM channel to the VIC channel if the residual DNA target is present in very high copy numbers?
Usually the amount of gDNA in process samples is low, for example, in the ng range or even lower. Therefore, no crosstalk is expected.
FAQ ID -2980
What is the nature and target of the Internal Control supplied with Certal Residual DNA Detection Kits?

The Internal Control supplied with Certal Residual DNA Detection Kits is a non-linearized plasmid (naked nucleic acid).

The Internal Control supplied with Certal Residual DNA Detection Kits has an artificial sequence that is not present in biological sample material.

FAQ ID -2974