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特徴
- 超清浄環境で製造された（Ultraclean production: UCP）試薬および容器
- 低い発現量のターゲットを対象とするRNASeq のために、外因性核酸を含まないRNA 精製を実現
- 微量スタートサンプルからも一定したRNA 収量
製品詳細
RNeasy UCP Micro Kit は、少量の生体サンプルからRNA（最大45 μg）を精製するためにデザインされています。 スピンカラムおよびバッファーは超清浄処理が施され、外因性核酸は除去されています。RNeasy UCP Micro テクノロジーは、超清浄処理されたシリカゲルメンブレンによる選択的な結合およびマイクロスピン技術のスピードを兼ね備えています。 RNA をRNeasy UCP MinElute メンブレンに選択的に結合させる条件を作り出すために、ウルトラクリーンなグアニジンチオシアネートを含むBuffer RULT とエタノールをサンプルに添加します。 次に、サンプルをRNeasy UCP MinElute Spin Column にアプライし、RNA をシリカメンブレンに結合させます。 共に精製される微量のDNA は、RNeasy UCP MinElute Spin Column でDNase 処理によって除去されます。 DNase およびあらゆる夾雑物は、ウルトラクリーンな洗浄バッファーRUWT およびRUPE で洗い流され、高品質のトータルRNA は超純水で溶出されます（図 "RNeasy UCP Micro Kit 操作手順"）。 RNeasy UCP Micro 法では、200 ヌクレオチドより長いすべてのRNA 分子が精製されます。 この手順は、ほとんどの200 ヌクレオチド以下のRNA が選択的に除外されるので、mRNA が選択的に濃縮精製されます。RNAlater RNA Stabilization Reagent またはAllprotect Tissue Reagent を使用して、組織サンプルを簡便に安定化させ、TissueRuptor またはTissueLyser システムを使用して効率的に破砕することができます。
パフォーマンス
RNeasy UCP Micro Kit は、少量のサンプルから極めて再現性の高いトータルRNA 収量（> 200 nt）を提供します。 例えば微量な細胞や少量の組織から、トータルRNA を確実に精製できます。 RNeasy UCP Micro Kit は、カラム上でゲノムDNA を効率的に分解することによって、リアルタイムRT-PCR などの定量的遺伝子発現解析で最高の感度を実現します。 特別な超清浄処理により製造されたキットは、外因性核酸のコンタミネーションやその後の分析結果のリスクを最小限にします。
原理
RNeasy UCP Micro Kit は、微量の培養細胞や組織、生体サンプルからのトータルRNA の精製、およびNGS ディープシークエンシングなどの高感度アプリケーションで用いるためにデザインされています。 キットは、特別な超清浄処理により、RNeasy UCP MinElute Spin Column やキットコンポーネントから残留DNA/RNA が除去されています。そのため、NGS などのダウンストリームアプリケーションにおいては、リード数を増大させます。 RNeasy テクノロジーでは、グアニジンイソチオシアネート溶解法と、シリカゲルメンブレンによる迅速な精製法を組み合わせることにより、トータルRNA の精製を簡便に行なうことが可能です。 RNeasy UCP MinElute Spin Column のユニークなデザインによって、10 μl という最小限の溶出液量でRNA を濃縮できるようになっています。 少ない溶出量で済むため、ダウンストリームアプリケーションにおいて反応液量を少量に保つことができ、反応効率が増加します。 さらに、残存した外因性核酸などのバックグラウンドを最小限にした本キットは、NGS などのダウンストリームアプリケーションに最適なサンプルを提供します。
操作手順
RNeasy UCP Micro Kit は、微量サンプルからトータルRNA を精製するためにデザインされています。サンプル（< 5 mgの組織、または< 5 × 105 個の細胞）を溶解し、その後ホモジナイズします。ライセートにエタノールを添加して最適な結合条件にします。その後ライセートをRNeasy UCP MinElute Spin Column にアプライすると、RNA（最高45 μg）がシリカメンブレンに結合します。高感度なアプリケーション向けに、RNeasy UCP Micro Kit に含まれているRNase-free DNase によって、ゲノムDNA をカラム上で簡単かつ効率的に分解することができます。DNase と他の全ての夾雑物は効率的に洗い流され、最後に濃縮された高純度RNA は10〜14 μl の水で溶出されます。
アプリケーション
RNeasy Micro UCP Kit を用いて少量の溶出量（10 μl）で精製したRNA は純度および再現性が高く、わずか1 個の細胞を用いたリアルタイムRT-PCR のような高感度な遺伝子発現定量解析に最適です。
裏付けデータと数値
Linearity over a broad dilution range.
Total RNA was purified from 10‐fold serial dilutions of Jurkat cells
using the RNeasy UCP Micro Kit. The β‐actin transcript was detected even down to one cell by real‐time
RT‐PCR, and reproducible CT values were observed at each dilution, indicating the absence of inhibition.
仕様
| 特徴 | 仕様 |
|---|---|
| Applications | Next-generation sequencing, end-point RT-PCR, quantitative, real-time RT-PCR, array analysis |
| Format | Spin column |
| Yield | Varies (depends on sample type, size and RNA contents) |
| Sample amount | <5 mg tissue or 5 x 105 cells |
| Time per run | 30–40 minutes |
| Main sample type | Tissue, cells, low biomass samples |
| Processing | Manual |
| Technology | Silica technology, ultra-clean production |
| Elution volume | 10–20 µl |
| Purification of total RNA, miRNA, poly A+ mRNA, DNA or protein | RNA (> 200 nt, to enrich mRNA) |
リソース
安全データシート (1)
キットハンドブック (1)
クイックスタートプロトコール (1)
Safety Data Sheets (1)
Certificates of Analysis (1)