miRCURY LNA miRNA Power Target Site Blockers

miRCURY LNA miRNA Power Target Site Blockerは、mRNAのmiRNA標的部位に結合してmiRNAがその部位にアクセスできないようにするアンチセンスオリゴヌクレオチドです。このようなメカニズムによって、単一ターゲットでのmiRNAの効果を評価することができます。miRCURY LNA miRNA Power Target Site Blockerは超低濃度でも効果的で、またLNAの組み込みによる高親和性によって、標的部位ブロッカーが標的部位に対してmiRNAよりも優位になります。

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標的部位ブロッカーでmiRNAの機能を解明

miRNAは通常、複数のターゲットの遺伝子発現を制御し、miRNAを阻害すると、これらすべてのターゲットの抑制が解除されます。したがって、miRNA阻害時に観察される表現型は、複数のターゲットの抑制解除の複合的な結果です。（図  miRNA阻害剤と標的部位ブロッカーを参照）。しかしながら、これらのターゲットのいくつかの抑制解除は、表現型に大きく影響することがあります。miRNAの機能を理解するためには、このようなターゲットを特定することが重要です。
miRCURY LNA miRNA Power Target Site Blockerは、以下の目的で使用することができます。

• miRNA阻害によって観察される表現型に関与する経路を決定する
• 複数の予測ターゲットを含む経路において、最も重要なmiRNA/mRNA相互作用を決定する

標的部位ブロッカーの適用例が、図 標的部位ブロッカーの適用例 – 経路XおよびYと 標的部位ブロッカーの適用例 – 経路Zで説明しています。
図 CAV1標的部位ブロッカーは、多くの重要な側面でmiR-199a-5p阻害剤の表現型を模倣しますは、標的部位ブロッカーの使用例を示しており、miR-199a-5pが肺線維芽細胞においてTGFβシグナリングの重要なエフェクターとしてどのように機能するかを明らかにしています。

標的部位ブロッカーとは

miRCURY LNA miRNA Power Target Site Blockerは、mRNAのmiRNA標的部位に結合してmiRNAがその部位にアクセスできないようにする、 LNA強化アンチセンスオリゴヌクレオチドです。これにより、研究者は単一ターゲットに対するmiRNAの効果を評価することができます。対照的に、miRNAを阻害したときに観察される表現型は、すべてのターゲットに対するそのmiRNAの効果を組み合わせた複合効果を反映しています。

LNA強化標的部位ブロッカー

miRCURY LNA miRNA Power Target Site BlockerにLNAの組み込まれるということは、miRNA/RISC複合体とmiRNAターゲットサイトをより効果的に競合することを意味します。さらに、LNAがLNA/DNAミクスマー全体に分散しているため、アンチセンスオリゴヌクレチオドがmRNAのRNase H依存性分解を引き起こすこともありません。その結果、TSBはmiRNAを介した翻訳抑制を防ぎ、ターゲットmRNAによってコードされるタンパク質の発現を増加させます（図 LNA強化標的部位ブロッカーは、miRNA結合部位をRISCと効果的に競合する）。

再懸濁後、miCURY LNA miRNA Target Site Blockerは、トランスフェクション試薬、またはエレクトロポレーションによって細胞に導入されます。標的部位ブロッカーの表現型効果は、通常トランスフェクション後24時間から72時間後に評価されます。細胞分化アッセイなどの一部のアプリケーションにおいて、表現型の読み取りはトランスフェクション後7日から10日かかることもあります。

miRCURY LNA miRNA Target Site Blockerは、次の目的で使用できます。

• miRNA阻害によって観察される表現型に関与する経路の決定
• 複数の予測ターゲットを含む経路において、最も重要なmiRNA/mRNA相互作用の決定