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therascreen IDH1/2 RGQ PCR Kit CE

Pour la détection de 12 mutations des gènes IDH1 et IDH2 dans les gliomes
  • Conforme à la directive européenne IVD 98/79/CE
  • Détection précise de 7 mutations de gène IDH1 et de 5 mutations du gène IDH2 grâce au clampage par PCR (1)
  • Identification sensible de 3 mutations à l’aide de la technologie PCR ARMS (1)
  • Analyse standardisée avec solutions prêtes à l’emploi
  • Procédure simple grâce à l’instrument Rotor-Gene Q
Le kit therascreen IDH1/2 RGQ PCR permet la détection de 12 mutations dans les gènes IDH1 et IDH2 par PCR en temps-réel sur l’instrument Rotor-Gene Q 5plex HRM. Ce kit inclut tous les réactifs nécessaires, optimisés pour la détection rapide et sensible des mutations des gènes IDH1 et IDH2. (1)
Cat No./ID: 873011
therascreen IDH1/2 RGQ PCR Kit (20) CE
Pour 20 réactions : 9 mélanges sonde et amorces, contrôle de type sauvage, contrôle positif, master mix, eau sans nucléase

Le therascreen IDH1/2 RGQ PCR Kit CE est destiné à un usage de diagnostic in vitro en Europe.


Le site web n’est pas disponible en français dans son intégralité. Son contenu est international et peut aller à l’encontre des règlementations locales.
Performance
Voir le manuel du kit therascreen IDH1/2 RGQ PCR pour obtenir les caractéristiques détaillées des performances.
Principle

Le kit therascreen IDH1/2 RGQ PCR fournit les réactifs nécessaires à la réalisation de 9 réactions distinctes d’amplification pour la détection de 12 mutations (1) :

  • 3 réactions d’amplification totale dans les codons 132 et 100 du gène IDH1 et dans le codon 172 du gène IDH2
  • 3 réactions d’amplification de mutation dans les codons 132 et 100 du gène IDH1 et dans le codon 172 du gène IDH2
  • 3 réactions d’amplification spécifique aux mutations R132H et R132C d’IDH1 et R172K d’IDH2

 

Mutations des gènes IDH1 et IDH2 détectées à l’aide du kit therascreen IDH1/2 RGQ PCR (1)
Gène  Mutation  Changement de base ID Cosmic

 
 
 IDH1
 Arg132His (R132H)  395G>A COSM28746
 Arg132Cys (R132C)  394C>T COSM28747
 Arg132Ser (R132S)  394C>A COSM28748
 Arg132Gly (R132G)  394 C>G COSM28749
 Arg132Leu (R132L)  395G>T COSM28750
 Arg132Val (R132V)  394_395 CG>GT COSM28751
 Arg100Gln (R100Q)  299G>A COSM88208
 
 
 IDH2
 Arg172Lys (R172K)  515G>A COSM33733
 Arg172Met (R172M)  515G>T COSM33732
 Arg172Trp (R172W)  514A>T COSM34039
 Arg172Ser (R172S)  516G>T COSM34090
 Arg172Gly (R172G)  514A>G COSM33731

Mélanges réactionnels totaux

Les mélanges sonde et amorces totaux (PPM-Total) utilisent des sondes et des amorces pour amplifier à la fois les séquences cibles mutées et de type sauvage. (1)

Mélanges réactionnels de détection des mutations

Les mélanges sonde et amorces de détection des mutations combinent sondes et amorces pour amplifier à la fois les séquences cibles mutées et de type sauvage, plus un oligonucléotide bloqué à l’extrémité 3' avec l’ajout d’un groupe de phosphates pour inhiber l’extension (clampage par PCR), spécifique à la séquence cible de type sauvage. (1)

Lorsque la matrice destinée à la PCR contient la séquence de type sauvage, l’oligonucléotide 3'-phosphate domine la liaison avec les amorces de PCR en raison d’une plus grande affinité. L’extension et l’amplification dans le cas de l’ADN polymérase sont faibles voire inexistantes. (1)

En présence d’une séquence mutée, la liaison d’amorce domine la liaison d’oligonucléotide 3'-phosphate et l’amplification se poursuit. (1)

Mélanges réactionnels d’identification des mutations

L’amplification spécifique d’allèle s’effectue par le biais du système ARMS (système de mutation réfractaire par amplification), qui exploite la capacité de l’ADN polymérase à établir une distinction entre un appariement et un mésappariement à l’extrémité 3' d’une amorce de PCR. (1)

Lorsque l’amorce de PCR est entièrement appariée, l’efficacité de l’amplification est maximale. Lorsque la base 3' est mésappariée, seule une amplification de faible bruit de fond se produit. (1)

Procedure
Le kit therascreen IDH1/2 RGQ PCR fournit tous les réactifs nécessaires à la détection de 12 mutations dans les gènes IDH1 et IDH2. 9 mélanges sonde et amorces sont utilisés pour amplifier à la fois les séquences cibles mutées et de type sauvage. Il suffit d’ajouter de l’ADN matrice ainsi que le mélange sonde et amorces approprié au master mix PCR prêt à l’emploi et de lancer la réaction sur l’instrument Rotor-Gene Q MDx 5plex HRM à l’aide du programme de cycle optimisé décrit dans le manuel du kit. Pour la purification de l’ADN, nous recommandons l’utilisation du kit QIAsymphony DNA Mini sur le système QIAsymphony SP ou du kit QIAamp DNA FFPE Tissue, en suivant les protocoles modifiés fournis avec le manuel du kit therascreen IDH1/2 RGQ PCR. (1)
Applications
Le kit therascreen IDH1/2 RGQ PCR est un test de diagnostic in vitro reposant sur la technologie de PCR et prévu pour la détection qualitative de 7 mutations du gène IDH1 et de 5 mutations du gène IDH2, et pour l’identification directe de 3 mutations majeures dans de l’ADN extrait de tissus cérébraux humains fixés au formaldéhyde et inclus en paraffine (FFPE).
Le kit therascreen IDH1/2 RGQ PCR a été conçu pour faciliter la classification des gliomes. (1)
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