QIAGEN Plasmid Plus 96 Kits

• ADN plasmidique de qualité de transfection avec des niveaux d’endotoxine < 1 EU/µg d’ADN
• Pureté de l’ADN comparable à la technologie d’échange d’anions
• Hauts rendements (jusqu’à 50 µg)
• Manipulation pratique et procédure simple
• Possibilités de vide, de centrifugation et de traitement automatisé

Les QIAGEN Plasmid Plus 96 Kits prévoient une méthode unique de préparation de plasmides dans un format de 96 puits. Les échantillons peuvent être facilement traités à l’aide du QIAvac 96 et/ou d’une centrifugeuse ou de façon automatisée sur le BioRobot Universal System. La chimie de liaison exclusive permet d’obtenir jusqu’à 50 µg d’ADN plasmidique de qualité de transfection par puits à partir de 5 ml maximum d’une culture d’E. coli. Les niveaux d’endotoxine sont réduits à des niveaux inférieurs à 1 EU/µg d’ADN en raison d’un tampon de réduction d’endotoxine dédié.
Pour des résultats optimaux, il est recommandé d’utiliser ce produit avec le QIAvac 96.

Hauts rendements homogènes d’ADN plasmidique prêt à l’emploi

La technologie QIAGEN Plasmid Plus offre les mêmes performances et la même qualité que la technologie d’échange d’anions. De hauts rendements de 50 µg maximum d’ADN plasmidique de qualité de transfection peuvent être obtenus (voir la figure «  Hauts rendements d’ADN plasmidique »).

Niveaux d’endotoxine très faibles

Les kits incluent un tampon de réduction d’endotoxine qui réduit efficacement les endotoxines bactériennes pour qu’elles atteignent des niveaux généralement inférieurs à 1 EU/µg d’ADN, fournissant ainsi une qualité d’ADN plasmidique appropriée pour la transfection dans des lignées cellulaires sensibles (voir les figures «  Niveaux d’endotoxine très faibles » et «  Transfection hautement efficace dans une lignée cellulaire sensible »).

Les QIAGEN Plasmid Plus 96 Kits s’appuient sur la technologie QIAGEN Plasmid Plus, une méthode unique pour la préparation de plasmides. La procédure est basée sur une chimie de liaison non chaotropique qui garantit une sélectivité et une qualité d’ADN comparables à celles des préparations d’échange d’anions. À la suite du nettoyage des lysats, une procédure simple de liaison-lavage-élution produit un ADN plasmidique hautement concentré pouvant s’utiliser directement dans les applications ultérieures. La chimie unique du kit et la conception des plaques Plasmid Plus 96 garantissent de grandes capacités de liaison.

Cette méthode unique de préparation de plasmides dans un format de 96 puits produit un ADN plasmidique de qualité de transfection et extrêmement pur à l’aide d’une procédure de liaison-lavage-élution (voir le schéma «  Procédure QIAGEN PlasmidPlus 96 »).

Le protocole QIAGEN Plasmid Plus 96 Miniprep commence par une procédure de lyse alcaline modifiée. Après neutralisation, les lysats sont nettoyés à l’aide d’une plaque TurboFilter 96. Un tampon de liaison non chaotropique est ajouté au lysat nettoyé afin d’optimiser la liaison de l’ADN plasmidique à la membrane de la plaque Plasmid Plus 96. Le tampon de liaison unique fournit des conditions de liaison très spécifiques qui produisent une qualité d’ADN comparable aux préparations d’échange d’anions. Une étape de lavage avec un tampon de réduction d’endotoxine produit un ADN plasmidique de qualité de transfection adapté à la transfection dans la plupart des lignées cellulaires (voir la figure «  Transfection extrêmement efficace dans les lignées cellulaires sensibles »). La chimie de liaison exclusive permet la purification de 50 µg maximum d’ADN plasmidique par puits à partir d’une culture d’E. coli de 5 ml (voir la figure «  Hauts rendements d’ADN plasmidique »).

Possibilités de traitement pratiques et flexibles

Il est possible d’automatiser entièrement la procédure à l’aide du QIAGEN Plasmid Plus 96 BioRobot Kit sur le BioRobot Universal System. Le QIAvac 96 peut également être utilisé pour le nettoyage de lysats à l’aide de la plaque TurboFilter 96, et les étapes de liaison de l’ADN et de lavage peuvent être effectuées à l’aide de la plaque Plasmid Plus 96. Les étapes de séchage et d’élution peuvent être effectuées sur le QIAvac 96 ou à l’aide d’une centrifugeuse compatible. De plus, l’ensemble de la procédure peut être réalisée à l’aide d’une centrifugeuse compatible.

L’ADN plasmidique purifié à l’aide des QIAGEN Plasmid Plus 96 Kits convient parfaitement à une grande variété d’applications, y compris :

• Transfection, y compris dans les lignées cellulaires sensibles
• Préparation des vecteurs courts en épingle (« sh-vectors »)
• Modifications enzymatiques
• Clonage
• Digestion par enzymes de restriction