QIAGEN Plasmid Plus Kits – Extraction de l’ADN plasmidique

• Purification rapide d’un maximum de 24 échantillons
• Traitement rapide en parallèle par aspiration
• Volumes d’élution faibles pour ADN hautement concentré
• Niveaux d’endotoxine très faibles (< 1 EU/µg) en raison du tampon de lavage dédié

Les QIAGEN Plasmid Plus Kits assurent une purification ultrarapide et à grande échelle de 10 mg d’ADN plasmidique extrêmement pur. L’utilisation d’un collecteur de vide permet d’effectuer la purification d’un maximum de 24 échantillons en parallèle, réduisant ainsi le temps de manipulation. Les volumes d’élution faibles produisent de l’ADN plasmidique hautement concentré pour une utilisation directe sans précipitation à l’éthanol. Les QIAGEN Plasmid Plus Kits présente également un tampon de lavage dédié pour la réduction des endotoxines. L’ADN plasmidique obtenu convient parfaitement à de nombreuses applications, y compris la transfection dans des lignées cellulaires sensibles.

Pour des résultats optimaux, il est recommandé d’utiliser ce produit avec le QIAvac 24 Plus.

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Qualité et performances homogènes

La technologie QIAGEN Plasmid Plus offre les mêmes performances et la même qualité que la technologie d’échange d’anions. La chimie de liaison unique des colonnes QIAGEN Plasmid Plus garantit l’obtention d’un ADN plasmidique pur à chaque fois. Des protocoles à rendements élevés et des volumes de tampons supplémentaires sont fournis dans les QIAGEN Plasmid Plus Kits. Des rendements d’ADN plasmidique extrêmement pur pouvant atteindre 10 mg (giga),
2 mg (méga), 1 mg (maxi), et 250 μg (midi) maximum, exempts de contaminants tels que l’ARN, les protéines et l’ADN génomique sont obtenus (voir les figures «  Des rendements élevés sont garantis avec les QIAGEN Plasmid Plus Kits [QPP] » et «  Chromatogramme analytique »).

ADN plasmidique de qualité de transfection avec des niveaux d’endotoxine très faibles

Les endotoxines, aussi connues sous le nom de lipopolysaccharides ou LPS, sont des composants de la membrane cellulaire des bactéries à Gram négatif telles qu’E. coli et sont libérées lors de l’étape de lyse de la purification des plasmides. Les endotoxines peuvent induire une activation non spécifique des réponses immunitaires et représentent par conséquent une variable non contrôlable de la configuration de l’expérience de transfection, influençant l’issue et la reproductibilité des résultats et rendant leur comparaison et leur interprétation difficiles.

Le tampon de lavage d’endotoxine fourni dans les kits réduit les endotoxines bactériennes à des niveaux généralement inférieurs à 1 EU/µg d’ADN. (Les niveaux d’endotoxine peuvent varier selon la souche hôte, le milieu de culture et la densité cellulaire. Si la densité cellulaire est très élevée, les niveaux d’endotoxine peuvent être légèrement plus élevés, dans une plage comprise entre 1 et 3 EU/µg d’ADN.) Par conséquent, l’ADN plasmidique obtenu convient à de nombreuses applications, y compris la transfection dans des lignées cellulaires sensibles (voir les figures «  Niveaux d’endotoxine avec les QIAGEN Plasmid Plus Kits », «  Niveaux d’endotoxine selon différentes méthodes d’isolement » et «  Transfection efficace dans les lignées cellulaires sensibles »).

Les QIAGEN Plasmid Plus Kits fournissent la méthode la plus pratique pour la préparation de plasmides à grande échelle. La conception et la chimie de liaison unique des colonnes QIAGEN Plasmid Plus prévoient une procédure simple de liaison-lavage-élution basée sur une nouvelle chimie. Grâce à cette procédure, ces kits représentent la préparation à grande échelle la plus rapide qui soit : 20 minutes pour les maxipréparations et midipréparations. L’ADN plasmidique qui en résulte est hautement concentré et prêt pour une utilisation immédiate dans les applications ultérieures sans autre précipitation à l’éthanol. Ainsi, l’ADN plasmidique convient parfaitement aux applications qui n’autorisent que de faibles volumes de réaction.

Rendements de plasmides maximaux à l’aide de LyseBlue

LyseBlue, un indicateur de couleur facultatif qui fournit une identification visuelle d’un mélange optimal de tampons, est également inclus dans le kit. Il permet d’éviter les erreurs de manipulation courantes qui entraînent l’inefficacité de la lyse cellulaire et une précipitation incomplète du SDS, de l’ADN génomique et des débris cellulaires. Par un simple changement de couleur, cet additif de tampon unique garantit la réalisation d’une lyse cellulaire et d’une neutralisation optimales, maximisant ainsi les rendements.

Les cartouches QIAfilter fournies dans les QIAGEN Plasmid Plus Kits permettent un nettoyage rapide des lysats. Le chargement du lysat nettoyé sur la colonne peut être effectué en une étape, ce qui permet de gagner du temps. Un collecteur de vide (tel que le QIAvac 24 Plus) est utilisé pour aspirer le lysat nettoyé et les tampons de lavage ultérieurs à travers la colonne QIAGEN Plasmid Plus. Après le lavage et le séchage de la membrane, l’ADN hautement concentré est élué dans de faibles volumes par centrifugation (voir le schéma «  Procédure QIAGEN Plasmid Plus »).

Les QIAGEN Plasmid Plus Kits fournissent de l’ADN plasmidique de qualité de transfection parfaitement adapté à toutes les applications, telles que :

• Transfection dans la plupart des lignées cellulaires (par exemple, les lignes cellulaires sensibles, telles que Huh-7)
• Digestion par enzymes de restriction
• Clonage
• Transcription et traduction in vitro
• Séquençage