QuantiFast Pathogen +IC Kits

• Détection simultanée de la cible pathogène et du contrôle interne
• 5x mélanges principaux pour une plus grande sensibilité avec plus d’échantillons
• Interprétation correcte des résultats négatifs pour une plus grande sécurité du processus
• Détection claire des signaux positifs faibles de la cible
• Protocole rapide et universel sur les thermocycleurs standards et rapides

Les QuantiFast Pathogen +IC Kits sont conçus pour une détection sensible et rapide par PCR à temps réel ou RT-PCR en une étape des acides nucléiques de pathogènes à l’aide de sondes spécifiques à une séquence. Chaque kit contient des réactifs pour la détection multiplex en temps réel d’un maximum de 4 cibles pathogènes définies par l’utilisateur (par exemple, virus, bactéries, champignons, etc.) ainsi que du contrôle interne (IC), afin de garantir la sécurité du processus grâce à une interprétation correcte des résultats de détection négatifs. Deux formats de kits sont disponibles : Le QuantiFast Pathogen RT-PCR +IC Kit pour la détection de l’ARN viral, qui contient une matrice de contrôle interne de l’ARN, ainsi que l’ensemble d’amorces/sondes de contrôle interne, ou le QuantiFast Pathogen PCR +IC Kit pour la détection de l’ADN viral, bactérien ou fongique, qui contient une matrice de contrôle interne de l’ADN, ainsi que l’ensemble d’amorces/sondes de contrôle interne. Le ROX est fourni avec les deux kits dans 2 tubes de concentrations différentes, ce qui permet de l’utiliser sur pratiquement n’importe quel appareil en temps réel. Pour des raisons de commodité, le mélange principal peut être conservé entre 2 et 8 °C.

Les QuantiFast Pathogen +IC Kits permettent la détection simultanée de cibles d’ARN ou d’ADN viral et du contrôle interne fourni sur une large plage linéaire sans perte de sensibilité en cas de multiplexage (voir figures  Détection sensible du Norovirus sur le Rotor‑Gene Q et  Linéarité et précision élevées des détections simple et double). Le protocole a été développé pour réaliser des expériences de thermocyclage rapide sur la plupart des thermocycleurs avec une grande fiabilité (voir figures «  Détection sensible du BHV-1 sur le Rotor‑Gene Q » et «  Détection sensible du BHV-1 sur l’ABI 7500 »). L’amplification combinée de la cible pathogène et du contrôle interne à l’aide des QuantiFast Pathogen +IC Kits augmente la sécurité du processus de la procédure de détection des pathogènes en garantissant l’interprétation correcte des résultats négatifs (voir figure «  Interprétation correcte des résultats négatifs »).

Le QuantiTect Nucleic Acid Dilution Buffer, fourni avec les kits, stabilise les étalons d’ARN et d’ADN pendant la dilution et la configuration de la réaction et empêche la perte d’acides nucléiques sur les surfaces en plastique, telles que les tubes ou les pointes de pipette. Il permet une dilution fiable des étalons utilisés pour quantifier les acides nucléiques viraux, offrant une large plage linéaire, des valeurs C_T faibles à élevées. Le tampon assure un stockage plus long des étalons sans dégradation (voir figure «  Dilution et stockage fiables des étalons d’ARN »).

Afin de garantir la sécurité des processus grâce à l’interprétation correcte des résultats négatifs, chaque QuantiFast Pathogen _IC Kit contient des réactifs pour la détection multiplex en temps réel d’une cible pathogène définie par l’utilisateur avec le contrôle interne. L’amplification des gènes de contrôle et des gènes cibles dans la même réaction plutôt que dans des réactions séparées augmente la fiabilité de la quantification des gènes en minimisant les erreurs de manipulation.

Les QuantiFast Pathogen +IC Kits permettent une détection sensible et rapide par PCR multiplex en temps réel ou par RT-PCR en une seule étape des acides nucléiques des pathogènes dès la première tentative (voir l’organigramme «  Kits multiplex QIAGEN »). Le mélange principal optimisé garantit que les produits PCR dans une réaction multiplex soient amplifiés avec la même efficacité et la même sensibilité que les produits PCR dans une réaction d’amplification simple correspondante. Le tampon PCR rapide spécialement développé contient le nouvel additif Q-Bond, qui réduit considérablement les temps de dénaturation, de renaturation et d’extension (voir figure «  Renaturation rapide de l’amorce »). Une combinaison équilibrée d’ions K⁺ et NH₄⁺ ainsi que le Factor MP synthétique unique qui favorisent une renaturation stable et efficace des amorces et des sondes sur la matrice d’acide nucléique, ce qui permet une grande efficacité de la PCR (voir figure «  Tampon PCR unique »). En outre, la formulation unique de la Sensiscript Reverse Transcriptase garantit une transcription inverse très sensible de l’ARN viral, tandis que la HotStarTaqPlus DNA Polymerase assure un hot start rigoureux, empêchant la formation de produits non spécifiques.

Les QuantiFast Pathogen +IC Kits offrent une procédure simple pour la détection d’un pathogène défini par l’utilisateur et du contrôle interne. Ils contiennent un master mix prêt à l’emploi pour la détection en temps réel de l’ARN viral (RT-PCR en une étape) ou de l’ADN viral, bactérien et fongique (PCR). Il n’est pas nécessaire d’optimiser les conditions de réaction et de thermocyclage. Il suffit de mélanger le master mix fourni avec le dosage de l’agent pathogène (amorces et sonde) et l'Internal Control Assay ainsi que l'Internal Control DNA ou RNA Sinon, si l'Internal Control a été ajouté à la procédure de purification de l’échantillon, ajouter du RNase-free water à la place de l'Internal Control DNA or RNA au mélange réactionnel. Ajoutez ensuite votre échantillon d’ADN ou d’ARN et démarrez la réaction sur n’importe quel thermocycleur. Le manuel du kit contient des protocoles optimisés pour l’utilisation des sondes TaqMan® sur un grand nombre de thermocycleurs. Il contient également des recommandations pour la sélection des combinaisons de colorants.

Chaque QuantiFast Pathogen +IC Kit comprend l'Internal Control Assay et l'Internal Control DNA ou RNA à utiliser comme contrôle d’amplification par ajout direct au mélange réactionnel. Par ailleurs, l’IC peut être ajouté à la procédure de purification afin de contrôler à la fois le processus de purification et l’amplification. Pour l’ajout du l'Internal Control à la procédure de purification, il est possible de commander séparément l'Internal Control DNA or RNA (High conc.) (voir figure «  Contrôle interne QIAGEN »).

Les QuantiFast Pathogen +IC Kits permettent une PCR en temps réel sensible ou une RT-PCR en une étape au moyen de sondes spécifiques de séquence pour la détection de l’ADN et/ou de l’ARN du pathogène, y compris un contrôle interne. Les kits peuvent être utilisés sur un grand nombre de thermocycleurs en temps réel, notamment les thermocycleurs de QIAGEN, Applied Biosystems, Bio-Rad, Roche (à l’exception des thermocycleurs capillaires) et Agilent.