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TopTaq Master Mix Kit

Read phase-out notice below
For highly reliable end-point PCR with unrivaled ease of use

  • Ready-to-use master mix with minimal pipetting steps
  • Fridge storage eliminates thawing time
  • Reliable high-yield PCR performance
  • Convenient room-temperature handling
  • Optimized protocol suitable for all PCR assays
The TopTaq Master Mix Kit offers maximum convenience by combining all the benefits of specific TopTaq DNA Polymerase with the advantage of a ready-to-use master mix. It contains TopTaq DNA Polymerase, the unique TopTaq PCR Buffer that minimizes the requirement for optimization, and dNTPs. The unique TopTaq Stabilizer included in the enzyme storage buffer allows storage of TopTaq Master Mix at 4°C and reaction setup at room temperature, without time-consuming thawing of reagents. Providing all components in a ready-to-use master mix reduces pipetting steps, which lowers the risk of contamination. High yields of PCR product are achieved, even after storing the TopTaq Master Mix for extended periods of time at 25°C or 4°C.

IMPORTANT NOTE: This product is phasing-out until October 15, 2020, and afterward, available only until stocks last. Visit the product page of the successor kit to view improved features or to request a trial kit.

 

For more information and FAQs on this transition, visit: www.qiagen.com/PCRresource.

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製品名 Cat. no. List price:
TopTaq Master Mix Kit (250)
For 200 x 50 µl reactions: 2x TopTaq Master Mix containing 250 units of TopTaq DNA Polymerase in total, 10x CoralLoad Concentrate, and RNase-Free Water
 200403
¥25,500
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TopTaq Master Mix Kit  は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。


  • Main Image Navi
保存条件に関わらず高収量のPCR 産物。|簡便なCoralLoad Concentrate。|TopTaq 操作手順。|至適化不要で高収量なPCR 産物|プライマーのアニーリングにおける特異性が増加。|4℃で安定化。|
－20℃、4℃、25℃で4ヶ月保存したTopTaq Master Mixを用いてPCRを行なった。ヒトゲノムDNAから2種類の異なる遺伝子（prp, 750 bp およびHugL, 1200 bp）を、同一の至適化済みプロトコールに従って増幅した（duplicates で示す）。結果は、特異的なPCR産物が高収量で得られることを示した。[A] QIAxcelシステムにより作成したゲルイメージ。マーカー：GelPilot 1kb Plus MarkerおよびQX Alignment Marker 15 bp/10 kb。[B] QIAxcelシステムは、1回の操作で最高96サンプルまでのキャピラリー電気泳動を高い分離能で実現する完全自動システムである。|CoralLoad PCR Buffer [A] は、2種類のゲルマーカー色素を含んでおり[B] 、PCR産物を即ゲルにアプライでき、DNAの泳動を簡単に可視化できる。|TopTaq DNA Polymerase は、本酵素の保存用バッファーに含まれているTopTaq Stabilizer のユニークな特性により、4 ℃保存が可能な初めてのPCR 増幅酵素である。TopTaq Stabilizer がTopTaq DNA Polymerase に結合することにより、ポリメラーゼの不活性化を防ぐ。低温でポリメラーゼがテンプレートDNAやプライマーと結合することも防御する。最初の変性ステップの際に、TopTaq Stabilizer はポリメラーゼ活性を低下することなくポリメラーゼから遊離する。この特性により、反応をセットアップに氷は不要である。 また、試薬の解凍に必要な時間を節約できる。|[A]  100 bp から2 kb までの大きさの14 種類のPCR 産物を哺乳動物ゲノムDNAから増幅するためにTopTaq DNA Polymeraseを用いた。 PCRは、スタンダードなプロトコールに従い同一のサイクリング条件を用いた。[B]  図A のレーン11 ～ 14と同じ4 種類のPCR産物を表記のメーカーのDNA ポリメラーゼを用いて同一サイクリング条件で増幅した。TopTaq DNA Polymerase（QIAGEN）はフラグメントのサイズに関わらず高い収量で特異的なPCR 産物を増幅した。|QIAGEN PCRバッファー中のアンモニウムイオンとカリウムイオンにより、プライマーのアニーリングにおける特異性が増加。K+ はDNA バックボーンのリン酸基（P–)）に結合し、テンプレートへのプライマー·アニーリングを安定化する。サーマルサイクリング条件下では、アンモニウムイオンおよびアンモニアの両方として存在するNH4+は、塩基（B）間の水素結合に相互作用するため、ミスマッチの塩基間の水素結合を不安定にする。これら2 種類の陽イオンの組み合わせ効果により、幅広い温度範囲において非特異的なプライマー·テンプレート結合に対して特異的な結合の比率が高く保たれる。|[A]  TopTaq DNA Polymerase の表面に付着した低分子量の分子（TopTaq Stabilizer）は、ポリメラーゼを4 ℃あるいは室温で安定化する。[B]  高温ではポリメラーゼ活性を低下することなくTopTaq Stabilizer はポリメラーゼから完全に遊離する。|
パフォーマンス
TopTaq Master Mix Kit is used for standard and specialized end-point PCR applications without the need for optimization. High yields of PCR product are achieved, even after storing TopTaq Master Mix for 4 months at 25°C or 4°C, demonstrating the fact that TopTaq Master Mix offers a very robust and reliable amplification system (see figure Reliable high-yield PCR). TopTaq Stabilizer binds to TopTaq DNA Polymerase, preventing polymerase inactivation during long-term storage. With its balanced potassium and ammonium ions, the unique PCR buffer included in the master mix promotes specific primer–template annealing and simultaneously reduces nonspecific annealing. TopTaq DNA Polymerase outperformed DNA polymerases tested from other suppliers and ensures high yields of specific products, even when using low template amounts, and independent of fragment size (see figure High PCR product yields without optimization).
原理

TopTaq Master Mix Kit has been developed by QIAGEN to provide highly reliable end-point PCR with unrivaled ease of use. Until the development of the TopTaq PCR system, all PCR enzymes required storage at –20°C. Due to the unique proprietary TopTaq Stabilizer contained in the enzyme storage buffer, TopTaq Master Mix Kit is the first PCR kit that can be stored at 4°C. This ready-to-use master mix format ensures greater convenience. High yields of specific products are achieved due to TopTaq DNA Polymerase, even when amplifying fragments of different sizes (see figure "High PCR product yields without optimization").

TopTaq PCR Buffer

The innovative TopTaq PCR Buffer facilitates the amplification of specific PCR products. During the annealing step of every PCR cycle, the buffer greatly increases the ratio of specific primer binding over nonspecific primer binding. Owing to a uniquely balanced combination of KCl and (NH4)2SO4, the PCR buffer provides stringent primer-annealing conditions over a wider range of temperatures and Mg2+ concentrations than conventional PCR buffers (see figure "Increased specificity of primer annealing"). The need to optimize PCR by varying the annealing temperature or the Mg2+ concentration is dramatically reduced, or often not required.

TopTaq Stabilizer

TopTaq Stabilizer binds to TopTaq DNA Polymerase, preventing polymerase inactivation during long-term storage (see figure "Stabilization at 4°C"). Template DNA and primers are also prevented from binding to the polymerase at low temperatures. During the initial denaturation step, TopTaq Stabilizer freely dissociates from the polymerase without compromising polymerase activity.  

CoralLoad Concentrate

For enhanced convenience, TopTaq Master Mix Kit includes CoralLoad Concentrate. CoralLoad Concentrate contains a gel-loading reagent and two gel-tracking dyes. This unique reagent improves pipetting visibility and facilitates estimation of DNA migration distance and optimization of agarose gel run time. When using CoralLoad Concentrate, PCR products can be directly loaded onto an agarose gel without prior addition of loading buffer (see figure "Convenient CoralLoad Concentrate").

操作手順
The TopTaq Master Mix Kit offers all of the benefits of specific TopTaq DNA Polymerase combined with the advantage of a ready-to-use master mix. With the TopTaq Master Mix Kit, separate pipetting of individual components is not required and the risk of contamination and pipetting variability is minimized, making PCR setup quick and easy. During the initial denaturation step, the TopTaq Stabilizer freely dissociates from the polymerase without compromising polymerase activity. This added convenience allows immediate reaction setup without the use of ice — saving the time usually required for reagent thawing (see flowchart "TopTaq procedure"). 
Reliable high-yield PCR without the need for optimization

The optimized protocol suitable for all PCR assays eliminates the need for lengthy optimization of experimental parameters for individual primer–template systems, resulting in substantial time and cost savings. High yields of specific PCR product are achieved, even after storing the TopTaq Master Mix for 4 months at 25°C or 4°C (see figure "Reliable high-yield PCR").

アプリケーション
The TopTaq Master Mix Kit is highly suited to all end-point PCR applications.
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Feature
Specifications
Applications PCR, RT-PCR, DNA Fingerprinting
dNTP's included Yes (in Master Mix)
Enzyme activity 5' -> 3' exonuclease activity
Mastermix Yes
Reaction type PCR amplification
Real-time or endpoint Endpoint
Sample/target type Genomic DNA and cDNA
Single or multiplex Single
Storage conditions Fridge storage and room temperature setup
With/without hotstart Without Hotstart

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キットハンドブック
2
TopTaq PCR Handbook - (EN)
For standard and specialized end-point PCR applications without the need for optimization
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(JA) - TopTaq PCR プロトコールとトラブルシューティング
スタンダードから特殊用途までの至適化不要のエンドポイントPCR
詳細を表示
MSDS
1
Safety Data Sheets
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
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安全データシート
1
MSDS TopTaq Master Mix Kit (250)

画像
Reliable high-yield PCR independent of storage conditions
保存条件に関わらず高収量のPCR 産物。
－20℃、4℃、25℃で4ヶ月保存したTopTaq Master Mixを用いてPCRを行なった。ヒトゲノムDNAから2種類の異なる遺伝子（prp, 750 bp およびHugL, 1200 bp）を、同一の至適化済みプロトコールに従って増幅した（duplicates で示す）。結果は、特異的なPCR産物が高収量で得られることを示した。[A] QIAxcelシステムにより作成したゲルイメージ。マーカー：GelPilot 1kb Plus MarkerおよびQX Alignment Marker 15 bp/10 kb。[B] QIAxcelシステムは、1回の操作で最高96サンプルまでのキャピラリー電気泳動を高い分離能で実現する完全自動システムである。
Ready-to-load PCR buffer
簡便なCoralLoad Concentrate。
CoralLoad PCR Buffer [A] は、2種類のゲルマーカー色素を含んでおり[B] 、PCR産物を即ゲルにアプライでき、DNAの泳動を簡単に可視化できる。
TopTaq Procedure
TopTaq 操作手順。

TopTaq DNA Polymerase は、本酵素の保存用バッファーに含まれているTopTaq Stabilizer のユニークな特性により、4 ℃保存が可能な初めてのPCR 増幅酵素である。TopTaq Stabilizer がTopTaq DNA Polymerase に結合することにより、ポリメラーゼの不活性化を防ぐ。低温でポリメラーゼがテンプレートDNAやプライマーと結合することも防御する。最初の変性ステップの際に、TopTaq Stabilizer はポリメラーゼ活性を低下することなくポリメラーゼから遊離する。この特性により、反応をセットアップに氷は不要である。 また、試薬の解凍に必要な時間を節約できる。

High PCR product yields without optimization
至適化不要で高収量なPCR 産物
[A]  100 bp から2 kb までの大きさの14 種類のPCR 産物を哺乳動物ゲノムDNAから増幅するためにTopTaq DNA Polymeraseを用いた。 PCRは、スタンダードなプロトコールに従い同一のサイクリング条件を用いた。[B]  図A のレーン11 ～ 14と同じ4 種類のPCR産物を表記のメーカーのDNA ポリメラーゼを用いて同一サイクリング条件で増幅した。TopTaq DNA Polymerase（QIAGEN）はフラグメントのサイズに関わらず高い収量で特異的なPCR 産物を増幅した。
NH4+ and K+ cations in QIAGEN PCR buffers increase specific primer annealing
プライマーのアニーリングにおける特異性が増加。
QIAGEN PCRバッファー中のアンモニウムイオンとカリウムイオンにより、プライマーのアニーリングにおける特異性が増加。K+ はDNA バックボーンのリン酸基（P–)）に結合し、テンプレートへのプライマー·アニーリングを安定化する。サーマルサイクリング条件下では、アンモニウムイオンおよびアンモニアの両方として存在するNH4+は、塩基（B）間の水素結合に相互作用するため、ミスマッチの塩基間の水素結合を不安定にする。これら2 種類の陽イオンの組み合わせ効果により、幅広い温度範囲において非特異的なプライマー·テンプレート結合に対して特異的な結合の比率が高く保たれる。
Stabilization of TopTaq DNA Polymerase at 4°C
4℃で安定化。
[A]  TopTaq DNA Polymerase の表面に付着した低分子量の分子（TopTaq Stabilizer）は、ポリメラーゼを4 ℃あるいは室温で安定化する。[B]  高温ではポリメラーゼ活性を低下することなくTopTaq Stabilizer はポリメラーゼから完全に遊離する。