Anti·His Antibodies, BSA-free

Pour la détection sensible des protéines marquées à l’histidine (His) avec un épitope RGS·His ou HHHH

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RGS·His Antibody, BSA-free (100 µg)

Cat. No. / ID: 34650

100 µg d’anti·RGS(H)₄ de souris (lyophilisé, sans ASB, pour 1 000 ml de solution prête à l’emploi)

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679,00 €

Tag

RGS·His

Tetra·His

Penta·His

Quantity

Les Anti·His Antibodies, BSA-free sont destinés aux applications de biologie moléculaire. Ces produits ne sont pas conçus pour le diagnostic, la prévention ou le traitement des maladies.

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Features

Détection hautement spécifique des marqueurs C-terminal, N-terminal et His-tag interne
Détection hautement sensible et spécifique des épitopes RGS·His
Détection hautement sensible et spécifique des épitopes HHHHH

Product Details

Les anticorps monoclonaux anti·His de souris (anticorps 5xHis et 4xHis), tels que RGS·His Antibody, BSA-free, Tetra·His Antibody, BSA-free et Penta·His Antibody, BSA-free, permettent de détecter les protéines recombinantes présentant des marqueurs His-tag. Chacun des trois variants détecte un épitope du marqueur His-tag différent. Comme tous les anticorps monoclonaux de souris de QIAGEN, ils sont préparés sans sérum, ce qui garantit l’absence de virus, de mycoplasme et d’immunoglobulines contaminantes.

Performance

Bon nombre de protéines ont été détectées, via leurs marqueurs His-tag, à l’aide des QIAexpress Anti·His Antibodies (anticorps 5xHis et 4xHis) (consultez le tableau « Performances des anticorps anti-His »). Pour la sensibilité des trois anticorps anti·His dans la détection de ce panel de protéines, consultez l’illustration « Sensibilité des QIAexpress Anti·His Antibodies »). Les anticorps anti·His permettent l’identification de clones d’expression positive par transfert de colonies (consultez l’illustration « Identification de clones d’expression positive par transfert de colonies ») et la détection de la thiorédoxine marquée à l’histidine (consultez l’illustration « Thiorédoxine marquée à l’histidine détectée par anticorps Penta·His dans des cellules de levure »). En outre, les anticorps sont parfaitement adaptés aux procédures d’immunohistochimie (consultez l’illustration « Immunohistochimie avec anticorps Penta·His »).

Performances des anticorps anti-His

Caractéristique	RGS·His Antibody, BSA-free	Tetra·His Antibody, BSA-free et Penta·His Antibody, BSA-free
Détection	Marqueur His-tag N-terminal (contenant l’épitope RGSHHHH)	Marqueur N-terminal, C-terminal et 4xHis-tag (Tetra·His Antibody, BSA-free) ou 5xHis-tag interne (Penta·His Antibody, BSA-free)
Épitope détecté	RGSHHHH	HHHH (Tetra·His Antibody, BSA-free) ou HHHHH (Penta·His Antibody, BSA-free)
Sensibilité dans les transferts en point*	0,5 ng	0,5 ng
Sensibilité dans les transferts de western*	2 ng	2 ng
Isotype	IgG1 de souris	IgG1 de souris
Réactivité croisée	Négligeable avec lysats cellulaires bruts d’E. coli, levure, mammifère ou insecte	Négligeable avec lysats cellulaires bruts d’E. coli, levure, mammifère ou insecte
Forme	Lyophilisé	Lyophilisé
Solution prête à l’emploi	1 000 ml	1 000 ml

* Détection avec substrat chromogène. La sensibilité peut varier avec des protéines différentes.

Protéines détectées avec les QIAexpress Anti His Antibodies

	Protéine	Emplacement du marqueur	Séquence
A	DHFR	Extrémité N-terminale	MRGSHHHHHHGSVRPLNCIV..........
B	DHFR	Extrémité C-terminale	.........VYEKKDGSRSHHHHHH
C	Thiorédoxine	Extrémité N-terminale	MRGSHHHHHHGSSDKIIHLT..........
D	TNF-α	Extrémité N-terminale	MRHHHHHHQSTESMIRDV.........
E	TFIIAγ	Extrémité N-terminale	MGSSHHHHHHSSGLVPRGSH.....
F	Chaperonine	Extrémité C-terminale	..........AKIAKDGSRSHHHHHH
G	ADN polymérase	Extrémité C-terminale	..........EDWLSAKERSHHHHHH
H	TFIIAαß	Interne	......QQQHQPQQQQHHHHHHHQQAQPQQTVP....

See figures

Sensibilité des anticorps anti-His.

Identification de clones d’expression positive par transfert de colonies.

Thiorédoxine marquée à l’histidine détectée par anticorps Penta His dans des cellules de levure.

Immunohistochimie avec anticorps Penta His.

Principle

Le QIAexpress System fournit le matériel nécessaire à l’expression, la purification, la détection et le dosage des protéines marquées à la 6xHis. Pour la détection, les anticorps monoclonaux de souris QIAexpress sont produits dans des conditions qui garantissent une pureté et une activité maximales. La culture cellulaire d’hybridome se fait sans sérum, ce qui garantit des préparations dépourvues de virus, de mycoplasme et d’immunoglobulines contaminantes. La purification par chromatographie d’adsorption s’effectue entièrement avec un pH physiologique, cela donne des préparations présentant la proportion maximale d’anticorps natifs.

Procedure

Le Manuel de détection et de dosage QIAexpress, qui accompagne tous les produits de détection et dosage QIAexpress, contient des exemples détaillés de protocoles et des consignes pour la conception et la réalisation des dosages.

Applications

Les QIAexpress Detection Systems, y compris RGS·His Antibody, BSA-free, Tetra·His Antibody, BSA-free et Penta·His Antibody, BSA-free, permettent de détecter efficacement les protéines marquées à l’histidine et sont adaptés à de nombreuses applications, notamment :

Procédures de transfert de colonies, en point et de western
Recherche de clones d’expression positive
Surveillance des niveaux d’expression et de la stabilité des protéines marquées à l’histidine
Immunoprécipitation et ELISA
Immunocytochimie et immunohistochimie

Supporting data and figures

Sensibilité des anticorps anti-His.

Détection des protéines marquées à l’hexahistidine (6xHis) avec anticorps anti-His (anticorps Tetra His au centre). A : dihydrofolate réductase (DHFR) ; B : DHFR ; C : thiorédoxine ; D : TNF-α ; E : TFIIAγ ; F : chaperonine ; ADN polymérase G ; H : TFIIAαß ; pour l’emplacement des marqueurs et les séquences détectées, consultez le tableau « Protéines détectées avec les anticorps anti-His QIAexpress ». Les quantités indiquées de protéines pures marquées à la 6xHis ont été appliquées sur une membrane de nitrocellulose, puis la détection a été effectuée avec l’anticorps primaire anti-His indiqué dilué à 1/2 000, suivie d’une détection chromogénique avec de l’IgG anti-souris de lapin conjuguée à la phosphatase alcaline (PA) et du NBT/BCIP.

Resources

For Anti·His Antibodies, Anti·His HRP Conjugates, Penta·His™ Alexa Fluor® Conjugates, Penta·His Biotin Conjugate, Ni-NTA Conjugates, Tag·100™ Antibody, Streptavidin–R-PE, 6xHis Protein Ladder, Ni-NTA HisSorb™ Strips and Plates

Publications

Localization of the gD-binding region of the human herpes simplex virus receptor, HveA.

Whitbeck JC; Connolly SA; Willis SH; Hou W; Krummenacher C; Ponce de Leon M; Lou H; Baribaud I; Eisenberg RJ; Cohen GH;

J Virol; 2001; 75 (1):171-80 2001 Jan PMID:11119586

Multiple sulfatase deficiency is caused by mutations in the gene encoding the human C(alpha)-formylglycine generating enzyme.

Dierks T; Schmidt B; Borissenko LV; Peng J; Preusser A; Mariappan M; von Figura K;

Cell; 2003; 113 (4):435-44 2003 May 16 PMID:12757705

Screening for soluble expression of recombinant proteins in a 96-well format.

Knaust RK; Nordlund P;

Anal Biochem; 2001; 297 (1):79-85 2001 Oct 1 PMID:11567530

A human cDNA expression library in yeast enriched for open reading frames.

Holz C; Lueking A; Bovekamp L; Gutjahr C; Bolotina N; Lehrach H; Cahill DJ;

Genome Res; 2001; 11 (10):1730-5 2001 Oct PMID:11591650

Phosphorylation of the vesicle-tethering protein p115 by a casein kinase II-like enzyme is required for Golgi reassembly from isolated mitotic fragments.

Dirac-Svejstrup AB; Shorter J; Waters MG; Warren G;

J Cell Biol; 2000; 150 (3):475-88 2000 Aug 7 PMID:10931861

FAQ

Dissolve the lyophilized Anti-His Antibodies (100 µg) in 500 µl water per vial. The final concentration is 0.2 mg/ml. Dissolve the Anti-His Antibody Selector Kit antibodies (3 µg) in 15 µl water per tube (final concentration, 0.2 mg/ml).

-100

The table below lists the epitopes recognized by the Anti-His Conjugates and Anti-His Antibodies. 'H' designates a histidine residue, while 'X' designates any amino acid other than histidine. Note that individual 6xHis-tagged proteins are often recognized better by one Anti-His Antibody than by the others, possibly because of subtle differences in the exact conformation of the 6xHis tag and other parts of the protein in the vicinity of the tag. To choose the optimal antibody for your specific 6xHis-tagged protein and application, QIAGEN offers the Anti-His Antibody Selector Kit. The kit includes 3 µg of each of the three antibodies for direct comparison and economical selection of the one that gives the best results.

Epitopes recognized by QIAexpress Anti-His HRP Conjugates and Anti-His Antibodies

Peptide	Penta-His	Tetra-His	RGS-His
XHHHHHHX	+	+	–
XXHHHHHX	+	+	–
XHXHHHHX	–	+	–
XHHHHXHX	–	+	–
XRGSHHHHX	–	+	+
XRGSHHHHHHX	+	+	+
XHXHHXHX	–	–	–

Note that the presence of specific residues N- or C-terminal to the epitope is not required.

FAQ ID -170

Penta-His and Tetra-His Antibody bind to proteins that have 6xHis tags regardless of the surrounding amino-acids, even when the tag is partially hidden. Subtle differences in the antigen recognition sites of these antibodies mean that some 6xHis-tagged proteins are detected with higher sensitivity by one Anti-His Antibody than by the others (see figure below). Therefore, to achieve optimum results, we recommend comparison of these antibodies in parallel for new applications and proteins. QIAGEN offers the Anti-His Antibody Selector Kit for this purpose.

Sensitivity of QIAexpress Anti·His Antibodies

Note: RGS His Antibody regonizes the RGS(His)4 epitope that is found on proteins endcoded by most pQE vectors as well as several pRSETan pBlue BacHis -vectors from Invitrogen.

FAQ ID -172

Anti·His Antibody epitopes and dissociation constants

Antibody	Epitope	Dissociation constant K_d (M)*
RGS·His Antibody	RGSHHHH	1 x 10^–8 – 5 x 10^–8
Penta·His Antibody	HHHHH	5 x 10^–8 – 1 x 10^–9
Tetra·His Antibody	HHHH	1 x 10^–8 – 5 x 10^–8

* Dissociation constants were measured using surface plasmon resonance (BIACORE) technology. The exact value of K_d is dependent on the individual 6xHis-tagged protein.

FAQ ID -385

Yes, QIAGEN antibodies are glycosylated to a low extent. We did not determine whether this is N-glycosylation or O-glycosylation. Furthermore, we do not know, if the glycosylation pattern does change, since we do not measure it. Glycosylation does not have any impact onto the function of the antibody. If customers want to use the glycosylchains for coupling reactions we know that this is very difficult to do.

FAQ ID -334

This is done via epitope mapping. The antibody in question is first tested against different protein fragments and peptides. Once the amino acids detected by the antibody are determined, the surrounding amino acids can be exchanged to reveal the influence of the environment on the detection of a specific epitope.

FAQ ID -593

Please do not use buffer containing milk powder to block the Western Blot. This will reduce sensitivity. QIAGEN recommends use 3% BSA in TBS-buffer to block the membrane and for incubation of the Anti His Antibody on the membrane. For the binding of the secondary Antibody BSA does not sufficiently block and therfore 10% milk powder in TBS-buffer should be used at this step only. Alternatively, if alkali-soluble casein (Merck, Cat. No. 1.02241) is available in your country it can be used as a blocking reagent throughout the chemiluminescent detection protocol. Please see Table 9 of the QIAxpress Detection and Assay Handbook for additional information.

FAQ ID -1093

BSA stabilizes the RGS-His Antibody. We recommend to use the BSA-containing RGS-His Antibody for all standard procedures like dot blots, western blots, etc.. In cases where BSA may interfere with the application, e.g. coupling reactions, the RGS-His Antibody, BSA-free is recommended.

The Tetra-His and Penta-His Antibodies are stable without BSA, and therefore are only offered BSA-free.

FAQ ID -569

QIAGEN Anti·His Antibodies should be stored lyophilized until they are to be used. They can be stored lyophilized for 1 year at 2–8°C. In solution they can be stored for 3 months at 2–8°C or for up to 6 months in aliquots at –20°C. Avoid repeated freezing and thawing.

FAQ ID -194