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特徴
- 機械的な剪断を最小限に抑えたため、最大150 kbの長さの高分子量DNAを分離
- フェノール抽出およびクロロホルム抽出は不要
- 利便性に優れ、複数のサンプルの並行処理が可能
製品詳細
QIAGEN Genomic-tipsは、重力流動式の陰イオン交換チップで、広範囲の生物学的サンプルからゲノムDNAを効率的に精製することができます。精製されたDNAは最大150 kb、平均50～100 kbの長さとなります。
パフォーマンス
QIAGEN Genomic-tipのプロセスは非常に穏やかで、DNAの剪断はほとんど発生せず、無視できる程度です。QIAGEN Genomic-tipで精製されたDNAは最大150 kb、平均で50～100 kbの長さとなります（図最大150 kbのゲノムDNA」を参照）。このDNAにはRNA、タンパク質、代謝産物の汚染がなく、A260 / A280の割合は1.7～1.9の範囲になります。
QIAGEN Genomic-tipは、あらゆる調製のニーズに応えるため、さまざまなサイズで提供されており、それぞれのサンプルタイプに対するゲノムDNA調製の詳細なプロトコールを含む総合的なハンドブックが付属しています。血液、組織、培養細胞、酵母、細菌などに必要な溶解緩衝液は、別売りのGenomic DNA Buffer Setとしてお求めいただけます。
精製されたDNAは細菌ゲノムの直接シークエンシングに使用されています（図「 細菌ゲノムDNAの直接シークエンシング」を参照）
QIAGEN Genomic-tipの仕様
| サンプルの由来 | 量 | 収量（µg） | ||||
| Genomic-tip 20/G | Genomic-tip 100/G | Genomic-tip 500/G | Genomic-tip 20/G | Genomic-tip 100/G | Genomic-tip 500/G | |
| 全血（ヒト） | 1 ml | 5 ml | 20 ml | 15～20 | 80～100 | 350～400 |
| 培養細胞（HeLa） | 5 x 106 | 2 x 107 | 1 x 108 | 15～20 | 80～100 | 350～450 |
| 組織（肝臓） | 15 mg | 80 mg | 350 mg | 15～20 | 80～100 | 350～450 |
| 酵母（出芽酵母） | 1 ml | 5 ml | 20 ml | 18～20 | 85～95 | 350～450 |
| グラム陰性菌（E. coli） | 0.6～1.2 ml | 3～6 ml | 15～30 ml | 16～20 | 85～95 | 300～400 |
| グラム陽性菌（枯草菌） | 1.2～1.8 ml | 6～9 ml | 30～45 ml | 16～20 | 85～95 | 300～400 |
原理
QIAGEN Genomic-tipは、フェノールやクロロホルムを使用せず、独自のQIAGEN陰イオン交換技術によって、広範囲な生物学的サンプルから高分子量DNAを抽出できます。溶解緩衝液はさまざまなサンプルタイプに最適化されており、ヌクレアーゼ、ヒストン、DNA結合タンパク質に加え、潜在的に感染性を持つウイルス粒子などを即座に変性させます。バッファーで調整されたpHと低塩条件下で、DNAはカラム内のQIAGENレジンに結合します。同時に、タンパク質、炭水化物、代謝産物などのその他の細胞成分は流れ落ち、精製されたDNAは高塩バッファーに溶出します。Genomic-tipは重力流で作動し、乾燥することなく放置できるため、手作業時間を最小限に抑え、複数のサンプルを同時に処理するのに理想的な方法です。
操作手順
サンプルはまず溶解され（組織サンプルの場合は機械的に破砕）、同時にすべてのタンパク質が適切な溶解緩衝液で変性されます（フローチャートQIAGEN Genomic-tipのプロセスを参照）。次に、QIAGEN ProteaseまたはプロテイナーゼKが添加され、適切なインキュベーション時間が経過した後、溶解物をQIAGEN Genomic-tipにロードします。DNAはカラムに結合し、他の細胞成分は通過します。残留する汚染物質を洗い流した後、高純度の高分子量DNAが溶出し、イソプロパノールを加えることで沈殿します。全プロセスの実際の操作時間は、細菌で20分、血液および培養細胞で30分、組織および酵母で40分です。
アプリケーション
QIAGEN Genomic-tipで精製されたDNAは、次のアプリケーションで使用するのに最適です。
- 次世代シークエンシングとロングリードシークエンシング
- RFLP解析
- 遺伝子ターゲティング解析
- 遺伝子組み換え動物のスクリーニング
- DNAフィンガープリント研究
- サザンブロッティング
裏付けデータと数値
最大150 kbのゲノムDNA。
QIAGEN Genomic-tipsを用いて精製したDNA（2 µg）のパルスフィールドゲル電気泳動。M: マーカー。
リソース
ユーザーが開発したプロトコール (7)
クイックスタートプロトコール (2)
補足的プロトコール (1)
装置の技術文書 (1)
キットハンドブック (1)
安全データシート (1)
Safety Data Sheets (1)
Certificates of Analysis (1)
出版物
Similarity and differences in the Lactobacillus acidophilus group identified by polyphasic analysis and comparative genomics.
J Bacteriol; 2006; 189 (4):1311-21 2006 Dec 1 PMID:17142402
A genome-wide map of diversity in Plasmodium falciparum.
Nat Genet; 2006; 39 (1):113-9 2006 Dec 10 PMID:17159979
Development and evaluation of a loop-mediated isothermal amplification method for rapid diagnosis of Bordetella pertussis infection.
J Clin Microbiol; 2006; 44 (5):1899-902 2006 May PMID:16672435
Arsenic detoxification and evolution of trimethylarsine gas by a microbial arsenite S-adenosylmethionine methyltransferase.
Proc Natl Acad Sci U S A; 2006; 103 (7):2075-80 2006 Feb 1 PMID:16452170
Validation of a 21-locus autosomal SNP multiplex for forensic identification purposes.
Forensic Sci Int; 2005; 154 (1):62-77 2005 Jan 20 PMID:16182950
よくある質問
What is the size of genomic DNA that is obtained with QIAGEN Genomic-tips?
Do you have a protocol for the purification of DNA from fruit flies?
What do you recommend for the cleanup of genomic DNA (gDNA)?
Do you have a protocol for the isolation of genomic DNA from frozen clotted blood?
Do you have a protocol for isolation of genomic and viral DNA from lymphocytes using QIAGEN Genomic-tips?
Do you have a protocol for isolation of genomic and plasmid DNA from cell cultures using QIAGEN Genomic-tips?
Do you have a protocol for isolation of genomic DNA from flies using QIAGEN Genomic-tips?
Do you have a protocol for isolation of genomic DNA from insects?
Do you have a protocol for isolation of genomic DNA from plants and filamentous fungi using QIAGEN Genomic-tips?
Do you have protocols for the isolation of genomic DNA from tissue using QIAGEN-tips 2500 (Mega) and 10000 (Giga)?
Do you have a protocol for the isolation of genomic DNA from fungi?