HiPerFect Transfection Reagent

• 低濃度siRNAで効率的なトランスフェクション
• 細胞生存率が高く初代細胞でも効果的なトランスフェクション
• 浮遊細胞やマクロファージへの効果的なトランスフェクション
• TransFect Protocol Databaseで細胞に最適なプロトコール
• miRNA MimicあるいはmiRNA Inhibitorの効率的なトランスフェクション

HiPerFect Transfection Reagent は陽イオン性および中性脂質のユニークなブレンドで、低濃度のsiRNA を用いた場合でも効果的なsiRNA 取り込みと細胞内でのsiRNA 遊離により高い遺伝子ノックダウン効果を実現します。HiPerFect Transfection Reagent はsiRNA だけでなく、miRNA Mimics、Inhibitorのロースループット／ハイスループットなトランスフェクションにも最適です。HiPerFect Transfection Reagent を用いた細胞特異的なプロトコールはTransFect Protocol Databaseでご覧いただけます。

様々な浮遊細胞株および未分化および分化したマクロファージへのHiPerFect Reagent を用いたsiRNAトランスフェクションがテストされました。多くの細胞株でターゲット遺伝子発現のノックダウンを伴うトランスフェクションが行なわれました（表1）。HiPerFect Reagent によるトランスフェクションは、これらの細胞タイプの多くでエレクトロポレーションより優れた方法です。

HiPerFect Reagent を用いたトランスフェクションに適さない細胞株は表2をご覧ください。

1～50 nMのsiRNA濃度の範囲で効果的なノックダウン（>80%） 結果が得られました（図“ HiPerFect Reagent による効果的なCDC2ノックダウン”）。1 nM siRNAのトランスフェクションでは86％のノックダウン効果が得られ、5 nM siRNAではノックダウン効率は96％に増加しました。RNAi実験の目的により、最適なsiRNA濃度は1 nM （オフターゲット効果のリスクが最小限で効果的なノックダウン；図 “ NHEKの効率的なトランスフェクション”参照）か5 nM（より高いノックダウン効果）を使用できます。

siRNAのトランスフェクションは、そのsiRNAが相同性のない遺伝子あるいは部分的にホモロジーを有する遺伝子に影響を与えるオフターゲット効果を引き起こすことがあります。低濃度のsiRNAを使用することにより、RNAi 実験で誤った結果につながるオフターゲット効果を大幅に回避できることが示唆されてています。HiPerFect Transfection Reagent を用いた場合、わずか10 pMのsiRNAでも効果的なトランスフェクションおよびノックダウン効果が観察されることがありました。HiPerFect Transfection Reagent は、幅広い範囲のsiRNA濃度に対して効率的なsiRNAトランスフェクションを実現するため、研究者が必要とするsiRNA濃度を選択することができます。本試薬は様々な細胞株 （HeLa、HeLa S3、HEK 293、NIH/3T3、Huh-7、HepG2、MCF-7、HUVEC、NHLFなど） へのトランスフェクションに使用できます。

miRNA 研究

microRNA（miRNA）は、siRNAに類似した特徴を持つ内因性のsmall RNA分子に分類されています。miRNAは、発生、分化、アポトーシスのような様々な生物学的なプロセスにおいて重要な役割を果たしています。合成miRNA mimic あるいはmiRNA inhibitorのトランスフェクションは、標的遺伝子や特別な miRNAの役割を解明するために使用される手法です。miRNA mimic は化学的に合成されたmiRNAで、細胞へのトランスフェクション後は内在性のmiRNAと同じ挙動を示します。miRNA inhibitor は、miRNAを特異的に阻害する一本鎖の修飾RNAです。miRNA mimic のトランスフェクション後に遺伝子発現が抑制されたり、miRNA inhibitorのトランスフェクション後に発現が増大すれば、miRNAがその標的遺伝子の調節に関与していることの証拠になります。あるいは、様々なパスウェイにおけるmiRNAの役割は、miRNA mimic あるいはmiRNA inhibitorのトランスフェクション後の特異的な表現型を調べることにより研究できます。多数のmiRNA mimic あるいはmiRNA inhibitor のトランスフェクション後に表現型を調べるためには、スクリーニング実験を実施します。HiPerFect Transfection Reagent は真核細胞への効率的なsiRNAトランスフェクション用に開発された試薬で、miRNA mimic やmiRNA inhibitor のロースループット／ハイスループットなトランスフェクションに最適です。

HiPerFect Transfection Reagent はすぐに使用できる試薬としてお届けします。 希釈したsiRNA／miRNAに試薬を添加、混和し、インキュベートした後、ピペットで複合体を細胞に添加するだけです。トランスフェクションは血清の存在下で行なえるため、細胞から複合体を除去する必要はありません。 HiPerFect Transfection Reagent Handbookに掲載されているプロトコールだけではなく、お客様の細胞種やプレートまたはディッシュのフォーマットに最適なプロトコールが TransFect Protocol Databaseにあります。データベースから実験に必要なトランスフェクション・プロトコールを検索可能です。実験条件を既存のプロトコールに合わせて調整するよりもデータベースが簡単にお客様のニーズにピッタリ合ったプロトコールを提供してくれるため、時間や労力が軽減できます。細胞や核酸のタイプ、プレートフォーマットを入力するだけで、QIAGENのトランスフェクション用プロトコールを印刷あるいは便利なPDFフォーマットでダウンロードできます。TransFect Protocol Databaseは無料で、登録も不要です。

HiPerFect Transfection Reagent はトランスフェクション実験の24時間前に細胞を蒔いておく一般的なトランスフェクション方法でも使用できます。あるいは96ウェルプレートおよび384ウェルプレートでのreverse transfection用プロトコールも用意しています（HiPerFect Transfection Reagent Handbook参照）。これらのプロトコールでは、細胞の播種およびトランスフェクションを同一日に行なえます。siRNA／miRNAをウェルにスポットし、その後HiPerFect Reagent を添加します。コンプレックス形成後、細胞をウェルに添加します（フローチャート “ HiPerFect Transfection Reagenを用いたReverse transfection”）。迅速で簡便なreverse transfectionは簡単に自動化でき、ハイスループット実験に頻繁に使用できます。

 HiPerFect Transfection Reagent は低濃度なsiRNAでも効率的なsiRNAトランスフェクションを実現し、以下のようなアプリケーションに最適です：

• RNA干渉 （RNAi） 研究
• miRNA 研究
• 遺伝子発現および機能解析