QuantiFast Multiplex PCR Kits

配列特異的なプローブを用いた迅速なマルチプレックスリアルタイムPCRおよび2ステップ定量RT-PCR

製品

QuantiFast Multiplex PCR Kitsは分子生物学的アプリケーション用であり、疾病の診断、予防、あるいは治療に使用することはできません。

QuantiFast Multiplex PCR Kit (400)

カタログ番号 / ID. 204654

IMPORTANT NOTE: As announced earlier, the production of the QuantiFast kits has been discontinued since mid-2021. Hence, these products will be available only until stocks last. For 400 x 25 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x QuantiFast Multiplex PCR Master Mix (with ROX dye), 2 x 2 ml RNase-Free Water

お問い合わせください

This kit is being phased out. We recommend switching to the QuantiNova successor product. For more information and FAQs on this transition, visit: www.qiagen.com/PCRresource.

QuantiFast Multiplex PCR +R Kit (2000)

カタログ番号 / ID. 204756

IMPORTANT NOTE: As announced earlier, the production of the QuantiFast kits has been discontinued since mid-2021. Hence, these products will be available only until stocks last. For 2000 x 25 µl reactions: 25 ml 2x QuantiFast Multiplex PCR Master Mix (without ROX dye), 1.05 ml ROX Dye Solution, 20 ml RNase-Free Water

お問い合わせください

This kit is being phased out. We recommend switching to the QuantiNova successor product. For more information and FAQs on this transition, visit: www.qiagen.com/PCRresource.

特徴

同一チューブ内で再興種類のターゲットを高感度で検出
時間を最大50％まで短縮し迅速な結果
至適化実験なしに良好なマルチプレックスPCRを実現
発現量に差異がある複数のターゲットでも信頼性のある定量が可能

製品詳細

QuantiFast Multiplex PCR Kit は、マルチプレックスリアルタイムPCRまたは 2ステップRT-PCRにより、同一チューブ中で最高4種類のcDNAまたはゲノムDNAターゲットを高速かつ確実に定量します。Q-bondテクノロジーと至適化済みのマスターミックスにより、短いRamping Time機能を持つ高速サイクラーだけではなくほとんどのサイクラーで性能を損なうことなく高速なマルチプレックスPCR を行なえます。ホットスタートと即使用可能なマスターミックス中の独自のPCRバッファーシステムの組み合わせは、至適化なしにほとんどのサイクラーで高感度なqRT-PCRを実現します。2種類のキットが入手できます：蛍光補正のためにROXが必要なサイクラー用QuantiFast Multiplex PCR Kit およびその他のサイクラー用のQuantiFast Multiplex PCR +R Kit。マスターミックスは2～8 ℃で保存でき、簡便に取り扱えます。

パフォーマンス

QuantiFast Multiplex PCR Kit に添付の特化されたマスターミックスにより、迅速なマルチプレックス反応のセットアップができ、singleplex PCRデータに匹敵するマルチプレックスPCRデータを提供し、初めての実験でも良好な結果が得られます（図 " triplexとsingleplex PCRで同等の結果を実現"）。本キットを用いると、テンプレート量のわずかな差異を明確に判別できます。QuantiFast Multiplex PCR Kitsは、発現量が大きく異なる2種類のターゲットで、連続2倍希釈したテンプレート量でさえも正確に定量できます（図 " テンプレート量の連続2倍希釈液でも直線性の高いC_T 値"）。

QuantiFast Multiplex PCR Kit はPCR時間を最大50％まで短縮できるため、結果がより速く得られます（図 " PCR時間を顕著に短縮"）。わずか10コピーのターゲットを60分で検出できます（図 " 広いダイナミックレンジを持つ高感度なduplex PCR"）。従って、サンプル数を大幅に増やしたり、他の実験者と1 台のサイクラーを効率的に共有できます。最高4 種類のターゲットのマルチプレックスリアルタイムPCRにおいて性能を損なうことなく、迅速に結果が得られます（図" 感度を損なわずに増幅"）。

原理

QuantiFast Multiplex PCR Kitsでは最適化実験の必要はなく、標準サイクラーまたは高速サイクラーのどちらでも幅広いダイナミックレンジの高感度かつ迅速な結果が得られます（フローチャート " QIAGEN multiplex kits"）。特別に開発された高速PCR 用バッファーは斬新なQ-Bondを含有し、変性、アニーリングおよびエクステンション時間を顕著に短縮します（図" プライマーの高速なアニーリング"）。

別々の反応ではなく同一反応内でコントロール遺伝子と標的遺伝子を増幅することで、マニュアルでの作業によるエラーが最小限に抑えられ、遺伝子定量の信頼性が高くなります。QuantiFast Multiplex PCR Bufferに入っている画期的な合成添加剤Factor MPとK⁺およびNH₄⁺のイオン配合比により、プライマーとプローブが核酸テンプレートに効率的かつ安定してアニーリングし、高いPCR効率と感度を実現します（図 " ユニークなPCRバッファー"）。さらに、HotStarTaq Plus DNA Polymeraseは厳密なホットスタートを行なえるため、非特異的な産物の形成を抑えます。

2x QuantiFast Multiplex PCR Kitの成分*
成分	特長	利点
HotStarTaq Plus DNA Polymerase	95℃、5分の活性化	室温での定量PCRのセットアップ
QuantiFast Multiplex PCR Buffer	NH₄⁺イオンおよび K⁺イオンの配合バランス	特異性の高いプライマーのアニーリングで信頼性の高いPCR結果
	合成添加剤Factor MP	同一チューブで4遺伝子まで信頼できるマルチプレックス解析が可能
	ユニークなQ-Bond を含む	PCR反応時間が短縮されるため迅速に結果が得られ、1日あたりの反応数を増やせる
ROX 色素^†	Applied Biosystems製装置およびAgilent製装置での蛍光シグナルを補正	ROXが必要なサイクラーで正確な定量。他のリアルタイムサイクラーでの反応を妨害しない

操作手順

QuantiFast Multiplex PCR Kit は反応条件やサイクリング条件の至適化が不要で即使用可能なマスターミックスです。テンプレートRNA、プライマープローブセットをマスターミックスに加えハンドブックのプロトコール通りに操作するだけで、どのリアルタイムサイクラーでも迅速に信頼性の高い結果が得られます。マスターミックス中にROX passive reference dye が入ったキットまたは入っていないキットをお求めいただけますので、実質的にあらゆるリアルタイムサイクラーで使用できます（表参照）。ROX濃度が至適化されているため、コピー数が少ない場合の検出でも自動データ解析を行なえます。

正しいQuantiFast Multiplex PCR Kitの選択ガイド
ROX 色素	キット	対応するサイクラー
マスターミックスに添加済み	QuantiFast Multiplex PCR Kit	Applied Biosystems 7500以外のApplied Biosystemsの全てのサイクラー
別チューブで添付	QuantiFast Multiplex PCR +R Kit	Applied Biosystems 7500 および Bio-Rad、Cepheid、Eppendorf、QIAGEN、Roche、Agilent、その他の会社のサイクラー

2ステップリアルタイムRT-PCRで最適な結果を得るために、QuantiTect Reverse Transcription Kitを使用してcDNAを合成することをお奨めします。QuantiTect Reverse Transcription Kitは、ゲノムDNAの混入を除去しながらわずか20分で迅速にcDNA を合成します。

QuantiFast Probe Assaysは加水分解プローブ検出をベースにしたデザイン済みのゲノムワイドなアッセイです。QuantiFast Probe Assaysは、duplexの2ステップリアルタイムRT-PCRで確かな結果が得られるようQuantiFast Multiplex PCR Kit に同梱されています。

アプリケーション

QuantiFast Multiplex PCR Kits はほとんどのリアルタイム用サイクラーでcDNAのマルチプレックス遺伝子発現解析やゲノムDNAターゲットの解析に使用可能です。対応する装置は、Applied Biosystems、Bio-Rad、Cepheid、Eppendorf、Roche社製サイクラーです。Rotor-Gene Q およびその他のRotor-Geneサイクラーに関しては、超高速サイクリング用に特化された Rotor-Gene Multiplex PCR Kitを推奨します。

裏付けデータと数値

Significantly reduced PCR times.

QuantiFast Multiplex Kits reduce total PCR run time by up to 50% in real-time two-step RT-PCR (40 cycles run; comparison with QuantiTect Multiplex Kits). I: iCycler iQ; L1: LightCycler 480; L2: LightCycler 2.0; A1: ABI PRISM 7900; A2: Applied Biosystems 7500 Fast System; M: Mx3005P.

Comparable results in triplex and singleplex PCR.

Sensitive duplex PCR and wide dynamic range.

Linear CT values over twofold decreases in template.

仕様

特徴	仕様
Applications	Quantification of cDNA or genomic DNA targets in a multiplex real-time PCR
Thermal cycler	Real-time cyclers dedicated for multiplex PCR (e.g., most Applied Biosystems real-time PCR cyclers, Roche LightCycler® 480, iCycler iQ®, Rotor-Gene)
Real-time or endpoint	Real-time
Sample/target type	cDNA, DNA
SYBR Green I or sequence-specific probes	Sequence-specific probes
Reaction type	Real-time two-step RT-PCR
Single or multiplex	Multiplex
With or without ROX	Available with ROX in master mix and with ROX as separate vial

リソース

Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.

For quantitative, multiplex, real-time PCR and two-step RT-PCR with fast cycling using sequence-specific probes

よくある質問

Our unique multiplex PCR buffer system with ammonium and potassium ions and Factor MP has been further optimized in QuantiFast and Rotor-Gene Kits. We have also discovered Q-Bond, a buffer component which supports the rapid formation of the polymerase–primer–template complex, leading to reduced annealing times.

FAQ-1430

No, that is not necessary. Simply use the primer concentrations specified in the protocols in the handbook supplied with your QuantiFast Multiplex PCR Kit.

FAQ-1976

No, the QuantiFast Multiplex PCR Kit cannot be used for 4plex real-time PCR on the ABI PRISM 7000, 7700, or 7900 instruments. Due to hardware limitations, the maximum capacity of these real-time cyclers is triplex PCR.

FAQ-1978

LightCycler 1.5: We do not recommend performing multiplex, real-time PCR using TaqMan® probes on this LightCycler system due to the limitations of its optical detection system
LightCycler 2.0: Information on using the QuantiFast Multiplex PCR +R Kit with the LightCycler 2.0 system is provided in the QuantiFast Multiplex PCR Handbook.

See trademarks.

FAQ-1979

Yes, we offer trial-size kits for 80 x 25 µl reactions; cat. no. 204652 for the QuantiFast Multiplex PCR Kit, and cat. no. 204752 for the QuantiFast Multiplex PCR +R Kit.

FAQ-1981

Rotor-Gene Kits are specifically developed for the Rotor-Gene Q PCR Cycler. The unique rotary system of the cycler combined with the kits’ proprietary buffer system enable ultrafast cycling. Rotor-Gene Kits do not contain ROX dye since no normalization to a passive reference is required. Also, Rotor-Gene Kits do not contain dUTP; therefore, UNG pretreatment is not possible.

FAQ-2119

QuantiFast Probe Assays are only sold in combination with optimized real-time RT-PCR master mixes and cannot be sold as stand-alone assays.

For one-step RT-PCR with singleplex detection: QuantiFast Probe RT-PCR Plus Kit
For one-step RT-PCR with duplex detection: QuantiFast Probe RT-PCR Plus Kit
For two-step RT-PCR with singleplex detection: QuantiFast Probe PCR Kit
For two-step RT-PCR with duplex detection: QuantiFast Multiplex PCR Kit

FAQ-2360

Yes, please visit our website section 'Using endogenous control genes in real-time RT-PCR' for general information. It provides a list of relative gene expression levels for commonly used human and mouse reference genes.

We offer a set of ready-to-order control genes for use in SYBR Green based as well as probe based real-time RT-PCR.

QuantiTect Primer Assays are primer sets for use in SYBR Green based real-time RT-PCR analysis.
QuantiFast Probe Assays are primer-probe sets for use in dual-labeled probe based real-time RT-PCR.

In addition, you may want to refer to the following citations on reference gene selection for quantitative real-time PCR:

• Vandesompele J, De Preter K, Pattyn F, Poppe B, Van Roy N, DePaepe A, Speleman F [2002]: Accurate normalization of real-time quantitative RT-PCR data by geometric averaging of multiple internal control genes. Genome Biol 2002, 3:0034.

• Radonic A, Thulke S, Mackay IM, Landt O, Siegert W, Nitsche A., 2004. Guideline to reference gene selection for quantitative real-time PCR. Biochem Biophys Res Commun. 313(4): 856-62.

• Katrien Smits,Karen Goossens, Ann Van Soom, Jan Govaere, Maarten Hoogewijs, Emilie Vanhaesebrouck,Cesare Galli, Silvia Colleoni, Jo Vandesompele, and Luc Peelman [2009]Selection of reference genes for quantitative real-time PCR in equine in vivo and fresh and frozen-thawed in vitro blastocysts. BMC Res Notes. Dec 11;2:246.

FAQ-2371

We got comparable results on ABI 7500 and the ViiA7 using the QuantiFast Multiplex PCR +R Kit master mix with low ROX concentration (ROX added to NoROX master mix) and the protocol for the ABI 7500.

FAQ-2653

The Ct or threshold cycle value is the cycle number at which the fluorescence generated within a reaction crosses the fluorescence threshold, a fluorescent signal significantly above the background fluorescence. At the threshold cycle, a detectable amount of amplicon product has been generated during the early exponential phase of the reaction. The threshold cycle is inversely proportional to the original relative expression level of the gene of interest.

FAQ-2682

Replicates in real-time PCR may have different plateau heights due to differences in the reaction kinetics for each sample. Even though replicates start out with identical template amounts, the rate at which reagents are being depleted, and the point when exponential accumulation of PCR product stops and becomes linear, differ between replicates. This will result in different plateau heights, the stage where PCR reactions have come to a halt, and little or no additional PCR product is being amplified. You can find further information in Chapter 'Quantification of target amounts' of our Brochure "Critical Factors for Successful Real-Time PCR".

FAQ-539

Make sure that template, primers, probes, and amplification reagents are stored correctly and avoid multiple freeze–thaw cycles for oligonucleotides and template. Check the performance of your real-time instrument as some instruments require the halogen lamp to be frequently replaced. Lasers must also be replaced occasionally.

FAQ-589

The presence of ROX as passive reference dye in the Master Mix of the QuantiTect Multiplex PCR Kit and the QuantiFast Mutliplex PCR Kit limits the use of these kits to triplex PCR on 4-channel real-time cyclers. This is because the ROX dye occupies the channel for detecting probes labeled with ROX, Texas Red, or other equivalent dyes.

However, 4-plex PCR is possible on on instruments equipped with at least 5 channels. Alternatively, if you have a 4-channel real-time cycler that does not use ROX passive reference dye (e.g., iCycler iQ, Rotor-Gene 3000, Mx4000, Mx3000P, Smart Cycler II, LightCycler 2.0), you can use the QuantiTect Multiplex PCR NoROX Kit or the QuantiFast Multiplex PCR +R Kit to perform 4-plex PCR.

Please see table “Real-Time, Multiplex PCR on a Wide Range of Real-Time Cyclers” for compabilities of the QuantiTect Multiplex kits with different real-time cyclers.

FAQ-715

Shorter amplification products facilitate high PCR efficiencies. Ideally, amplicon length should be less than 150 bp for optimal amplification efficiency. PCR efficiencies close to 100% are a crucial prerequisite for accurate quantification of target copy numbers in real-time PCR.

FAQ-751

TB Management

Transplant

Infectious Disease

Oncology

Sexual & Reproductive Health

Sample Processing

Solutions for Laboratory-Developed Tests