EpiTect Control DNA and Control DNA Set

メチル化解析におけるコントロール実験

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EpiTect PCR Control DNA Set (100)

Cat. No. / ID:  59695

Human control DNA set (containing both bisulfite converted methylated and unmethylated DNA and unconverted unmethylated DNA) for 100 control PCRs
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¥61,000
EpiTect Control DNA and Control DNA Setは分子生物学的アプリケーション用であり、疾病の診断、予防、あるいは治療に使用することはできません。

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Features

  • 即使用可能な品質管理されたDNA溶液による簡便化
  • コントロール実験用のBisulfite変換済みのDNA
  • 全てのDNAメチル化解析に最適

Product Details

EpiTect Control DNA は、即使用可能なBisulfite 変換した完全メチル化DNA、Bisulfite 変換した非メチル化DNA およびBisulfite 変換していない非メチル化ゲノムDNA から構成され、メチル化解析の標準化のための信頼できるコントロール反応が可能になります。Bisulfite変換済みのメチル化/非メチル化DNA溶液はEB Buffer(10 mM Tris·Cl)で10 ng/µlに溶解されており、すぐに使用できます。Bisulfite変換していない非メチル化ヒトコントロールDNA 溶液はEB Buffer (10 mM Tris·Cl)で50 ng/μl に溶解されており、すぐに使用できます。

Performance

EpiTect Control DNAsは、プローブベースのリアルタイムPCRによるメチル化解析の定量スタンダード(図 " リアルタイムPCRスタンダード")やHRM(high-resolution melting)法によるメチル化解析の定量スタンダード(図 " HRM定量スタンダード")として最適です。
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Principle

The EpiTect Control DNA Setは、信頼性の高い標準化メチル化コントロール反応に必要なコントロールDNAを全て含んでおり、即使用可能なキットフォーマットになっています。例えば、MSP(メチル化特異的PCR)では、PCRプローブとプライマーがメチル化DNAまたは非メチル化DNAに特異的に結合していることを確認するためにコントロール反応を行なう必要があります(図 "  MSP反応にはEpiTect Control DNA")。そのような反応では、完全にメチル化または非メチル化であるDNAを完全にBisulfite変換したコントロールDNAを様々な濃度に調製する必要があります(図 " EpiTect Control DNAのパイログラム" および " Bisulfite変換および全Bisulfitome増幅 (WBA) DNAのEpiTYPER® MALDI-TOF 解析")。また、このようなコントロールDNAを混合したものは、HRM法またはプローブによるメチル化解析でメチル化の程度を決定する際に定量スタンダードとして使用できます。
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Procedure

エピジェネティクスにおける標準化されたワークフロー

エピジェネティクス情報を得ることは生物学や医学研究における多くの分野(特に、腫瘍学や幹細胞研究、および発生生物学)にとって最も重要です。しかし、DNA メチル化における変化の解析は、サンプル(特に非常に限られた量のサンプル)から再現性のあるデータを得るための標準化された方法がないために非常に困難です。QIAGENが新しく紹介するEpiTectソリューションにより、DNAサンプル採取、安定化、精製からBisulfite処理、リアルタイムPCRやエンドポイントPCR、メチル化解析、シークエンシングまで、標準化されたプレアナリティカル用製品および解析用製品を提供致します。(図 " エピジェネティクスにおける標準化されたワークフロー")。

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Applications

EpiTect Control DNAは以下のような全てのメチル化解析におけるコントロール反応として最適です。

  • MSP用プライマーの特異性の評価
  • HRMやMethyLight PCRにおける定量スタンダード
  • MethyLight PCR用プライマーやプローブの特異性の評価
  • Bisulfite変換反応効率のチェック

Supporting data and figures

Specifications

FeaturesSpecifications
ApplicationsEnd point Methylation Specific PCR (MSP), real-time methylation specific PCR
Number of reactionsfor 1000 control PCRs
Concentration10 ng/µl (1 µg in total) excepted the unmethylated control DNA: 50 ng/µl (10 µg in total)

FAQ

What are the expected PCR results when using EpiTect Control DNA on untreated or bisulfite-converted DNA?

Expected PCR results when using the EpiTect Control DNA Set in combination with the EpiTect MSP Kit can be found in the table below:

 

Type of DNA Primer for unmethylated & unconverted genomic DNA Primer for unmethylated & bisulfite converted target DNA Primer for methylated & bisulfite converted target DNA
Unmethylated & untreated control DNA PCR product NO PCR product NO PCR product
Unmethylated & bisulfite converted control DNA NO PCR product PCR product NO PCR product
Methylated & bisulfite converted control DNA NO PCR product NO PCR product PCR product
No template control NO PCR product NO PCR product NO PCR product

 

 

 

FAQ ID -2011
Can the EpiTect PCR Control DNAs also be used as standard in real-time methylation specific quantification?

Yes, the EpiTect Control DNA and Control DNA Set can be used as standards in real-time methylation specific quantification. For data, please see our EpiTect MethyLight PCR Product Profile.

 

 

 

FAQ ID -2006
Can the EpiTect PCR Control DNAs be used for mouse and rat assays?

No, the EpiTect PCR Control DNA Set is derived from human DNA. No primers for mouse or rat will bind.

 

 

 

 

 

 

 

 

FAQ ID -2008
How long can DNA converted with EpiTect Bisulfite Kits be stored before use in methylation specific PCR with the EpiTect MSP Kit?

We have data for DNA converted with EpiTect Bisulfite Kits showing that the bisulfite treated DNA is stable for 3 years at -20°C before use in methylation specific PCR with the EpiTect MSP Kit, or the EpiTect MethyLight PCR Kit.

 

 

FAQ ID -2002
3341 - How are the EpiTect DNA controls produced and tested?

The genomic DNA is derived from disease free human whole blood from multiple anonymous donors. The DNA is pooled after purification to yield a mixture of individuals (male/female) and the whole genome is represented.   The whole genome is copied stripping the resultant DNA of methylation.

The methylated DNA control is methylated in vitro using SssI methylase. The methylation efficiency is high but not guaranteed to be 100% for every position. Although methylated under optimized conditions for the enzymatic reaction, some positions are as low as 85% as determined by Pyrosequencing.  These sites of lower methylation are not random but rules to predict these low positions are undetermined. 

QIAGEN checks the consistency of EpiTect Control DNA for methylation and bisulfite conversion using an very sensitive real time MSP-PCR assay.  QIAGEN performs several realtime PCR tests to evaluate the bisulfite conversion efficiency as well as the methylation efficiency of the DNAs in the Control DNA Set.  We use test systems specific for genomic DNA to detect unconverted DNA or for converted and unmethylated DNA to detect converted but unmethylated DNA, as well as for converted and methylated DNA.
FAQ - 3341