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PAXgene Blood RNA MDx Kit

Pour la purification entièrement automatisée et à rendement élevé d’ARN cellulaire de sang stabilisé dans des tubes PAXgene Blood RNA
  • Stabilisation instantanée de l’ARN lors du prélèvement
  • Purification optimisée d’ARN de haute qualité
  • Procédure de purification d’ARN entièrement automatisée

Le kit PAXgene Blood RNA MDx est destiné à la purification entièrement automatisée et à rendement élevé d’ARN cellulaire sur le système universel BioRobot MDx ou BioRobot. (Le kit PAXgene 96 Blood RNA offre la même technologie à 96 puits en format manuel.) En combinaison avec les tubes PAXgene Blood RNA (disponibles auprès de BD, référence 762165) pour le prélèvement et la stabilisation d’échantillons, ce système fournit une solution préanalytique complète pour le prélèvement et la stabilisation grâce à la purification d’ARN de haute qualité dans le cadre de projets à rendement élevé, tels que les études de recherche clinique.

Cat No./ID: 762431
PAXgene Blood RNA MDx Kit (4)
4 485,00 €
Order Product
For 4 x 96 RNA preps on the BioRobot MDx workstation: 4 PAXgene 96 RNA Plates, 4 PAXgene 96 Filter Plates, Buffers (wash buffers are labeled with bar codes), Proteinase K, RNase-Free DNase Set, Plasticware, Collection Vessels. To be used with PAXgene Blood RNA Tubes
Cat No./ID: 9016753
Shaker-Adapter, 24-tube, PAXgene
484,00 €
Order Product
Adapter for PAXgene Blood RNA Tubes on the shaker unit of the BioRobot Universal System
Cat No./ID: 9238279
PAXgene 96 Incubator Block
265,00 €
Order Product
Block for denaturation of eluates in PAXgene 96 procedures
For Research Use Only. Not for use in diagnostics procedures. No claim or representation is intended to provide information for the diagnosis, prevention, or treatment of a disease.
Le site web n’est pas disponible en français dans son intégralité. Son contenu est international et peut aller à l’encontre des règlementations locales.
0
Aucune inhibition à la RT-PCR détectée.
Au total, 48 échantillons d’eau ont été traités sur la station de travail BioRobot MDx à l’aide du kit PAXgene Blood RNA MDx. Les éluats ont été regroupés en pools et ajoutés aux tests de RT-PCR quantitative en temps réel au pourcentage indiqué. Chaque test a été effectué en 4 exemplaires avec la même quantité d’ARN issue de cellules HeLa, avec des sondes et amorces pour l’actine β. [A] Les valeurs CT sont données (moyenne ± écart-type) avec la différence entre les valeurs moyennes CT et la valeur moyenne CT pour les réactions à 0 % (ΔCT). Aucune des réactions n’a été inhibée (ΔCT ≥ 0,5). [B] Les courbes d’amplification des 20 tests ne montrent aucune inhibition détectable de RT-PCR.
1
Procédure automatisée de purification d’ARN PAXgene.
Suite au prélèvement d’échantillons sanguins (2,5 ml) dans les tubes PAXgene Blood RNA, la procédure simple de purification commence par une étape de centrifugation en culots du contenu de chaque tube PAXgene Blood RNA. La protéinase K et un tampon d’incubation optimisé sont ajoutés pour digérer les protéines. Les tubes sont ensuite transférés au système universel BioRobot MDx ou BioRobot pour une purification automatisée d’ARN.
2
ARN de haute qualité issu de différents donneurs.
Le sang a été prélevé en double sur 3 donneurs dans des tubes PAXgene Blood RNA. L’ARN a été purifié à l’aide du kit PAXgene Blood RNA MDx sur l’appareil BioRobot MDx. L’ARN a été analysé avec un Bioanalyzer Agilent 2100. Le facteur d’intégrité de l’ARN (RIN) indiqué sur chaque scan montre la haute qualité de l’ARN purifié. [A] Analyse de 2 échantillons issus du donneur A. [B] Analyse de 2 échantillons issus du donneur B. [C] Analyse de 2 échantillons issus du donneur C.
3
Très faibles niveaux d’ADN génomique.
L’ARN a été purifié à partir de 384 échantillons sanguins prélevés dans des tubes PAXgene Blood RNA et traités dans 4 analyses sur le BioRobot MDx à l’aide du kit PAXgene Blood RNA MDx. L’ADN génomique a été quantifié à l’aide d’un test par PCR en temps réel Taqman spécifique à l’ADN génomique avec des sondes et amorces pour le gène actine β. La quantité d’ADN présente est donnée comme pourcentage du contenu total d’acides nucléiques.
4
Reproductibilité intersystème élevée.
Le sang a été prélevé en cinq réplicats sur 6 donneurs dans des tubes PAXgene Blood RNA. L’ARN a été purifié à l’aide du kit PAXgene Blood RNA MDx sur 3 stations de travail BioRobot MDx différentes (MDx 1, MDx 2, MDx 3) et manuellement avec le kit PAXgene 96 Blood RNA (PAX 96). L’ARN purifié a été analysé par RT-PCR quantitative en temps réel avec sonde et amorces pour le transcrit c-Fos. Toutes les valeurs se situaient dans l’intervalle ±3x la précision totale du test (2,34 CT), indiqué par les lignes horizontales.
Performance

La procédure automatisée PAXgene Blood RNA offre un ARN de haute qualité ainsi qu’une répétabilité intra-donneur élevée (voir figure « ARN de haute qualité issu de différents donneurs »). Les rendements dépendent fortement du donneur. Les rendements individuels peuvent donc varier. Un traitement intégré à la DNase assure une contamination de l’ADN génomique minimisée, généralement < 0,1 % (voir figure « Très faibles niveaux d’ADN génomique »). La procédure entièrement automatisée PAXgene Blood RNA offre des rendements d’ARN comparables à la procédure manuelle PAXgene 96 Blood RNA (généralement ≥ 80 %). Le rendement d’ARN isolé prélevé sur 2,5 ml de sang total humain sain (4,6 x 106 – 1,1 x 107 leucocytes/ml) est généralement ≥ 3 µg pour > 95 % des échantillons traités. L’ARN purifié est prêt à l’emploi dans le cadre d’applications en aval, telles que la RT-PCR quantitative en temps réel sans inhibition à la RT-PCR détectée (voir figure « Aucune inhibition à la RT-PCR détectée »). La variation inter-système est minimale et elle est comprise dans la marge d’erreur des tests classiques RT-PCR en temps réel (voir figure « Reproductibilité intersystème élevée »).

La procédure robuste et standardisée est conçue pour réduire le risque de contamination croisée entre les échantillons. L’ARN total a été purifié à partir de 48 échantillons de sang prélevés dans des tubes PAXgene Blood RNA et 48 échantillons d’eau. Les échantillons ont été disposés selon une configuration en damier sur un bloc de 96 puits. Après la purification à l’aide du kit PAXgene Blood RNA MDx sur la station de travail BioRobot MDx, tous les échantillons ont été analysés par PCR quantitative en temps réel à l’aide de sondes et amorces spécifiques pour l’ARNr 18s pour 40 cycles PCR. Les valeurs du cycle seuil (CT) pour les échantillons sanguins sont comprises entre 27,3 et 32,7 alors qu’aucun ARN n’a été détecté dans les échantillons d’eau après 40 cycles.

Principle

Les échantillons (2,5 ml) sont prélevés directement dans les tubes PAXgene Blood RNA et l’ARN est isolé à l’aide du kit PAXgene Blood RNA MDx. Les tubes PAXgene Blood RNA contiennent un mélange exclusif de réactifs entraînant une stabilisation immédiate de l’ARN. Les échantillons sanguins peuvent être stockés dans les tubes PAXgene Blood RNA à température ambiante pendant 5 jours maximum. L’ARN est ensuite isolé grâce à une procédure automatisée utilisant la technologie de la membrane de silice fournie dans le kit PAXgene Blood RNA MDx. L’ARN résultant représente de manière précise le profil d’expression in vivo et peut être utilisé dans plusieurs applications en aval.

Procedure
La procédure de purification simple commence par une étape de centrifugation en culots du contenu de chaque tube PAXgene Blood RNA. La protéinase K et un tampon d’incubation optimisé sont ajoutés pour digérer les protéines. Les tubes sont ensuite transférés au système universel BioRobot MDx ou BioRobot. Suite à la configuration des tampons et des articles en plastique à l’aide du système d’exploitation QIAsoft, la station de travail BioRobot effectue la procédure entièrement automatisée de purification d’ARN (voir schéma « Procédure automatisée de purification d’ARN PAXgene »). Suite à la purification, un traitement final de la chaleur de l’éluat améliore les performances dans les applications en aval. La durée totale de traitement est de 3 à 4 heures, dont 25 à 30 minutes de manipulation maximum. Les protocoles sont disponibles par lots de 48 ou 96 échantillons par analyse.
Applications

L’ARN purifié est prêt à l’emploi dans une grande variété d’applications en aval, y compris :

RT-PCR quantitative à rendement élevé en temps réel
Analyse des biopuces d’expression
Synthèse de l’ADNc
Protection de RNase et nucléase S1
Analyse par transfert d’ARN et hybridation sur tache
Extension d’amorce
Features
Specifications
Applications PCR, real-time PCR, qPCR, NASBA, cDNA synthesis
Elution volume 120 µl
For automated processing BioRobot MDx workstation, BioRobot Universal System
Format 96-well plate
Main sample type Whole blood
Processing Automated
Purification of total RNA, miRNA, poly A+ mRNA, DNA or protein Cellular RNA
RUO/CE/ASR RUO
Sample amount 2.5 ml
Samples per run; throughput 48 or 96 samples
Technology Silica technology
Time per run or per prep 3–4 hours
Yield >3 µg
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