Anti·His Antibodies, BSA-free

Pour la détection sensible des protéines marquées à l’histidine (His) avec un épitope RGS·His ou HHHH

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RGS·His Antibody, BSA-free (100 µg)

Cat. No. / ID:  34650

100 µg d’anti·RGS(H)4 de souris (lyophilisé, sans ASB, pour 1 000 ml de solution prête à l’emploi)
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679,00 €
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Tag
RGS·His
Tetra·His
Penta·His
Les Anti·His Antibodies, BSA-free sont destinés aux applications de biologie moléculaire. Ces produits ne sont pas conçus pour le diagnostic, la prévention ou le traitement des maladies.

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Features

  • Détection hautement spécifique des marqueurs C-terminal, N-terminal et His-tag interne
  • Détection hautement sensible et spécifique des épitopes RGS·His
  • Détection hautement sensible et spécifique des épitopes HHHHH

Product Details

Les anticorps monoclonaux anti·His de souris (anticorps 5xHis et 4xHis), tels que RGS·His Antibody, BSA-free, Tetra·His Antibody, BSA-free et Penta·His Antibody, BSA-free, permettent de détecter les protéines recombinantes présentant des marqueurs His-tag. Chacun des trois variants détecte un épitope du marqueur His-tag différent. Comme tous les anticorps monoclonaux de souris de QIAGEN, ils sont préparés sans sérum, ce qui garantit l’absence de virus, de mycoplasme et d’immunoglobulines contaminantes.

Performance

Bon nombre de protéines ont été détectées, via leurs marqueurs His-tag, à l’aide des QIAexpress Anti·His Antibodies (anticorps 5xHis et 4xHis) (consultez le tableau « Performances des anticorps anti-His »). Pour la sensibilité des trois anticorps anti·His dans la détection de ce panel de protéines, consultez l’illustration  « Sensibilité des QIAexpress Anti·His Antibodies »). Les anticorps anti·His permettent l’identification de clones d’expression positive par transfert de colonies (consultez l’illustration  « Identification de clones d’expression positive par transfert de colonies ») et la détection de la thiorédoxine marquée à l’histidine (consultez l’illustration  « Thiorédoxine marquée à l’histidine détectée par anticorps Penta·His dans des cellules de levure »). En outre, les anticorps sont parfaitement adaptés aux procédures d’immunohistochimie (consultez l’illustration  « Immunohistochimie avec anticorps Penta·His »).

Performances des anticorps anti-His

Caractéristique RGS·His Antibody, BSA-free Tetra·His Antibody, BSA-free et Penta·His Antibody, BSA-free
Détection Marqueur His-tag N-terminal (contenant l’épitope RGSHHHH) Marqueur N-terminal, C-terminal et 4xHis-tag (Tetra·His Antibody, BSA-free) ou 5xHis-tag interne (Penta·His Antibody, BSA-free)
Épitope détecté RGSHHHH HHHH (Tetra·His Antibody, BSA-free) ou HHHHH (Penta·His Antibody, BSA-free)
Sensibilité dans les transferts en point* 0,5 ng 0,5 ng
Sensibilité dans les transferts de western* 2 ng 2 ng
Isotype IgG1 de souris IgG1 de souris
Réactivité croisée Négligeable avec lysats cellulaires bruts d’E. coli, levure, mammifère ou insecte Négligeable avec lysats cellulaires bruts d’E. coli, levure, mammifère ou insecte
Forme Lyophilisé Lyophilisé
Solution prête à l’emploi 1 000 ml 1 000 ml

Protéines détectées avec les QIAexpress Anti His Antibodies

  Protéine Emplacement du marqueur Séquence
A DHFR Extrémité N-terminale MRGSHHHHHHGSVRPLNCIV..........
B DHFR Extrémité C-terminale .........VYEKKDGSRSHHHHHH
C Thiorédoxine Extrémité N-terminale MRGSHHHHHHGSSDKIIHLT..........
D TNF-α Extrémité N-terminale MRHHHHHHQSTESMIRDV.........
E TFIIAγ Extrémité N-terminale MGSSHHHHHHSSGLVPRGSH.....
F Chaperonine Extrémité C-terminale ..........AKIAKDGSRSHHHHHH
G ADN polymérase Extrémité C-terminale ..........EDWLSAKERSHHHHHH
H TFIIAαß Interne ......QQQHQPQQQQHHHHHHHQQAQPQQTVP....

 

See figures

Principle

Le QIAexpress System fournit le matériel nécessaire à l’expression, la purification, la détection et le dosage des protéines marquées à la 6xHis. Pour la détection, les anticorps monoclonaux de souris QIAexpress sont produits dans des conditions qui garantissent une pureté et une activité maximales. La culture cellulaire d’hybridome se fait sans sérum, ce qui garantit des préparations dépourvues de virus, de mycoplasme et d’immunoglobulines contaminantes. La purification par chromatographie d’adsorption s’effectue entièrement avec un pH physiologique, cela donne des préparations présentant la proportion maximale d’anticorps natifs.

Procedure

Le Manuel de détection et de dosage QIAexpress, qui accompagne tous les produits de détection et dosage QIAexpress, contient des exemples détaillés de protocoles et des consignes pour la conception et la réalisation des dosages.

Applications

Les QIAexpress Detection Systems, y compris RGS·His Antibody, BSA-free, Tetra·His Antibody, BSA-free et Penta·His Antibody, BSA-free, permettent de détecter efficacement les protéines marquées à l’histidine et sont adaptés à de nombreuses applications, notamment :

  • Procédures de transfert de colonies, en point et de western
  • Recherche de clones d’expression positive
  • Surveillance des niveaux d’expression et de la stabilité des protéines marquées à l’histidine
  • Immunoprécipitation et ELISA
  • Immunocytochimie et immunohistochimie

Supporting data and figures

Resources

Kit Handbooks (1)
For Anti·His Antibodies, Anti·His HRP Conjugates, Penta·His™ Alexa Fluor® Conjugates, Penta·His Biotin Conjugate, Ni-NTA Conjugates, Tag·100™ Antibody, Streptavidin–R-PE, 6xHis Protein Ladder, Ni-NTA HisSorb™ Strips and Plates 
Supplementary Protocols (1)
Certificates of Analysis (1)

Publications

Localization of the gD-binding region of the human herpes simplex virus receptor, HveA.
Whitbeck JC; Connolly SA; Willis SH; Hou W; Krummenacher C; Ponce de Leon M; Lou H; Baribaud I; Eisenberg RJ; Cohen GH;
J Virol; 2001; 75 (1):171-80 2001 Jan PMID:11119586
Multiple sulfatase deficiency is caused by mutations in the gene encoding the human C(alpha)-formylglycine generating enzyme.
Dierks T; Schmidt B; Borissenko LV; Peng J; Preusser A; Mariappan M; von Figura K;
Cell; 2003; 113 (4):435-44 2003 May 16 PMID:12757705
Screening for soluble expression of recombinant proteins in a 96-well format.
Knaust RK; Nordlund P;
Anal Biochem; 2001; 297 (1):79-85 2001 Oct 1 PMID:11567530
A human cDNA expression library in yeast enriched for open reading frames.
Holz C; Lueking A; Bovekamp L; Gutjahr C; Bolotina N; Lehrach H; Cahill DJ;
Genome Res; 2001; 11 (10):1730-5 2001 Oct PMID:11591650
Phosphorylation of the vesicle-tethering protein p115 by a casein kinase II-like enzyme is required for Golgi reassembly from isolated mitotic fragments.
Dirac-Svejstrup AB; Shorter J; Waters MG; Warren G;
J Cell Biol; 2000; 150 (3):475-88 2000 Aug 7 PMID:10931861

FAQ

How should I dissolve the lyophilized Anti-His and Tag Antibodies?
Dissolve the lyophilized Anti-His Antibodies (100 µg) in 500 µl water per vial. The final concentration is 0.2 mg/ml. Dissolve the Anti-His Antibody Selector Kit antibodies (3 µg) in 15 µl water per tube (final concentration, 0.2 mg/ml).
-100
What epitopes do the Anti-His Conjugates and Anti-His Antibodies recognize?

The table below lists the epitopes recognized by the Anti-His Conjugates and Anti-His Antibodies. 'H' designates a histidine residue, while 'X' designates any amino acid other than histidine. Note that individual 6xHis-tagged proteins are often recognized better by one Anti-His Antibody than by the others, possibly because of subtle differences in the exact conformation of the 6xHis tag and other parts of the protein in the vicinity of the tag. To choose the optimal antibody for your specific 6xHis-tagged protein and application, QIAGEN offers the Anti-His Antibody Selector Kit. The kit includes 3 µg of each of the three antibodies for direct comparison and economical selection of the one that gives the best results.

Epitopes recognized by QIAexpress Anti-His HRP Conjugates and Anti-His Antibodies


Peptide Penta-His Tetra-His RGS-His
XHHHHHHX
+ +
XXHHHHHX
+ +
XHXHHHHX
+
XHHHHXHX
+
XRGSHHHHX
+ +
XRGSHHHHHHX
+ + +
XHXHHXHX

Note that the presence of specific residues N- or C-terminal to the epitope is not required.

FAQ ID -170
Which Anti-His Antibody is the most sensitive for my protein of interest?

Penta-His and Tetra-His Antibody bind to proteins that have 6xHis tags regardless of the surrounding amino-acids, even when the tag is partially hidden. Subtle differences in the antigen recognition sites of these antibodies mean that some 6xHis-tagged proteins are detected with higher sensitivity by one Anti-His Antibody than by the others (see figure below). Therefore, to achieve optimum results, we recommend comparison of these antibodies in parallel for new applications and proteins. QIAGEN offers the Anti-His Antibody Selector Kit for this purpose.


 

Sensitivity of QIAexpress Anti·His Antibodies



 

Note:  RGS His Antibody regonizes the RGS(His)4 epitope that is found on proteins endcoded by most pQE vectors as well as several pRSETan pBlue BacHis -vectors from Invitrogen.

FAQ ID -172
What are the dissociation constants for the Anti-His Antibodies?

Anti·His Antibody epitopes and dissociation constants

Antibody Epitope Dissociation constant Kd (M)*
RGS·His Antibody RGSHHHH 1 x 10–8 – 5 x 10–8
Penta·His Antibody HHHHH 5 x 10–8 – 1 x 10–9
Tetra·His Antibody HHHH 1 x 10–8 – 5 x 10–8

* Dissociation constants were measured using surface plasmon resonance (BIACORE) technology. The exact value of Kd is dependent on the individual 6xHis-tagged protein.

FAQ ID -385
Are QIAGEN monoclonal Anti His Antibodies glycosylated?
Yes, QIAGEN antibodies are glycosylated to a low extent. We did not determine whether this is N-glycosylation or O-glycosylation. Furthermore, we do not know, if the glycosylation pattern does change, since we do not measure it. Glycosylation does not have any impact onto the function of the antibody. If customers want to use the glycosylchains for coupling reactions we know that this is very difficult to do.
FAQ ID -334
How is an antibody epitope determined?
This is done via epitope mapping. The antibody in question is first tested against different protein fragments and peptides. Once the amino acids detected by the antibody are determined, the surrounding amino acids can be exchanged to reveal the influence of the environment on the detection of a specific epitope.
FAQ ID -593
What blocking reagents do you recommend for chemiluminescent detection using Penta-, Tetra-, and RGS-His antibodies?

Please do not use buffer containing milk powder to block the Western Blot. This will reduce sensitivity. QIAGEN recommends use 3% BSA in TBS-buffer to block the membrane and for incubation of the Anti His Antibody on the membrane. For the binding of the secondary Antibody BSA does not sufficiently block and therfore 10% milk powder in TBS-buffer should be used at this step only. Alternatively, if alkali-soluble casein (Merck, Cat. No. 1.02241) is available in your country it can be used as a blocking reagent throughout the chemiluminescent detection protocol. Please see Table 9 of the QIAxpress Detection and Assay Handbook for additional information.

FAQ ID -1093
What is the difference between BSA-free and BSA-containing RGS-His Antibody?

BSA stabilizes the RGS-His Antibody. We recommend to use the BSA-containing RGS-His Antibody for all standard procedures like dot blots, western blots, etc.. In cases where BSA may interfere with the application, e.g. coupling reactions, the RGS-His Antibody, BSA-free is recommended.

The Tetra-His and Penta-His Antibodies are stable without BSA, and therefore are only offered BSA-free.

FAQ ID -569
How should I store Anti·His and Tag·100 Antibodies?
QIAGEN Anti·His Antibodies should be stored lyophilized until they are to be used. They can be stored lyophilized for 1 year at 2–8°C. In solution they can be stored for 3 months at 2–8°C or for up to 6 months in aliquots at –20°C. Avoid repeated freezing and thawing.
FAQ ID -194