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Des dosages conçus par des experts vous permettent d’exploiter pleinement le potentiel de la dPCR pour répondre au mieux à vos questions biologiques spécifiques. Rejoignez QIAGEN pour concevoir, exécuter et, éventuellement, vérifier vos résultats, en tirant parti de notre expertise en matière de conception de dosages personnalisés.
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La dPCR augmente la sensibilité de la détection et de la quantification absolue des événements rares et des variants de séquence en créant un partitionnement qui augmente la concentration de la cible spécifique. Par exemple, une mutation présente à 0,1 % peut être détectée sur un fond d’ADN génomique de type sauvage à l’aide de la dPCR. L’amplification et la détection en point final au-dessus du bruit, avec un appel de cible positif/négatif binaire permet une quantification précise, qui est indépendante des performances d’amplification (affectées, par exemple, par la présence d’inhibiteurs de la PCR).
En fonction de vos besoins, les Custom dPCR LNA Assays sont conçus pour fonctionner dans une configuration simplex ou multiplex, en utilisant une approche basée sur une sonde ou sur EvaGreen et une amorce. La PCR numérique constitue la méthode la plus sensible et la plus fiable pour détecter des événements rares sur un fond. Les Custom dPCR LNA Assays font appel à des amorces et sondes améliorées par des LNA qui accroissent la spécificité et la sensibilité des dosages, rendant possible la détection, par exemple, d’une mutation présente à 0,1 % sur un fond d’ADN génomique de type sauvage dans un même puits de nanoplaque.
Pour configurer l’expérience de dPCR, ajouter une aliquote de l’échantillon d’ADN génomique (isolé à partir d’échantillons frais, congelés ou fixés) au Master Mix du QIAcuity Probe PCR Kit ou du QIAcuity EG PCR Kit avec le Custom dPCR LNA Assay. Chaque réaction est analysée dans un ou plusieurs puits de la QIAcuity Nanoplate.
Après chargement et scellage de la nanoplaque, sélectionnez le programme de thermocyclage recommandé sur l’instrument QIAcuity. Une fois la dPCR terminée, le nombre de copies/µl pour chacune de vos séquences cibles est indiqué dans la QIAcuity Software Suite. Vous pouvez trouver plus de détails dans le protocole de démarrage rapide du Custom dPCR LNA Assay.