La novedad absoluta en PCR – PCR digital

El poder de la PCR digital: encontrar “la aguja en el pajar”

La PCR digital (dPCR) es una técnica en la que la muestra se divide en muchas reacciones individuales, de tal modo que en cada reacción estén presentes cero, una o más moléculas diana. Gracias a este enfoque es sorprendentemente fácil detectar un solo positivo en un fondo muy potente de negativos, el típico problema de encontrar “a aguja en el pajar”. En estos casos, debido a la existencia de un límite de detección más bajo, quedan excluidas las real-time PCR estándar cuantitativas (qPCR) como posible método.

La característica definitoria de la PCR digital es la cuantificación absoluta de los ácidos nucleicos. Después de la partición, las reacciones se someten a termociclado de PCR convencional y las particiones se analizan para determinar la presencia (reacción positiva) o ausencia (reacción negativa) de una señal de fluorescencia. Atendiendo a esta información, se puede calcular el número absoluto de moléculas presentes en la muestra. A diferencia de la qPCR, la dPCR no se basa en curvas estándar. Por ello, la dPCR tiene un límite de detección más bajo y una precisión mayor que la qPCR.

Los investigadores utilizan cada vez más el sistema de PCR digital para aplicaciones sensibles. El método ha ayudado a avanzar en la investigación de terapias celulares y genéticas, la investigación del cáncer, la vigilancia de enfermedades infecciosas, las pruebas de alimentos, etc.

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