HotStarTaq Plus Master Mix Kit

For fast and highly specific amplification in all applications
  • Fast 5-minute enzyme activation time
  • Fewer pipetting steps reduces the risk of contamination
  • High PCR specificity without the need for optimization
  • Optional ready-to-load buffer additive for easier handling
HotStarTaq Plus Master Mix contains HotStarTaq Plus DNA Polymerase, the unique QIAGEN PCR Buffer that minimizes the requirement for optimization, and dNTPs. The HotStarTaq Plus Master Mix Kit provides the same unrivalled highly specific and sensitive PCR as the HotStarTaq Master Mix Kit, but combined with a fast 5-minute enzyme activation time. In addition, CoralLoad Concentrate, containing two gel-tracking dyes, is also provided for improved pipetting visualization and immediate gel-loading of PCR products.
製品名 Cat. no. List price:
HotStarTaq Plus Master Mix Kit (250)
For 250 x 20 μl reactions: 3 x 0.85 ml HotStarTaq Plus Master Mix (contains 250 units of HotStarTaq Plus DNA Polymerase, PCR Buffer with 3 mM MgCl2, and 400 μM of each dNT), 1 x 0.55 ml CoralLoad Concentrate, 2 x 1.9 ml RNase-Free Water
203643
¥30,500
HotStarTaq Plus Master Mix Kit (1000)
For 1000 x 20 μl reactions: 12 x 0.85 ml HotStarTaq Plus Master Mix (contains 1000 units of HotStarTaq Plus DNA Polymerase, PCR Buffer with 3 mM MgCl2, and 400 μM of each dNTP), 4 x 0.55 ml CoralLoad Concentrate, 8 x 1.9 ml RNase-Free Water
203645
¥102,000
HotStarTaq Plus Master Mix Kit (2500)
For 2500 x 20 μl reactions: 25 ml HotStarTaq Plus Master Mix (contains 2500 units of HotStarTaq Plus DNA Polymerase total, PCR Buffer with 3 mM MgCl2, and 400 μM of each dNTP), 5.5 ml CoralLoad Concentrate, 2 x 20 ml RNase-Free Water
203646
¥224,000

HotStarTaq Plus Master Mix Kit  は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。


  • Main Image Navi
CoralLoad Concentrate|HotStarTaq Plus操作手順|最高の特異性。|異なるプライマー/テンプレートシステムにおける高特異性|RT-PCR性能へのホットスタートの影響|マルチプレックスPCRでの特異的な増幅|シングルセルで高感度なPCR|プライマーのアニーリングにおける特異性が増加|
[A] マーカー色素を含むCoralLoad PCR Buffer。 [B] CoralLoad PCR Bufferを用いるとPCR溶液をゲルに直接ロードできDNAの移動を簡単に認識できる。|HotStarTaq Plus 操作手順は迅速かつ容易で最高の使いやすさを実現|QIAGENの HotStarTaq Plus DNA Polymerase、HotStarTaq DNA Polymerase、Taq DNA Polymeraseおよび表記メーカーのホットスタートPCR酵素3種類を用いてPCRを行なった。50 ngのヒトゲノムDNAを用いて、メーカーの推奨する方法で反応を同時に行なった。ヒトCFTR遺伝子の1.5 kbフラグメントを35 PCRサイクルで増幅した。M:マーカー。|3種類の異なるプライマー/テンプレートシステムでR社のTaq DNA polymerase(R)、あるいはHotStarTaq DNA Polymerase (H)を用い、同じ条件下でPCRを行った。システム 1:ヒトゲノムDNAからD-IgIの1.1 kbのフラグメントを増幅した。システム 2:ヒトゲノムDNAからX連鎖性若年性網膜分離症に関与している領域の296 bpのフラグメントを増幅した。システム 3:トータルRNAより合成されたcDNAからβ-Actinの214 bpのフラグメントを増幅した。M:マーカー。注:HotStarTaq DNA Polymeraseのデータを示す。 同等の感度および特異性がHotStarTaq Plus DNA Polymeraseを用いて得られた。|ヒトインターロイキン1レセプター(タイプII)遺伝子の1.1 kbフラグメントをcDNAから増幅した。増幅反応は以下の組み合わせで3セット調製した。 L社のTaq DNA polymeraseとバッファー(No hot start);L社の抗体修飾した酵素とバッファー(抗体利用);QIAGENのHotStarTaq DNA PolymeraseとPCR Buffer(HotStarTaq)。M:マーカー。注:HotStarTaq DNA Polymeraseのデータを示す。 同等の感度および特異性がHotStarTaq Plus DNA Polymeraseを用いて得られた。|マウスp53遺伝子フラグメントをゲノムDNAからマルチプレックスPCRで増幅した。R社の酵素(No hot start)および QIAGEN のHotStarTaq Master Mix Kit(HotStarTaq Master Mix) を用いて、スタンダードの条件で増幅反応を同時に行った。M:マーカー。注:HotStarTaq Master Mix Kitのデータを示す。 同等の感度および特異性がHotStarTaq Plus Master Mix Kit を用いて得られた。|マウスのp53 遺伝子のフラグメント(500 bp)のシングルセルPCR を、HotStarTaq およびHotStarTaq Plus DNA Polymerase を用いてduplicate で行った。両酵素ともに同程度の高い特異性と感度を示した。M:マーカー。注:HotStarTaq Plus DNA Polymeraseのデータを示す。同等の感度および特異性がHotStarTaq Plus Master Mix Kit を用いて得られた。|QIAGEN PCRバッファー中のアンモニウムイオンとカリウムイオンにより、プライマーのアニーリングにおける特異性が増加。K+ はDNA バックボーンのリン酸基(P)に結合し、テンプレートへのプライマー·アニーリングを安定化する。サーマルサイクリング条件下では、アンモニウムイオンおよびアンモニアの両方として存在するNH4+は、塩基(B)間の水素結合に相互作用するため、ミスマッチの塩基間の水素結合を不安定にする。これら2 種類の陽イオンの組み合わせ効果により、幅広い温度範囲において非特異的なプライマー·テンプレート結合に対して特異的な結合の比率が高く保たれる。|
パフォーマンス

Each lot of HotStarTaq Plus DNA Polymerase is subjected to a comprehensive range of quality control tests, including a stringent PCR specificity and reproducibility assay in which low-copy targets are amplified. HotStarTaq Plus Master Mix Kit outperforms kits from other suppliers and ensures high specificity and superior performance in hot-start PCR (see figures "Highest specificity" and "Higher specificity with different primer–template systems", and table). The innovative PCR buffer provided with the kit ensures specificity over a wide range of PCR conditions, minimizing the need for optimization. CoralLoad Concentrate, also included with the kit, ensures greater convenience by improving pipetting visibility and allowing direct loading of PCR products onto a gel. CoralLoad Concentrate can be added to the PCR without affecting amplification sensitivity or specificity. PCR fragments amplified in the presence of CoralLoad Concentrate have been successfully tested for cloning and restriction digestion without prior purification.

The combination of high specificity and easy handling makes the HotStarTaq Plus Master Mix Kit suitable for use with complex genomic or cDNA templates (see figure "Effect of hot start on RT-PCR performance"), multiple primer pairs (see figure "Specific amplification in multiplex PCR), and templates isolated from difficult sources or very low-copy targets (see figure "Highly sensitive single-cell PCR"). The HotStarTaq Plus Master Mix Kit is also suitable for projects such as genetic screening, in which large numbers of samples are amplified.

Comparison of hot-start methods 
HotStarTaq Plus DNA Polymerase HotStarTaq DNA Polymerase Hot-start enzyme from Supplier AII Supplier R Supplier I (antibody-mediated) Manual Wax  barrier
Specific amplification ++ ++ + ++ + +/– +/–
Minimal PCR optimization ++ ++ +/– +/– +/–
Easy to use +++ ++ ++ + +
Speed of activation ++ + ++ ++ ++
HotStarTaq Plus DNA Polymerase specifications

Concentration: 5 units/µl
Recombinant enzyme: Yes
Substrate analogs: dNTP, ddNTP, dUTP, biotin-11-dUTP, DIG-11-dUTP, fluorescent-dNTP/ddNTP
Extension rate: 2–4 kb/min at 72°C
Half-life: 10 min at 97°C ; 60 min at 94°C
Amplification efficiency: ≥105 fold
5'–>3' exonuclease activity: Yes
Extra A addition: Yes
3'–>5' exonuclease activity: No
Contaminating nucleases: No
Contaminating RNases: No
Contaminating proteases: No
Self-priming activity: No 

原理

HotStarTaq Plus Master Mix is a ready-to-use mixture of HotStarTaq Plus DNA Polymerase, QIAGEN PCR Buffer, MgCl2, and dNTPs. HotStarTaq Plus DNA Polymerase provides the unrivaled performance of HotStarTaq DNA Polymerase with a shortened activation time of just 5 minutes.

HotStarTaq Plus DNA Polymerase, a modified form of QIAGEN Taq DNA Polymerase, is supplied in an inactive state that has no polymerase activity at ambient temperatures. This prevents extension of nonspecifically annealed primers and primer–dimers formed at low temperatures during PCR setup and the initial PCR cycle (see figures "Highest specificity" and "High specificity with different primer–template systems"). HotStarTaq Plus DNA Polymerase is activated by a short 5-minute incubation at 95°C, which can be easily incorporated into any existing thermal-cycler program.

QIAGEN PCR Buffer

QIAGEN PCR Buffer maintains specific amplification in every cycle of PCR by promoting a high ratio of specific-to-nonspecific primer binding during the annealing step in each PCR cycle (see figure "Increased specificity of primer annealing"). Owing to a uniquely balanced combination of KCl and (NH4)2SO4, the buffer provides stringent primer-annealing conditions over a wider range of annealing temperatures and Mg2+ concentrations than conventional PCR buffers. Optimization of PCR by varying the annealing temperature or the Mg2+ concentration is therefore often minimal or not required. 

CoralLoad Concentrate

The HotStarTaq Plus Master Mix Kit contains CoralLoad Concentrate (see figure "CoralLoad Concentrate"), which contains a gel-loading reagent and 2 gel-tracking dyes. CoralLoad Concentrate improves pipetting visibility and facilitates estimation of DNA migration distance and optimization of agarose gel run time. When using CoralLoad Concentrate, PCR products can be directly loaded onto an agarose gel without prior addition of loading buffer.

操作手順
HotStarTaq Plus Master Mix Kit is supplied in a convenient master mix format for maximum ease of use. HotStarTaq Plus DNA Polymerase is activated by a 5-minute, 95°C incubation step, which can easily be incorporated into existing thermal cycling programs. Room-temperature reaction setup using the master mix is fast and easy — simply pipet 10 µl HotStarTaq Plus Master Mix into each PCR tube and add 10 µl of primers and template DNA diluted in the RNase-free water provided with the kit (see figure "HotStarTaq Plus procedure"). Pipetting steps are minimized, reducing the possibility of errors and contamination, and ensuring increased throughput and reproducibility. The kit includes a streamlined, optimized protocol for fast and easy PCR setup. CoralLoad Concentrate, also provided with the kit, ensures improved pipetting visibility and enables direct loading of PCR products onto a gel for enhanced convenience.
アプリケーション

The HotStarTaq Plus Master Mix Kit is highly suitable for a wide variety of applications, including challenging applications such as amplification of: 

  • Complex genomic templates
  • Complex cDNA templates (e.g., RT-PCR)
  • Very low-copy targets (e.g., single-cell PCR)
  • Reactions with multiple primer pairs

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キットハンドブック
2
For highly specific hot-start PCR without optimization  
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至適化不要で特異性の高いホットスタートPCR
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クイックスタートプロトコール
1
MSDS
1
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
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画像
Ready-to-load PCR buffer
CoralLoad Concentrate
[A] マーカー色素を含むCoralLoad PCR Buffer。 [B] CoralLoad PCR Bufferを用いるとPCR溶液をゲルに直接ロードできDNAの移動を簡単に認識できる。
HotStarTaq Plus procedure
HotStarTaq Plus操作手順
HotStarTaq Plus 操作手順は迅速かつ容易で最高の使いやすさを実現
Highest specificity with HotStarTaq Plus Polymerase
最高の特異性。
QIAGENの HotStarTaq Plus DNA Polymerase、HotStarTaq DNA Polymerase、Taq DNA Polymeraseおよび表記メーカーのホットスタートPCR酵素3種類を用いてPCRを行なった。50 ngのヒトゲノムDNAを用いて、メーカーの推奨する方法で反応を同時に行なった。ヒトCFTR遺伝子の1.5 kbフラグメントを35 PCRサイクルで増幅した。M:マーカー。
Higher Specificity with Different Primer–Template Systems
異なるプライマー/テンプレートシステムにおける高特異性
3種類の異なるプライマー/テンプレートシステムでR社のTaq DNA polymerase(R)、あるいはHotStarTaq DNA Polymerase (H)を用い、同じ条件下でPCRを行った。システム 1:ヒトゲノムDNAからD-IgIの1.1 kbのフラグメントを増幅した。システム 2:ヒトゲノムDNAからX連鎖性若年性網膜分離症に関与している領域の296 bpのフラグメントを増幅した。システム 3:トータルRNAより合成されたcDNAからβ-Actinの214 bpのフラグメントを増幅した。M:マーカー。注:HotStarTaq DNA Polymeraseのデータを示す。 同等の感度および特異性がHotStarTaq Plus DNA Polymeraseを用いて得られた。
Effect of Hot Start on RT-PCR Performance
RT-PCR性能へのホットスタートの影響
ヒトインターロイキン1レセプター(タイプII)遺伝子の1.1 kbフラグメントをcDNAから増幅した。増幅反応は以下の組み合わせで3セット調製した。 L社のTaq DNA polymeraseとバッファー(No hot start);L社の抗体修飾した酵素とバッファー(抗体利用);QIAGENのHotStarTaq DNA PolymeraseとPCR Buffer(HotStarTaq)。M:マーカー。注:HotStarTaq DNA Polymeraseのデータを示す。 同等の感度および特異性がHotStarTaq Plus DNA Polymeraseを用いて得られた。
Specific Amplification in Multiplex PCR
マルチプレックスPCRでの特異的な増幅
マウスp53遺伝子フラグメントをゲノムDNAからマルチプレックスPCRで増幅した。R社の酵素(No hot start)および QIAGEN のHotStarTaq Master Mix Kit(HotStarTaq Master Mix) を用いて、スタンダードの条件で増幅反応を同時に行った。M:マーカー。注:HotStarTaq Master Mix Kitのデータを示す。 同等の感度および特異性がHotStarTaq Plus Master Mix Kit を用いて得られた。
Highly Sensitive Single-Cell PCR*
シングルセルで高感度なPCR
マウスのp53 遺伝子のフラグメント(500 bp)のシングルセルPCR を、HotStarTaq およびHotStarTaq Plus DNA Polymerase を用いてduplicate で行った。両酵素ともに同程度の高い特異性と感度を示した。M:マーカー。注:HotStarTaq Plus DNA Polymeraseのデータを示す。同等の感度および特異性がHotStarTaq Plus Master Mix Kit を用いて得られた。
NH4+ and K+ cations in QIAGEN PCR buffers increase specific primer annealing
プライマーのアニーリングにおける特異性が増加
QIAGEN PCRバッファー中のアンモニウムイオンとカリウムイオンにより、プライマーのアニーリングにおける特異性が増加。K+ はDNA バックボーンのリン酸基(P)に結合し、テンプレートへのプライマー·アニーリングを安定化する。サーマルサイクリング条件下では、アンモニウムイオンおよびアンモニアの両方として存在するNH4+は、塩基(B)間の水素結合に相互作用するため、ミスマッチの塩基間の水素結合を不安定にする。これら2 種類の陽イオンの組み合わせ効果により、幅広い温度範囲において非特異的なプライマー·テンプレート結合に対して特異的な結合の比率が高く保たれる。