Para una purificación lo más rápida y cómoda posible de hasta 10 mg de ADN plasmídico de grado de transfección
N.º de cat. / ID. 12943
Los QIAGEN Plasmid Plus Kits posibilitan la purificación ultrarrápida a gran escala de hasta 10 mg de ADN plasmídico de elevada pureza. El uso del colector de vacío permite la purificación de hasta 24 muestras en paralelo, lo que reduce el tiempo de manipulación. Los bajos volúmenes de elución producen ADN plasmídico altamente concentrado para su uso directo sin precipitación con etanol. Los QIAGEN Plasmid Plus Kits también incorporan un tampón de lavado especializado para reducir los niveles de endotoxinas. El ADN plasmídico obtenido es muy idóneo para una gran variedad de aplicaciones, incluida la transfección en estirpes celulares sensibles.
Para obtener resultados óptimos, se recomienda utilizar este producto junto con QIAvac 24 Plus.
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La tecnología QIAGEN Plasmid Plus ofrece el mismo rendimiento y calidad que la tecnología de intercambio aniónico. La exclusiva química de unión de las columnas QIAGEN Plasmid Plus garantiza que se obtiene siempre ADN plasmídico puro. Protocolos de alto rendimiento y volúmenes de tampón extra con los QIAGEN Plasmid Plus Kits. Se alcanza un rendimiento de ADN plasmídico ultrapuro, sin contaminantes como ARN, proteínas y ADN genómico de hasta 10 mg (giga),
2 mg (mega), 1 mg (maxi) y 250 μg (midi) (véanse las figuras “ Altos rendimientos asegurados con los QIAGEN Plasmid Plus Kits (QPP)” y “ Cromatograma analítico”).
Las endotoxinas, también conocidas como lipopolisacáridos o LPS, son componentes de la membrana celular de bacterias gramnegativas como E. coli y se liberan durante la etapa de lisis de la purificación de plásmidos. Las endotoxinas pueden inducir una activación inespecífica de las respuestas inmunitarias, por lo que representan una variable no controlable en la configuración de los experimentos de transfección, influyendo en el resultado y la reproducibilidad de estos y dificultando su comparación e interpretación.
El tampón de lavado de endotoxinas proporcionado en los kits reduce las endotoxinas bacterianas a niveles de ADN que suelen ser inferiores a 1 UE/μg. (Los niveles de endotoxinas pueden variar en función de la cepa anfitriona, los medios de cultivo y la densidad celular. Si la densidad celular es muy alta, los niveles de endotoxina pueden ser ligeramente superiores, y oscilan entre ADN con 1-3 UE/μg). Esto hace que el ADN plasmídico sea idóneo para una gran variedad de aplicaciones, incluida la transfección en estirpes celulares sensibles (véanse las figuras “ Niveles de endotoxinas con los QIAGEN Plasmid Plus Kits”, “ Niveles de endotoxina con diferentes métodos de aislamiento” y “ Transfección eficiente en estirpes celulares sensibles”.
Los QIAGEN Plasmid Plus Kits proporcionan el método más adecuado para la preparación de plásmidos a gran escala. El diseño y la exclusiva química de unión de las columnas QIAGEN Plasmid Plus permiten un sencillo procedimiento de unión, lavado y dilución a partir de una química novedosa. Este procedimiento convierten estos kits en las preparaciones a gran escala más rápidas en el mercado: 20 minutos para preparaciones maxi y midi. El ADN plasmídico resultante es muy concentrado y está listo para su uso inmediato en aplicaciones posteriores sin necesidad de más precipitación de etanol. Por lo tanto, el ADN plasmídico es muy idóneo para aplicaciones que solo permiten volúmenes pequeños de reacción.
LyseBlue, un indicador de color opcional que proporciona identificación visual de mezcla de tampón óptima, también se incluye en el kit. Esto evita errores de manipulación habituales que lleven a un lisado de células ineficaz y a la precipitación incompleta de SDS, restos celulares y ADN genómico. Mediante un cambio de color simple, este aditivo de tampón exclusivo garantiza que se consigue una neutralización y una lisis celular óptimas, a la vez que se maximiza el rendimiento.
Características | Plasmid Plus Giga Kit | Plasmid Plus Mega Kit | Plasmid Plus Maxi Kit | Plasmid Plus Midi Kit |
|---|---|---|---|---|
| Aplicaciones | Transfección de la mayoría de las estirpes celulares, clonación, restricción enzimática, traducción/transcripción in vitro, secuenciación | Transfección de la mayoría de las estirpes celulares, clonación, restricción enzimática, traducción/transcripción in vitro, secuenciación | Transfección de la mayoría de las estirpes celulares, clonación, restricción enzimática, traducción/transcripción in vitro, secuenciación | Transfección de la mayoría de las estirpes celulares, clonación, restricción enzimática, traducción/transcripción in vitro, secuenciación |
| Material inicial/volumen de cultivo | 2500 ml de volumen de cultivo | 500 ml de volumen de cultivo | 50-200 ml de volumen de cultivo | 25-50 ml de volumen de cultivo |
| Concentración de ADN final | ≥1 µg/µl | ≥1 µg/µl | ≥1 µg/µl | ≥1 µg/µl |
| Tipo de plásmido | Plásmidos, cósmidos | Plásmidos, cósmidos | Plásmidos, cósmidos | Plásmidos, cósmidos |
| Procesamiento | Manual (centrifugación y vacío), procesamiento en paralelo | Manual (centrifugación y vacío), procesamiento en paralelo | Manual (centrifugación y vacío), procesamiento en paralelo | Manual (centrifugación y vacío), procesamiento en paralelo |
| Muestras por serie, rendimiento | 1-12 muestras por serie | 1-12 muestras por serie | 1-24 muestras por serie | 1-24 muestras por serie |
| Tecnología | Tecnología de sílice avanzada (no caotrópica), reducción de endotoxinas | Tecnología de sílice avanzada (no caotrópica), reducción de endotoxinas | Tecnología de sílice avanzada (no caotrópica), reducción de endotoxinas | Tecnología de sílice avanzada (no caotrópica), reducción de endotoxinas |
| Tiempo por serie | 50 min | 40 min | 20 min | 20 min |
| Rendimiento | Hasta 10 mg | Hasta 2,5 mg | Hasta 1 mg | Hasta 250 µg |
Los cartuchos QIAfilter suministrados con los QIAGEN Plasmid Plus Kits favorecen el aclaramiento rápido de lisado. La carga del lisado aclarado en la columna se puede llevar a cabo en un solo paso, lo que ahorra tiempo. Se utiliza un colector de vacío (como el QIAvac 24 Plus) para aspirar el lisado aclarado y los tampones de lavado posteriores a través de la columna QIAGEN Plasmid Plus. Tras el lavado y secado de la membrana, el ADN muy concentrado se diluye en volúmenes bajos mediante centrifugación (véase el diagrama “ Procedimiento de QIAGEN Plasmid Plus”).
Los QIAGEN Plasmid Plus Kits proporcionan ADN plasmídico de grado de transfección muy idóneo para todas las aplicaciones, tales como:
