QuantiFast Multiplex RT-PCR Kits
For fast, multiplex, one-step qRT-PCR using sequence-specific probes for gene expression analysis
- Sensitive detection of multiple RNA targets in 1 well
- Faster results with time savings of up to 50%
- Successful multiplex RT-PCR without the need for optimization
- Precise discrimination of small differences in target amount
- Detection of reference gene and up to 3 targets in the same tube
QuantiFast Multiplex RT-PCR Kits enable fast and reliable quantification of up to 4 RNA targets in a single tube by multiplex, real-time one-step RT-PCR. A special blend of reverse transcriptases delivers fast and efficient cDNA synthesis. Q-bond technology and an optimized master mix promote fast, multiplex real-time RT-PCR, not only on fast cyclers with short ramping times, but also on standard cyclers. The combination of a hot start and a unique PCR buffer system in the ready-to-use master mix ensures highly sensitive qPCR on any real-time cycler without the need for optimization. Two kit formats are available: the QuantiFast Multiplex RT-PCR Kit for cyclers that require ROX dye for fluorescence normalization, and the QuantiTect Multiplex RT-PCR +R Kit for all other cyclers. For convenience, the master mix can be stored at 2–8°C.
ja-JP
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製品名
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Cat. no.
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List price:
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QuantiFast Multiplex RT-PCR Kit (400)
For 400 x 25 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x QuantiFast Multiplex RT-PCR Master Mix (with ROX dye), 100 µl QuantiFast RT Mix, 2 x 2 ml RNase-Free Water
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QuantiFast Multiplex RT-PCR +R Kit (400)
For 400 x 25 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x QuantiFast Multiplex RT-PCR Master Mix (without ROX dye), 100 µl QuantiFast RT Mix, 210 µl ROX Dye Solution, 2 x 2 ml RNase-Free Water
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QuantiFast Multiplex RT-PCR +R Kit (2000)
For 2000 x 25 µl reactions: 25 ml 2x QuantiFast Multiplex RT-PCR Master Mix (without ROX dye), 500 µl QuantiFast RT Mix, 1.05 ml ROX Dye Solution, 1 x 20 ml RNase-Free Water
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204956
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QuantiFast Multiplex RT-PCR Kits は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。
RT-PCR時間を顕著に短縮|信頼性のある相対定量|Triplex とsingleplex RT-PCRで同等の結果を実現|卓越した感度の4-plex RT-PCR|プライマーの高速なアニーリング|QIAGEN multiplex kits|ユニークなバッファーにより安定かつ効率的なプライマーアニーリングを実現|
QuantiFast Multiplex Kitsは1ステップリアルタイムRT-PCRで全RT-PCR時間を最高50%まで短縮する(40サイクル;QuantiTect Multiplex Kitsと比較)。I: iCycler iQ、 L1:LightCycler 480、L2:LightCycler 2.0、A1:ABI PRISM 790、A2:Applied Biosystems 7500 Fast System、M:Mx3005P |細胞株X を2 つの化合物で処理(YまたはZ)あるいは未処理(U)。RNA を精製し、QuantiFast Multiplex RT-PCR +R Kit とmyogenin およびGAPDHに特異的なTaqMan Gene Expression Assay を用いて1 ステップのduplex リアルタイムRT-PCR をApplied Biosystems 7500 Fast Systemで行なった。各処理ごとに5回の独立した実験を行なった。[A] Myogenin 発現の変化が高い精度と再現性で検出された(緑色の曲線)。ハウスキーピング遺伝子GAPDHの発現は全ての実験で類似している(青色の曲線)ので、ΔΔCT法による相対定量を用いたmyogenin 発現レベルの標準化が可能である。[B] 未処理細胞のmyogenin 発現量に対して標準化したmyogenin 発現レベルの相対的な変化は実験間で一定であることが、誤差バーが小さいことから示唆される(データ提供;Angelika Meyer, Novartis Pharma AG, Basel, Switzerland)。|[A] RPS27A(リボソームタンパク質)、[B] GAPDH(ハウスキーピング遺伝子)、[C] UBC(ハウスキーピング遺伝子)用にデザインしたTaqMan アッセイとQuantiFast Multiplex RT-PCR +R Kit を用いて1ステップのtriplex およびsingleplexリアルタイムRT-PCRをLightCycler 480を用いて行なった。テンプレートであるRamos 細胞のRNA(10 ng、1 ng、0.1 ng)を用いてduplicateで行なった。Triplex PCR(色つきの曲線)とsingleplex PCR(グレーの曲線)の類似するCT 値および [D] 高いPCR効率は、異なる発現量のターゲットの解析でQuantiFast Multiplex RT-PCR +R Kit を用いて信頼できるtriplex PCRを実現することを証明している。|QuantiFast Multiplex RT-PCR +R Kit とPrimer Express でデザインしたTaqMan アッセイを用いて1ステップの4-plex リアルタイムRT-PCRを行なった。テンプレートとしてRamos細胞株のRNA 10 ng を用いてduplicate 反応を行なった。4つのターゲットの発現量には大きな差があるが、全て再現性よく検出された。|[A] QuantiFast Buffer中のQ-Bondは、短い一本鎖化したDNAへのDNAポリメラーゼの結合アフィニティーを増大させるため、プライマーのアニーリング時間を数秒間に短縮できる。さらにDNAの融解をサポートするユニークなバッファー組成が、変性およびエクステンション時間を短縮する。[B] Q-Bond が存在しないと、プライマーとポリメラーゼが連続的にテンプレートに結合するのでプライマーのアニーリングに時間がかかる。|QuantiFast Multiplex RT-PCR Kitsは、簡単な操作でマルチプレックスリアルタイムRT-PCRを実現する。汎用されている方法に比べて、本キットはプライマー、プローブ、Mg2+、Taq DNA polymeraseの濃度に対する至適化が不要で、リファレンス遺伝子に比べてターゲット遺伝子のコピー数が少ないアッセイでも同様。|[A] NH4+ イオンは非特異的なプライマーのテンプレートへのアニーリングを防ぐ。[B] 画期的なPCR添加物であるFactor MP は、テンプレート周辺でのプライマー濃度を高める。K+ や他の陽イオンと共に、Factor MPは特異的に結合したプライマーを安定化し、HotStarTaq Plus DNA Polymeraseによる効果的なプライマーエクステンションを可能にする。|
パフォーマンス
QuantiFast Multiplex RT-PCR Kits reduce RT-PCR run times by up to 50%, allowing you to get results significantly faster (see figure "Significantly reduced RT-PCR times"). You can also greatly increase your sample throughput or efficiently share a cycler with other users. Amplifying control and target genes in the same reaction, instead of in separate reactions, increases the reliability of gene quantification by minimizing handling errors (see figure "Reliable relative quantification"). The special master mix supplied with QuantiFast Multiplex RT-PCR Kits allows rapid setup of multiplex reactions and delivers successful results at the first attempt, providing multiplex RT-PCR data that are comparable with singleplex RT-PCR data (see figure "Comparable results in triplex and singleplex RT-PCR").
QuantiFast Multiplex RT-PCR Kits can clearly distinguish between small differences in the amount of template. Even with two-fold differences in template amount, the kits provide accurate quantification of targets of widely differing abundance. Fast results in multiplex, real-time RT-PCR of up to 4 targets are achieved without compromising performance (see figure "Uncompromised sensitivity in 4-plex RT-PCR").
原理
QuantiFast Multiplex RT-PCR Kits deliver highly sensitive and rapid results over a wide dynamic range on both standard and fast cyclers without optimization (see flowchart "QIAGEN multiplex kits"). The specially developed fast PCR buffer contains the novel additive Q-Bond, which significantly reduces denaturation, annealing, and extension times (see figure "Fast primer annealing").
Amplifying reference and target genes in the same reaction instead of in separate reactions increases the reliability of gene quantification by minimizing handling errors. The QuantiFast Multiplex RT-PCR Buffer includes a balanced combination of K+ and NH4+ ions to promote specific primer annealing, while unique Factor MP stabilizes specifically bound primers (see figure "Unique PCR buffer"). In addition, an optimized mix of reverse transcriptases provides efficient cDNA synthesis in just 20 minutes, while HotStarTaq Plus DNA Polymerase provides a stringent hot start, preventing the formation of nonspecific products.
| HotStarTaq Plus DNA Polymerase |
5 min activation at 95ºC |
Set up of qPCR reactions at room temperature |
| QuantiFast Multiplex RT-PCR Buffer |
Balanced combination of NH4+ and K+ ions |
Specific primer annealing ensures reliable PCR results |
| Synthetic Factor MP |
Reliable multiplexing analysis of up to 4 genes in the same tube |
| Unique Q-Bond additive |
Faster PCR run times, enabling faster results and more reactions per day |
| ROX dye† |
Normalizes fluorescent signals on Applied Biosystems and, optionally, Agilent instruments |
Precise quantification on cyclers that require ROX dye. Does not interfere with PCR on any real-time cycler |
| QuantiFast RT Mix |
Special blend of reverse transcriptases with high affinity for RNA |
RNA can be transcribed in just 20 minutes, even through complex secondary structures |
操作手順
QuantiFast Multiplex RT-PCR Kits contain ready-to-use master mixes that eliminate the need for optimization of reaction and cycling conditions. Simply add template RNA and primer-probe sets to the master mix and follow the protocol in the handbook to get fast and reliable results on any real-time cycler. Kits are available with or without ROX passive reference dye in the master mix, enabling use on virtually any real-time cycler (see table). Due to the optimized ROX concentrations, detection of even low copy numbers is achieved through automatic data analysis.
| Supplied in master mix |
QuantiFast Multiplex RT-PCR Kit |
All cyclers from Applied Biosystems except Applied Biosystems 7500 |
| Supplied in separate tube |
QuantiFast Multiplex RT-PCR +R Kit |
Applied Biosystems 7500 and cyclers from Bio-Rad, Cepheid, Eppendorf, QIAGEN, Roche, Agilent, and other suppliers |
アプリケーション
QuantiFast Multiplex RT-PCR Kits can be used for multiplex gene expression analysis of RNA targets on any real-time cycler. This includes instruments from Applied Biosystems, Bio-Rad, Cepheid, Eppendorf, Roche, and Agilent. For the Rotor-Gene Q and other Rotor-Gene cyclers, we recommend using the Rotor-Gene Multiplex RT-PCR Kit, which has been specially developed for fast cycling on these instruments.
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Feature
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Specifications
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Applications
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Real-time quantification of RNA targets in a multiplex format
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Reaction type
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Real-time one-step RT-PCR
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Real-time or endpoint
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Real-time
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Sample/target type
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RNA
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Single or multiplex
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Multiplex
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SYBR Green I or sequence-specific probes
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Sequence-specific probes
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Thermal cycler
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Real-time cyclers dedicated for multiplex PCR (e.g., most Applied Biosystems real-time PCR cyclers, Roche LightCycler 480, and Bio-Rad iCycler iQ)
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With or without ROX
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Available with ROX in master mix or with ROX as separate vial
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FAQ ID -2119
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FAQ ID -2144
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FAQ ID -2145
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FAQ ID -2147
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FAQ ID -2371
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FAQ ID -2655
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FAQ ID -2682
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FAQ ID -539
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FAQ ID -589
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FAQ ID-751
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For quantitative, multiplex, real-time one-step RT-PCR with fast cycling using sequence-specific probes
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配列特異的なプローブを用いて高速な1ステップでのマルチプレックス・リアルタイム定量RT-PCR
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Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
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画像
RT-PCR時間を顕著に短縮
QuantiFast Multiplex Kitsは1ステップリアルタイムRT-PCRで全RT-PCR時間を最高50%まで短縮する(40サイクル;QuantiTect Multiplex Kitsと比較)。I: iCycler iQ、 L1:LightCycler 480、L2:LightCycler 2.0、A1:ABI PRISM 790、A2:Applied Biosystems 7500 Fast System、M:Mx3005P
信頼性のある相対定量
細胞株X を2 つの化合物で処理(YまたはZ)あるいは未処理(U)。RNA を精製し、QuantiFast Multiplex RT-PCR +R Kit とmyogenin およびGAPDHに特異的なTaqMan Gene Expression Assay を用いて1 ステップのduplex リアルタイムRT-PCR をApplied Biosystems 7500 Fast Systemで行なった。各処理ごとに5回の独立した実験を行なった。[A] Myogenin 発現の変化が高い精度と再現性で検出された(緑色の曲線)。ハウスキーピング遺伝子GAPDHの発現は全ての実験で類似している(青色の曲線)ので、ΔΔCT法による相対定量を用いたmyogenin 発現レベルの標準化が可能である。[B] 未処理細胞のmyogenin 発現量に対して標準化したmyogenin 発現レベルの相対的な変化は実験間で一定であることが、誤差バーが小さいことから示唆される(データ提供;Angelika Meyer, Novartis Pharma AG, Basel, Switzerland)。
Triplex とsingleplex RT-PCRで同等の結果を実現
[A] RPS27A(リボソームタンパク質)、[B] GAPDH(ハウスキーピング遺伝子)、[C] UBC(ハウスキーピング遺伝子)用にデザインしたTaqMan アッセイとQuantiFast Multiplex RT-PCR +R Kit を用いて1ステップのtriplex およびsingleplexリアルタイムRT-PCRをLightCycler 480を用いて行なった。テンプレートであるRamos 細胞のRNA(10 ng、1 ng、0.1 ng)を用いてduplicateで行なった。Triplex PCR(色つきの曲線)とsingleplex PCR(グレーの曲線)の類似するCT 値および [D] 高いPCR効率は、異なる発現量のターゲットの解析でQuantiFast Multiplex RT-PCR +R Kit を用いて信頼できるtriplex PCRを実現することを証明している。
卓越した感度の4-plex RT-PCR
QuantiFast Multiplex RT-PCR +R Kit とPrimer Express でデザインしたTaqMan アッセイを用いて1ステップの4-plex リアルタイムRT-PCRを行なった。テンプレートとしてRamos細胞株のRNA 10 ng を用いてduplicate 反応を行なった。4つのターゲットの発現量には大きな差があるが、全て再現性よく検出された。
プライマーの高速なアニーリング
[A] QuantiFast Buffer中のQ-Bondは、短い一本鎖化したDNAへのDNAポリメラーゼの結合アフィニティーを増大させるため、プライマーのアニーリング時間を数秒間に短縮できる。さらにDNAの融解をサポートするユニークなバッファー組成が、変性およびエクステンション時間を短縮する。[B] Q-Bond が存在しないと、プライマーとポリメラーゼが連続的にテンプレートに結合するのでプライマーのアニーリングに時間がかかる。
QIAGEN multiplex kits
QuantiFast Multiplex RT-PCR Kitsは、簡単な操作でマルチプレックスリアルタイムRT-PCRを実現する。汎用されている方法に比べて、本キットはプライマー、プローブ、Mg2+、Taq DNA polymeraseの濃度に対する至適化が不要で、リファレンス遺伝子に比べてターゲット遺伝子のコピー数が少ないアッセイでも同様。
ユニークなバッファーにより安定かつ効率的なプライマーアニーリングを実現
[A] NH4+ イオンは非特異的なプライマーのテンプレートへのアニーリングを防ぐ。[B] 画期的なPCR添加物であるFactor MP は、テンプレート周辺でのプライマー濃度を高める。K+ や他の陽イオンと共に、Factor MPは特異的に結合したプライマーを安定化し、HotStarTaq Plus DNA Polymeraseによる効果的なプライマーエクステンションを可能にする。
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