Taq PCR Master Mix Kit

簡便な PCR セットアップ用マスターミックス

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Taq PCR Master Mix Kit (1000 U)

Cat. No. / ID:  201445

12 x 1.7 ml Taq PCR Master Mix containing 1000 units Taq DNA Polymerase, 12 x 1.7 ml Distilled water
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¥113,000
Quantity
1000 U
250 U
Taq PCR Master Mix Kitは分子生物学的アプリケーション用であり、疾病の診断、予防、あるいは治療に使用することはできません。
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Features

  • PCR条件の至適化が最小限で済むQIAGEN PCR Buffer
  • マスターミックスで容易な反応セットアップ
  • より少ないピペッティングステップでコンタミリスクを低減

Product Details

Taq PCR Master Mix Kit には、Taq DNA Polymerase、至適化を最小限にするための画期的なQIAGEN PCR Buffer、およびdNTP が含まれています。簡便な2xマスターミックスによりピペッティングステップが減少し、スループット数と再現性が増大し、コンタミリスクは低減します。

Performance

Taq PCR Master Mix Kitは、他メーカーの試験されたキットに比べて優れており、時間のかかる至適化を必要とせずに、信頼性のあるPCR性能を確実に示します(図" 再現性のあるPCR")。 Taq DNA Polymerase は、異なるプライマー/テンプレートシステムによる特異性の高い増幅を確実にします(図" Tm 値の異なるプライマーへの適応性" と " 長いPCR産物の特異的増幅")。QIAGENのTaqDNA Polymeraseは、全てのロットで、低コピー数のヒトゲノムDNAをターゲットとした増幅実験により、PCR特異性の厳密さや再現性をチェックするなど、広範囲な品質管理テストを受けています(図 " ロット間での再現性")。ユニークなPCRバッファーがマスターミックスに含まれているため、異なるアニーリング温度あるいはMg2+ 濃度を用いて行なうPCRの至適化は、劇的に緩和され、多くの場合、不要となります(図 " 幅広い至適アニーリング温度"および" 異なったマグネシウム濃度への適応 ")。
Taq DNA Polymeraseの詳細データ

濃縮:5 units/µl
組み換え酵素:はい
基質類似体: dNTP、ddNTP、dUTP、ビオチン-11-dUTP、DIG-11-dUTP、蛍光-dNTP/ddNTP
エクステンション率72℃ で2~4 kb/分
半減期:97℃で10分、94℃で60分
増幅効率:≥105
5'->3' エキソヌクレアーゼ活性:あり
余分なA付加:あり
3'->5' エキソヌクレアーゼ活性:なし
混入しているヌクレアーゼ:なし
混入しているRNase:なし
混入しているプロテアーゼ:なし
自己プライミング活性:なし

See figures

Principle

TaqPCR Master Mix Kitには 、QIAGENのTaq DNA Polymerase が、事前に混合された形で含まれています。この溶液は、QIAGEN PCR Buffer、MgCl2、および超高純度のdNTPを最適な濃度で含んでいるため、即使用することができます。PCRをセットアップするのに、プライマーとテンプレートDNAを加えるだけです。簡便なマスターミックスフォーマットにより、ピペットの誤操作が最小限に抑えられて、再現性の高いPCR結果が確実に得られます(図" 再現性のあるPCR")。Taq PCR Master Mix は最長2カ月間、2~8℃で保存することもでき、使用する場合は解凍する必要がないのでPCR セットアップがより速く行なえます。

TaqDNA Polymerase

Taq DNA Polymerase は、スタンダードなPCRから特殊なPCRまで適応できる 高品質の組み換え酵素です(図 " Tm 値の異なるプライマーへの適応性" と" 長いPCR産物の特異的増幅")。

QIAGEN PCR Buffer

革新的なQIAGEN PCR Bufferは、PCR至適化の操作を軽減することにより、時間と労力を節約するために開発されました。QIAGEN PCR Bufferは、KCl も (NH4)2SO4 も含んでいます(図" プライマーのアニーリングにおける特異性が増加")。このユニークなバッファーによって、特異的PCRの産物を増幅しやすくなります。PCR サイクルごとのアニーリングの間、非特異的なプライマー結合に対する特異的な結合の比率が、バッファーによって高く保たれます。このPCRバッファーは、KClと (NH4)2SO4 のユニークな配合比により、従来のPCR バッファーに比べ幅広いアニーリング温度やMg2+濃度の範囲で厳密なプライマーアニーリング条件を実現します。異なるアニーリング温度あるいはMg2+ 濃度を用いて行なうPCRの至適化は、劇的に緩和され、多くの場合、不要となります(図 " 幅広い至適アニーリング温度"および" 異なったマグネシウム濃度への適応 ")。

See figures

Procedure

TaqPCR Master Mixは、Taq DNA Polymerase、QIAGEN PCR Buffer、MgCl2、および超高純度のdNTPを最適な濃度で含んでいます。即使用可能な2xマスターミックスは、ピペットの誤操作を最小限に抑えるとともに、利便性を高めます。PCRのセットアップは迅速、容易、かつ単純ですが、プライマーとテンプレートDNAを加えるだけです。理解しやすいプロトコールがキットに付属しているため、特異的な増幅とPCRが、最初の試みから確実に成功します。

Applications

TaqPCR Master Mix Kitは、以下のようなスタンダードな用途にも特殊な用途にも使用できます。

  • スタンダードな PCR
  • RT-PCR
  • スクリーニング
  • PCRによるDNAフィンガープリンティング(VNTR、STR、RAPD)

Supporting data and figures

Specifications

FeaturesSpecifications
ApplicationsPCR, RT-PCR, DNA fingerprinting
dNTP's includedYes (in Master Mix)
MastermixYes
Reaction typePCR amplification
Enzyme activity5' -> 3' exonuclease activity
Real-time or endpointEndpoint
Sample/target typeGenomic DNA and cDNA
Single or multiplexSingle
With/without hotstartWithout hotstart

Resources

パンフレット (4)
Second edition — innovative tools
PCR 実験における重要項目と新技術
Addressing critical factors and new solutions
MSDS (1)
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
クイックスタートプロトコール (1)
キットハンドブック (1)
For standard and specialized PCR applications with minimal optimization
テクニカルインフォメーション (1)
Certificates of Analysis (1)
Brochures & Guides (4)
Second edition — innovative tools
Addressing critical factors and new solutions
PCR 実験における重要項目と新技術
Kit Handbooks (1)
For standard and specialized PCR applications with minimal optimization
Quick-Start Protocols (1)

Publications

Isolation and identification of Rickettsia massiliae from Rhipicephalus sanguineus ticks collected in Arizona.
Eremeeva ME; Bosserman EA; Demma LJ; Zambrano ML; Blau DM; Dasch GA;
Appl Environ Microbiol; 2006; 72 (8):5569-77 2006 Aug PMID:16885311
Population dynamics within a microbial consortium during growth on diesel fuel in saline environments.
Kleinsteuber S; Riis V; Fetzer I; Harms H; Müller S;
Appl Environ Microbiol; 2006; 72 (5):3531-42 2006 May PMID:16672500
PCR-based tandem epitope tagging system for Escherichia coli genome engineering.
Cho BK; Knight EM; Palsson BO;
Biotechniques; 2006; 40 (1):67-72 2006 Jan PMID:16454042
Genetic analysis of RpL38 and RpL5, two minute genes located in the centric heterochromatin of chromosome 2 of Drosophila melanogaster.
Marygold SJ; Coelho CM; Leevers SJ;
Genetics; 2004; 169 (2):683-95 2004 Nov 1 PMID:15520262
Cyclin C/cdk3 promotes Rb-dependent G0 exit.
Ren S; Rollins BJ;
Cell; 2004; 117 (2):239-51 2004 Apr 16 PMID:15084261

FAQ

What should the starting template DNA quality and quantity be for PCR?

Both the quality and quantity of nucleic acid starting template affect PCR, in particular the sensitivity and efficiency of amplification. PCR sensitivity and efficiency can be reduced by the presence of impurities in nucleic acid preparations or in biological samples. These PCR inhibitors are completely removed when template is prepared using QIAGEN Kits for nucleic acid purification. Please refer to the Brochure "Maximizing PCR and RT-PCR success" for additional information.

The optimal primer–template ratio has to be determined empirically. If too little template is used, primers may not be able to find their complementary sequences. Too much template may lead to an increase in mispriming events. Generally, no more than 1 ug of template DNA should be used per PCR reaction. As an initial guide, spectrophotometric and molar conversion values for different nucleic acid templates are listed below.

 

Spectrophotometric conversions for nucleic acid templates

1 A260 unit* Concentration (ug/ml)
Double-stranded DNA 50
Single-stranded DNA 33
Single-stranded RNA 40

*Absorbance at 260 nm = 1

 

Molar conversions for nucleic acid templates

Nucleic Acid Size pmol/ug Molecules/ug
1 kb DNA 1000 bp 1.52 9.1 x 1011
pUC 19 DNA 2686 bp 0.57 3.4 x 1011
pTZ18R DNA 2870 bp 0.54 3.2 x 1011
pBluescript II DNA 2961 bp 0.52 3.1 x 1011
Lambda DNA 48,502 bp 0.03 1.8 x 1010
Average mRNA 1930 nt 1.67 1.0 x 1012
Genomic DNA      
Escherichia coli 4.7 x 106* 3.0 x 10-4 1.8 x 108**
Drosophila melanogaster 1.4 x 108* 1.1 x 10-5 6.6 x 105**
Mus musculus (mouse) 2.7 x 109* 5.7 x 10-7 3.4 x 105**
Homo sapiens (human) 3.3 x 109* 4.7 x 10-7 2.8 x 105**

* Base pairs per haploid genome

** For single-copy genes

FAQ ID -74
What kind of PCR products can be cloned with the QIAGEN PCR Cloning Kit?

PCR products that will be cloned using the QIAGEN PCR Cloning Kit should be generated using a thermostable DNA Polymerase without proofreading activity, such as Taq DNA Polymerase. Such polymerases attach a single A overhang to their reaction products, which can hybridize to the U overhang of the pDrive Cloning Vector. For efficient addition of an A overhang during the PCR procedure, we recommend a final extension step for 10 min at 72°C as described in the standard protocols of the Taq PCR- and HotStarTaq PCR handbook.


 

FAQ ID -165
Do you have a protocol for polyacrylamide gel analysis of oligonucleotides?
Yes, please follow the Supplementary Protocol 'Polyacrylamide_gel_analysis_of_oligonucleotides' (PCR03).
FAQ ID -961
What makes QIAGEN's 10x Taq and HotStarTaq DNA Polymerase PCR buffer superior?
The QIAGEN 10x Taq and HotStarTaq DNA Polymerase PCR buffer contains a uniquely balanced combination of KCl and (NH4)2SO4. It provides stringent primer-annealing conditions over a wider range of annealing temperatures and Mg2+ concentrations than conventional PCR buffers.
FAQ ID -566
How comparable is CoralLoad gel loading dye contained in various QIAGEN PCR Kits to Sigma Red?

CoralLoad gel tracking dye contained in Taq, HotStarTaq, TopTaq DNA Polymerase and TopTaq Master Mix Kits separates into 2 fragment-size dependent colors (orange and red) when loaded onto an agarose gel. Sigma Red buffer only has one color which is harder to visualize.

 

 

FAQ ID -1644
Have you tested the effect of inhibitors on PCR performance?

Yes. Please see Table 3 in our brochure Maximizing PCR and RT-PCR success. We tested the effects of different inhibitory substances in a number of PCR systems. We also analyzed the effect of including different volumes of reverse transcription (RT) reaction mixtures in PCR. Please see the table below for a list of commonly encountered template impurities and their inhibitory effects on PCR.

 

Impurities showing inhibitory effects on PCR

Substance Inhibitory concentration
SDS >0.005% (w/v)
Phenol >0.2% (v/v)
Ethanol >1% (v/v)
Isopropanol >1% (v/v)
Sodium Acetate ≥5 mM
Sodium Chloride ≥25 nM
EDTA ≥0.5 mM
Hemoglobin ≥1 mg/ml
Heparin ≥0.15 i.U./ml
Urea >20 mM
RT reaction mixture ≥15%

 

 

FAQ ID -818
Can QIAGEN's Taq- and HotstarTaq DNA Polymerases be used for cycle sequencing?
Taq DNA Polymerase and HotStarTaq DNA Polymerase are compatible with cycle sequencing. However, our buffer system is not optimized for this purpose. Optimization of reaction conditions is therefore required when using these Polymerases for cycle sequencing. Unfortunately, we do not have any protocols for this application. An initial activation of the enzyme is necessary if HotStarTaq DNA Polymerase is used.
FAQ ID -741
How can one determine the optimal annealing temperature for a specific PCR assay?

To determine the optimal annealing temperature for a PCR assay, a Temperature Gradient experiment should be performed. To do this, you will set up several PCR reactions in duplicate for the same primer/template combination, using the same PCR chemistry, and subject each of the reactions to a slightly different annealing temperature within a specified range. If a thermal cycler with a temperature gradient function can be used, you can simply program a temperature range for adjacent wells in the cycling block. If no cycler with a gradient function exists in your lab, you will either have to perform duplicate reactions at different temperatures in different machines (if available), or back to back in the same machine.

 

FAQ ID -288