QuantiTect Multiplex RT-PCR Kits
For multiplex, one-step qRT-PCR using sequence-specific probes for gene expression analysis
- Multiplex analysis with no need for optimization
- Analysis of multiple targets in a single reaction
- Sensitive detection of as few as 10 copies of each target
- Reliable quantification of target and reference genes
- Detection of reference gene and up to 3 targets in the same tube
QuantiTect Multiplex RT-PCR Kits enable reliable quantification of up to 5 RNA targets in a single tube by multiplex, real-time one-step RT-PCR. The combination of a hot start and a unique PCR buffer system in the ready-to-use master mix ensures highly sensitive and reliable multiplex qRT-PCR on any real-time cycler without the need for optimization. The dNTP mix includes dUTP, allowing optional treatment with UNG. Two kit formats are available: the QuantiTect Multiplex RT-PCR Kit for cyclers that require ROX dye for fluorescence normalization, and the QuantiTect Multiplex RT-PCR NoROX Kit for all other cyclers. For convenience, the master mix can be stored at 2–8°C.
ja-JP
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製品名
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Cat. no.
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List price:
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QuantiTect Multiplex RT-PCR Kit (200)
For 200 x 50 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x QuantiTect Multiplex RT-PCR Master Mix (with ROX dye), 100 µl QuantiTect Multiplex RT Mix, 2 x 2 ml RNase-Free Water
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204643
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QuantiTect Multiplex RT-PCR Kit (1000)
For 1000 x 50 µl reactions: 25 ml 2x QuantiTect Multiplex RT-PCR Master Mix (with ROX dye), 0.5 ml QuantiTect Multiplex RT Mix, 20 ml RNase-Free Water
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204645
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QuantiTect Multiplex RT-PCR NR Kit (200)
For 200 x 50 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x QuantiTect Multiplex RT-PCR NoROX Master Mix (without ROX dye), 100 µl QuantiTect Multiplex RT Mix, 2 x 2 ml RNase-Free Water
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204843
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QuantiTect Multiplex RT-PCR NR Kit (1000)
For 1000 x 50 µl reactions: 25 ml 2x QuantiTect Multiplex RT-PCR NoROX Master Mix (without ROX dye), 0.5 ml QuantiTect Multiplex RT Mix, 20 ml RNase-Free Water
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QuantiTect Multiplex RT-PCR Kits は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。
Triplex PCR とsingleplex PCR で同等の増幅|Duplex PCR で10 コピーまでのターゲットRNA を検出（Applied Biosystems 7500）- 様々な量のターゲットRNA（FAM）|4plex PCR およびSingle PCR で同等の増幅|QIAGEN multiplex kits|ユニークなPCRバッファー|
QuantiTect Multiplex RT-PCR Kit およびTaqMan プローブを用いてApplied Biosystems 7500 で1ステップのtriplex リアルタイムRT-PCR を行なった。テンプレートはバーキットリンパ腫細胞株Ramos から得たトータルRNA 20 ng を使用した。反応はtriplicateで行なった。28S rRNAをHEX標識プローブで検出した。POLD3（DNAポリメラーゼδ3のアクセサリーサブユニット）をFAM標識プローブで検出した。CDK2（細胞周期依存性キナーゼ2）をCyanine 670標識プローブで検出した。ターゲットを1ステップのsingleplex リアルタイムRT-PCR でも定量し、結果を比較検討した（黒線）。Triplex PCRとsingleplex PCRの曲線は重なり、同等の増幅であることが示唆された（すなわち同等のCT値）。|QuantiTect Multiplex RT-PCR Kit とTaqMan プローブを用いてApplied Biosystems 7500 上でDuplex リアルタイムRT-PCRを1ステップで行なった。ターゲットRNA は、ウイルス遺伝子のin vitro 転写物の1,000、100、10 コピー（[A]）で、各溶液に合成インターナルコントロールRNA 1,000 コピー（[B]）を添加した。反応を繰り返し行なった。ターゲットRNA はFAM 標識プローブで検出した。インターナルコントロールはHEX 標識プローブで検出した。10 コピーのターゲットRNA は7 回の繰り返し実験で再現性良く検出された。|QuantiTect Multiplex RT-PCR NR Kit およびTaqMan プローブを用いてLightCycler 2.0 で1ステップの4plex リアルタイムRT-PCR を行なった。K562 細胞から得られたトータルRNA 10、1、0.1 ng をテンプレートとして用いた。[A] c-myc（がん原遺伝子）をFAM 標識プローブで検出した。[B] GAPDH（グリセルアルデヒド3リン酸脱水素酵素）をHEX標識プローブで検出した。[C] HSP89（熱ショックタンパク質）をTexas Red標識プローブで検出した。[D] H28S（28S rRNA）をAlexa Fluor 660標識プローブで検出した。ターゲットを1ステップのsingleplexリアルタイムRT-PCRでも定量し、結果を比較検討した（黒線）。4plex PCR とsingle PCR の曲線は重なり、同等の増幅であることが示唆される（すなわち同等のCT値）。|QuantiTect Multiplex RT-PCR Kitは、簡単な操作でマルチプレックスリアルタイムRT-PCRを実現する。汎用されている方法に比べて、本キットはプライマー、プローブ、Mg2+、Taq DNA polymeraseの濃度に対する至適化が不要で、リファレンス遺伝子に比べてターゲット遺伝子のコピー数が少ないアッセイでも同様。|[A] NH4+ イオンは非特異的なプライマーのテンプレートへのアニーリングを防ぐ。[B]画期的なPCR添加物であるFactor MP は、テンプレート周辺でのプライマー濃度を高める。K+ や他の陽イオンと共に、Factor MPは特異的に結合したプライマーを安定化し、HotStarTaq DNA Polymeraseによる効果的なプライマーエクステンションを可能にする。|
パフォーマンス
QuantiTect Multiplex RT-PCR Kits provide sensitive detection of as little as 10 copies of target sequence (see figure "Detection of down to 10 copies of target RNA in duplex PCR"). Optimal results are achieved even in 4-plex assays to quantify transcripts that strongly differ by up to 100,000-fold in starting copy number (see figure "Comparable amplification in 4-plex PCR and singleplex PCRs").
Precise relative quantification of the expression of a gene is achieved by quantifying the expression of both the target gene and an endogenous control gene in the same well or tube. With QuantiTect Multiplex RT-PCR Kits, the CT values for the targets in a multiplex reaction are equivalent to those obtained in control experiments where the targets are amplified in separate reactions (see figure "Comparable amplification in triplex PCR and singleplex PCRs"). This demonstrates that the different targets in the same multiplex reaction are efficiently and sensitively amplified without affecting each other.
原理
Precise relative quantification of the expression of a gene is achieved by quantifying the expression of both the target gene and an endogenous control gene in the same well or tube. QuantiTect Multiplex RT-PCR Kits enable success in multiplex, one-step RT-PCR on the first attempt (see flowchart "QIAGEN multiplex kits"). The optimized master mix ensures that PCR products in a multiplex reaction are amplified with the same efficiency and sensitivity as PCR products in a corresponding single-amplification reactions. As few as 10 copies of a target gene can be detected with the kit.
Amplifying reference and target genes in the same reaction instead of in separate reactions increases the reliability of gene quantification by minimizing handling errors. The QuantiTect Multiplex RT-PCR Master Mix contains a balanced combination of K+ and NH4+ ions as well as unique synthetic Factor MP, which together promote stable and efficient annealing of primers and probes to the nucleic acid template, enabling high PCR efficiency (see figure "Unique PCR buffer"). In addition, an optimized mix of reverse transcriptases enables cDNA synthesis from a wide range of RNA template amounts, while HotStarTaq DNA Polymerase provides a stringent hot start, preventing the formation of nonspecific products.
The QuantiTect Multiplex RT-PCR Master Mix also contains dUTP, enabling pretreatment with uracil-N-glycosylase (UNG) prior to starting PCR, which ensures that any contaminating PCR products do not affect subsequent PCR reactions.
| HotStarTaq DNA Polymerase |
15 min activation at 95ºC |
Set-up of qPCR reactions at room temperature |
| QuantiTect Multiplex RT-PCR Buffer |
Balanced combination of NH4+ and K+ ions |
Specific primer annealing ensures reliable PCR results |
| Synthetic Factor MP |
Reliable multiplexing analysis of up to 4 genes in the same tube |
| dNTP mix |
Includes dUTP, which partially replaces dTTP and enables optional UNG treatment of reactions |
Eliminates contamination from carryover of PCR products by optional UNG treatment |
| ROX dye* |
For normalization of fluorescent signals on Applied Biosystems and, optionally, Agilent instruments |
Precise quantification on cyclers that require ROX dye. Does not interfere with reactions on other real-time cyclers |
| Omniscript and Sensiscript Reverse Transcriptases |
Special blend of enzymes with high affinity for RNA |
RNA can be transcribed, even through complex secondary structures |
操作手順
QuantiTect Multiplex RT-PCR Kits contain ready-to-use master mixes that eliminate the need for optimization of reaction and cycling conditions. The handbook contains a single protocol that can be used with all available real-time cyclers and also lists recommended dyes. If required, reactions can be pretreated with uracil-N-glycosylase (UNG; not supplied) to eliminate carryover of PCR products from previous reactions.
Kits are available with or without ROX passive reference dye in the master mix, enabling use on virtually any real-time cycler (see table). Due to the optimized ROX concentrations, detection of even low copy numbers is achieved through automatic data analysis.
| Supplied in master mix |
QuantiTect Multiplex RT-PCR Kit |
Cyclers from Applied Biosystems |
| Absent from master mix |
QuantiTect Multiplex RT-PCR NR Kit |
Rotor-Gene cyclers, and cyclers from Bio-Rad, Cepheid, Eppendorf, Roche, Agilent, and other suppliers |
アプリケーション
QuantiTect Multiplex RT-PCR Kits can be used for gene expression analysis of RNA targets on any real-time cycler. This includes instruments from Applied Biosystems, Bio-Rad, Cepheid, Eppendorf, Roche, and Agilent. For the Rotor-Gene Q and other Rotor-Gene cyclers, we recommend using the Rotor-Gene Multiplex RT-PCR Kit, which has been specially developed for fast cycling on these instruments.
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Feature
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Specifications
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Applications
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Real-time quantification of RNA targets in a multiplex format
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Description
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For quantitative, multiplex, real-time one-step RT-PCR using sequence-specific probes
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Reaction type
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Real-time one-step RT-PCR
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Real-time or endpoint
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Real-time
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Sample/target type
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RNA targets
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Single or multiplex
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Multiplex
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SYBR Green I or sequence-specific probes
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Sequence-specific probes
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Thermal cycler
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Real-time cyclers dedicated for multiplex PCR (e.g., most Applied Biosystems real-time cyclers, Roche LightCycler 480, and Bio-Rad iCycler iQ)
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With or without ROX
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With ROX or without
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FAQ ID -1085
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FAQ ID -1438
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FAQ ID -1441
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FAQ ID -2119
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FAQ ID -2134
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FAQ ID -2371
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FAQ ID -2655
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FAQ ID -2682
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FAQ ID -589
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FAQ ID-751
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FAQ ID -784
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QuantiTect Multiplex PCR Kit - ROX passive reference
dyeを含むマスターミックス添付
QuantiTect Multiplex RT-PCR NR Kit — ROX passive reference dyeを含まないマスターミックス添付
配列特異的なプローブを用いた1ステップのマルチプレックス・リアルタイム定量RT-PCRによる遺伝子発現解析
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QuantiTect Multiplex RT-PCR Kit - with master mix containing ROX passive reference dye
QuantiTect Multiplex RT-PCR NR Kit - with master mix free of ROX passive reference dye
For gene expression analysis by quantitative, multiplex, real-time one-step RT-PCR using sequence-specific probes
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Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
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画像
Triplex PCR とsingleplex PCR で同等の増幅
QuantiTect Multiplex RT-PCR Kit およびTaqMan プローブを用いてApplied Biosystems 7500 で1ステップのtriplex リアルタイムRT-PCR を行なった。テンプレートはバーキットリンパ腫細胞株Ramos から得たトータルRNA 20 ng を使用した。反応はtriplicateで行なった。28S rRNAをHEX標識プローブで検出した。POLD3（DNAポリメラーゼδ3のアクセサリーサブユニット）をFAM標識プローブで検出した。CDK2（細胞周期依存性キナーゼ2）をCyanine 670標識プローブで検出した。ターゲットを1ステップのsingleplex リアルタイムRT-PCR でも定量し、結果を比較検討した（黒線）。Triplex PCRとsingleplex PCRの曲線は重なり、同等の増幅であることが示唆された（すなわち同等のCT値）。
Duplex PCR で10 コピーまでのターゲットRNA を検出（Applied Biosystems 7500）- 様々な量のターゲットRNA（FAM）
QuantiTect Multiplex RT-PCR Kit とTaqMan プローブを用いてApplied Biosystems 7500 上でDuplex リアルタイムRT-PCRを1ステップで行なった。ターゲットRNA は、ウイルス遺伝子のin vitro 転写物の1,000、100、10 コピー（[A]）で、各溶液に合成インターナルコントロールRNA 1,000 コピー（[B]）を添加した。反応を繰り返し行なった。ターゲットRNA はFAM 標識プローブで検出した。インターナルコントロールはHEX 標識プローブで検出した。10 コピーのターゲットRNA は7 回の繰り返し実験で再現性良く検出された。
4plex PCR およびSingle PCR で同等の増幅
QuantiTect Multiplex RT-PCR NR Kit およびTaqMan プローブを用いてLightCycler 2.0 で1ステップの4plex リアルタイムRT-PCR を行なった。K562 細胞から得られたトータルRNA 10、1、0.1 ng をテンプレートとして用いた。[A] c-myc（がん原遺伝子）をFAM 標識プローブで検出した。[B] GAPDH（グリセルアルデヒド3リン酸脱水素酵素）をHEX標識プローブで検出した。[C] HSP89（熱ショックタンパク質）をTexas Red標識プローブで検出した。[D] H28S（28S rRNA）をAlexa Fluor 660標識プローブで検出した。ターゲットを1ステップのsingleplexリアルタイムRT-PCRでも定量し、結果を比較検討した（黒線）。4plex PCR とsingle PCR の曲線は重なり、同等の増幅であることが示唆される（すなわち同等のCT値）。
QIAGEN multiplex kits
QuantiTect Multiplex RT-PCR Kitは、簡単な操作でマルチプレックスリアルタイムRT-PCRを実現する。汎用されている方法に比べて、本キットはプライマー、プローブ、Mg2+、Taq DNA polymeraseの濃度に対する至適化が不要で、リファレンス遺伝子に比べてターゲット遺伝子のコピー数が少ないアッセイでも同様。
ユニークなPCRバッファー
[A] NH4+ イオンは非特異的なプライマーのテンプレートへのアニーリングを防ぐ。[B]画期的なPCR添加物であるFactor MP は、テンプレート周辺でのプライマー濃度を高める。K+ や他の陽イオンと共に、Factor MPは特異的に結合したプライマーを安定化し、HotStarTaq DNA Polymeraseによる効果的なプライマーエクステンションを可能にする。
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