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Cat. No. / ID: 32903
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Ce kit contient 3 vecteurs (pQE-16, pQE-60 et pQE-70) pour l’expression des protéines marquées à l’hexahistidine (6xHis) au niveau C-terminal, il est recommandé pour les cadres ouverts de lecture avec « sites de pause », susceptibles de provoquer une fin prématurée. Le pQE-60 et le pQE-70 permettent au codon d’initiation d’origine du fragment codant de remplacer l’ATG du vecteur pQE, en préservant le terminus N authentique de la protéine. Ces deux structures sont créées par l’introduction d’un site de restriction NcoI et SphI, respectivement, au niveau du codon ATG de l’insert par PCR ou mutagenèse. Le pQE-16 permet l’expression des protéines de fusion DHFR marquées 6xHis au niveau C-terminal. La DHFR (dihydrofolate réductase) améliore l’antigénicité et la stabilité, elle est recommandée pour les protéines insuffisamment exprimées ou les peptides courts soumis à la protéolyse. Dans la mesure où la DHFR donne une faible immunogénicité chez la souris et le rat, les protéines de fusion DHFR sont idéales pour l’identification des épitopes.
Les vecteurs pQE QIAexpress associent un promoteur puissant du bactériophage T5 (reconnu par l’ARN polymérase d’E. coli) à un module de répression de l’opérateur doublelac afin d’obtenir une expression optimale, extrêmement bien régulée, des protéines recombinantes dans E. coli (voir l’illustration Vecteur pQE QIAexpress). La synthèse des protéines est véritablement bloquée avec des taux élevés de répresseur lac et la stabilité des structures cytotoxiques s’en trouve améliorée. Les vecteurs pQE permettent de placer le 6xHis-tag sur le terminus N ou C de la protéine recombinante.
Élément | Description |
Élément promoteur/opérateur optimisé | Comprend le promoteur du bactériophage T5 et deux séquences de l’opérateur lac, ce qui accroît la probabilité de liaison du répresseur lac et assure une répression efficace du promoteur puissant du T5 |
Site de liaison ribosomique synthétique RBSII | Pour une traduction efficace |
Séquence codante du 6xHis-tag | 5' ou 3' vers le site de clonage multiple |
Codons stop traductionnels | Dans tous les cadres de lecture pour une préparation pratique des structures d’expression |
Deux terminateurs de transcription puissants | t0 à partir du bactériophage lambda et T1 à partir de l’opéron rrnB d’E. coli, pour empêcher toute transcription ininterrompue et assurer la stabilité de la structure d’expression |
Origine de réplication ColE1 | À partir de pBR322 |
Gène bêta-lactamase (bla) | Offre une résistance à l’ampicilline |
Les inserts codant les protéines d’intérêt sont clonés dans les structures qui conviennent (pour plus de détails, consultez le Manuel de QIAexpressionist) puis transformés en une souche d’E. coli adaptée à l’expression. L’expression est induite par l’ajout d’IPTG. Les structures du vecteur pQE-TriSystem peuvent être transformées en E. coli, utilisées comme vecteur navette pour l’expression des protéines recombinantes dans les cellules d’insectes ou introduites dans des cellules de mammifères.
Le système QIAexpress Expression permet une expression très performante des protéines adaptée à bon
nombre d’applications, notamment :
Features | Specifications |
---|---|
Expression species | E. coli |
In-frame cloning necessary | Oui |
N- or C-terminal tag | C-terminal-tag |
Expression | In vivo |
Special features | D’après le système de transcription-traduction du promoteur de T5 |
Tag | 6xHis-tag |
Tag removal sequence | Non |
All three reading frames provided | Oui |