QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit

ヒト血漿あるいは血清から遊離DNA/RNAを分離

  • サンプルインプット量を増やし(最高5 ml)、溶出量を減らす(最少20 µl)ことで核酸の高濃縮を実現
  • フラグメント化したDNAおよびRNAを効率的に回収
  • 有機溶媒抽出およびアルコール沈殿不要
  • 夾雑物および阻害物質を除去

QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit は血漿あるいは血清中の遊離DNAおよびRNAを簡単に濃縮・分離できます。

本キットのご使用には、QIAvac 24 Plus (Cat. no. 19413) が必要です。また、QIAvac Connecting System (Cat. no. 19419) と併用していただくと大変便利です。
Product Cat. no. List price:
QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit (50)
For 50 preps: QIAamp Mini Columns, Tube Extenders (20 ml), QIAGEN Proteinase K, Carrier RNA, Buffers, VacConnectors, and Collection Tubes (1.5 ml and 2 ml)
55114
€ 963,00
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Carrier RNA(poly A) 12x1350µg-15-25°C,KG
Carrier RNA(poly A) 12x1350µg-15-25°C,KG
1017647
€ 200,00
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The QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit is intended for molecular biology applications. This product is not intended for the diagnosis, prevention, or treatment of a disease.
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Reproducible recovery of circulating DNA.|Improved recovery of fragmented DNA.|Efficient purification of circulating miRNA.|Efficient recovery of methylated DNA.|
DNA fragments (200 bp and 1000 bp) in equal amounts were added to 24 plasma samples. DNA was purified from 5 ml plasma using the QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit, with an elution volume of 80 μl. DNA yield was quantified by duplex, real-time PCR of 66 bp targets specific for each DNA fragment using the QuantiTect Multiplex PCR Kit.|Circulating DNA was purified from 5 ml plasma using the QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit or from 1 ml plasma using the QIAamp MinElute Virus Vacuum Kit, with elution volumes of 100 μl. DNA yield was quantified by duplex, real-time PCR of a 66 bp amplicon and a 500 bp amplicon within the 18S rRNA gene using the QuantTect Multiplex PCR Kit. The difference between amplification of the 500 bp amplicon and 66 bp amplicon shows that the DNA is fragmented, resulting in a lower abundance of intact 500 bp target sequences compared with the shorter 66 bp target. (Note that the difference is greater than the fivefold difference in sample input volumes.)|Circulating RNA was purified from 4 ml pooled plasma using the QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit, with an elution volume of 50 μl. The standard kit protocol was compared with the specialized protocol for miRNA. miRNA 30b yield was quantified using a TaqMan microRNA assay (Applied Biosystems), and miRNA 16 yield was quantified using a Human miScript Assay (QIAGEN). The lower CT values with the miRNA protocol indicate higher yields of the miRNA species.|Spiked methlyated DNA and non-target poly-A RNA were purified from 4 ml plasma using the QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit, with an elution volume of 45 μl. Bisulfite conversion was carried out using the EpiTect Bisulfite Kit (QIAGEN), and methylation-specific PCR (MSP) was performed using real-time MSP assays and components of the QuantiTect Multiplex PCR Kit on the ABI PRISM 7900HT Sequence Detection System. Data from two fully methylated loci were analyzed.|
Performance

癌に特異的な血中のDNAフラグメントやmiRNAを解析することにより、血液サンプルから癌タイプの特定が可能です。血中を循環するこれらの核酸は、血清や血漿中に短いフラグメントとして存在します(DNA は1,000 bp以下、RNA は1,000 nt以下)。さらに、精製されたRNA に含まれる21 nt程度のmiRNAは、癌や病態に対するバイオマーカーとして利用できる可能性があります。

QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit は、ヒト血漿や血清、その他の無細胞体液から遊離核酸を効率的に精製します。再現性のある収量と効率的調製法により、遊離核酸分布を正確に反映します(図 "遊離DNAを高い再現性で回収")。Tube Extender とQIAvac 24 Plus を用いた吸引操作は、最高5 mlからのサンプル調製を実現し、20 µl から150 µl までの幅広い溶出容量により、低濃度で存在する遊離核酸を濃縮できます。本キットはシリカゲルメンブレンへの選択的結合という先端技術により、核酸フラグメントの回収を改善します(図 "改良されたDNAフラグメントの回収")。

RNase-Free DNase Set を用いてDNA分解を行なうと、DNAフリーの遊離RNAを精製できます。専用プロトコールはmiRNAのようなsmall RNAの効率的な精製を実現します(図 "遊離miRNA の効率的な精製")。メチル化DNAはQIAamp Circulating Nucleic Acid Kitを用いて効率的に精製できます。精製DNAはメチル化を保持しているために、メチル化状態を解析するBisulfite変換が可能です(図 "メチル化DNAの効率的な回収")。

精製・濃縮した遊離DNAおよびRNAは、タンパク質、ヌクレアーゼ、その他の不純物が取り除かれ、次のような様々なダウンストリームアプリケーションに即使用可能です。

PCR およびリアルタイム定量PCR / RT-PCR
血液を利用した癌検出のためのバイオマーカー研究および評価
ウイルス核酸検出 
Principle

QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit は、血漿あるいは血清中の遊離DNAおよび遊離RNA を簡単に分離できます。フェノール/クロロホルム抽出は不要です。核酸は選択的にQIAamp Mini columnに結合し、夾雑物は洗い流されます。2価の陽イオンおよびタンパク質などのPCR阻害物質は、3回の効率的な洗浄ステップにより完全に除去され、高純度の核酸は水あるいはキットに同梱のバッファーで溶出します。QIAamp Circulating Nucleic Acid テクノロジーは、ヒトの血漿、血清、尿からの遊離DNAおよび遊離RNAを精製します。

QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit は、シリカゲルメンブレンの選択的な結合能力および20~150 μlの幅広い溶出容量を組み合わせています。RNase-Free DNase Setを用いてDNAを分解すれば、遊離RNAのみ精製できます。

Procedure

QIAamp Circulating Nucleic Acid の手順は4段階(溶解、結合、洗浄、溶出)で、吸引マニホールド上でQIAamp Mini columnを用いて操作できます。手順が簡単で多数のサンプルの同時処理に適しており、24サンプルあたり2時間未満で核酸を精製できます。QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit をウイルスRNA/DNAの単離に使用する場合は、全てのウイルス種について性能が保証されている訳ではありませんので、ユーザによる検証が必要となります。

Applications

QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit は、低濃度のフラグメント化したDNAやRNAを含むスタートサンプルから、循環している遊離核酸(DNA、RNA、miRNA、ウイルス核酸)を効率的に精製、濃縮します(ヒト血漿中の遊離DNA濃度は通常1~100 ng/ml)。5 mlまでのスタートサンプル量を処理できます。

QIAamp Circulating Nucleic Acid Kitは以下のようなサンプルから核酸を精製、濃縮します。

ヒト血漿
血清
尿
Feature
Specifications
Applications PCR, real-time PCR
CE/FDA/IVD compatible -
Elution volume 20–150 µl
Format QIAamp Mini Columns
Main sample type Serum, plasma
Processing Manual (vacuum)
Purification of total RNA, miRNA, poly A+ mRNA, DNA or protein Free-circulating DNA, RNA and miRNA, viral DNA, viral RNA
Sample amount 1-5 ml
Technology Silica technology
Time per run or per prep <2 hour for 24 preps
Yield Varies, due to donor-to-donor variations and disease status

You are not authorized to download the resource

Kit Handbooks
1
For concentration and purification of free-circulating DNA and RNA from human plasma or serum
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Safety Data Sheets
2
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
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Images
Reproducible recovery of circulating DNA
Reproducible recovery of circulating DNA.
DNA fragments (200 bp and 1000 bp) in equal amounts were added to 24 plasma samples. DNA was purified from 5 ml plasma using the QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit, with an elution volume of 80 μl. DNA yield was quantified by duplex, real-time PCR of 66 bp targets specific for each DNA fragment using the QuantiTect Multiplex PCR Kit.
Improved recovery of fragmented DNA
Improved recovery of fragmented DNA.
Circulating DNA was purified from 5 ml plasma using the QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit or from 1 ml plasma using the QIAamp MinElute Virus Vacuum Kit, with elution volumes of 100 μl. DNA yield was quantified by duplex, real-time PCR of a 66 bp amplicon and a 500 bp amplicon within the 18S rRNA gene using the QuantTect Multiplex PCR Kit. The difference between amplification of the 500 bp amplicon and 66 bp amplicon shows that the DNA is fragmented, resulting in a lower abundance of intact 500 bp target sequences compared with the shorter 66 bp target. (Note that the difference is greater than the fivefold difference in sample input volumes.)
Specialized protocol for efficient purification of circulating miRNA
Efficient purification of circulating miRNA.
Circulating RNA was purified from 4 ml pooled plasma using the QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit, with an elution volume of 50 μl. The standard kit protocol was compared with the specialized protocol for miRNA. miRNA 30b yield was quantified using a TaqMan microRNA assay (Applied Biosystems), and miRNA 16 yield was quantified using a Human miScript Assay (QIAGEN). The lower CT values with the miRNA protocol indicate higher yields of the miRNA species.
Efficient recovery of methylated DNA
Efficient recovery of methylated DNA.
Spiked methlyated DNA and non-target poly-A RNA were purified from 4 ml plasma using the QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit, with an elution volume of 45 μl. Bisulfite conversion was carried out using the EpiTect Bisulfite Kit (QIAGEN), and methylation-specific PCR (MSP) was performed using real-time MSP assays and components of the QuantiTect Multiplex PCR Kit on the ABI PRISM 7900HT Sequence Detection System. Data from two fully methylated loci were analyzed.