HotStarTaq Plus DNA Polymerase

すべてのアプリケーションで迅速かつ特異的な増幅
  • 最小限の至適化で高いPCR特異性
  • わずか5分で迅速に酵素活性化
  • 直接ゲルにロード可能なPCR バッファーでより迅速かつ容易な操作

このPolymeraseはHotStarTaq DNA Polymeraseの持つ特異性、感度、最小限の至適化と、5分の迅速な活性化時間を組み合わせています。PCRセットアップは室温で行なうことができ、2種類のマーカー色素が入った画期的なCoralLoad PCR Bufferにより、反応液を直接アガロースゲルにロードできます。スタンダードのQIAGEN PCR Bufferも入っているので簡便な操作を実現します。さらに増幅困難なテンプレート(例;GCリッチ)用に画期的なQ-Solutionも入っています。ユニークなキット構成品ならびに至適化済みのプロトコールによりPCR操作が能率的になりました。

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HotStarTaq Plus DNA Polymerase (250)
250 units HotStarTaq Plus DNA Polymerase, 10x PCR Buffer, 10x CoralLoad PCR Buffer, 5x Q-Solution, 25 mM MgCl2
203603
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HotStarTaq Plus DNA Polymerase (1000)
1000 units HotStarTaq Plus DNA Polymerase, 10x PCR Buffer, 10x CoralLoad PCR Buffer, 5x Q-Solution, 25 mM MgCl2
203605
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HotStarTaq Plus DNA Polymerase (5000)
5000 units HotStarTaq Plus DNA Polymerase, 10x PCR Buffer, 10x CoralLoad PCR Buffer, 5x Q-Solution, 25 mM MgCl2
203607
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HotStarTaq Plus DNA Polymerase (25000)
25,000 units HotStarTaq Plus DNA Polymerase, 10x PCR Buffer, 10x CoralLoad PCR Buffer, 5x Q-Solution, 25 mM MgCl2
203609
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HotStarTaq Plus DNA Polymerase适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


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CoralLoad PCR Buffer|HotStarTaq Plus操作手順|最高の特異性|増幅困難なテンプレートを増幅|異なるプライマー/テンプレートシステムにおける高特異性|RT-PCR におけるホットスタートの効果|シングルセルで高感度なPCR|プライマーのアニーリングにおける特異性が増加|
[A] マーカー色素を含むCoralLoad PCR Buffer。 [B] CoralLoad PCR Bufferを用いるとPCR溶液をゲルに直接ロードできDNAの移動を簡単に認識できる。|HotStarTaq Plus 操作手順は迅速かつ容易で最高の使いやすさを実現します。|QIAGEN HotStarTaq Plus DNA Polymerase、HotStarTaq DNA Polymerase、Taq DNA Polymeraseおよび表記メーカーのホットスタートPCR酵素3種類を用いてPCRを行なった。50 ngのヒトゲノムDNAを用いて、メーカーの推奨する方法で反応を同時に行なった。ヒトCFTR遺伝子の1.5 kbフラグメントを35 PCRサイクルで増幅した。M:マーカー。|2種類のプライマー/テンプレートシステムにおいて1x Q-Solutionの非存在下()、あるいは存在下(+)でQIAGEN PCR BufferとTaq DNA DNA Polymeraseを用いて増幅した。Q-Solutionは増幅困難なテンプレートの特異性の高い増幅を実現。[A] ヒトアンジオテンシンレセプターII遺伝子、[B]  マウスプロテインキナーゼC遺伝子、M:マーカー。|3種類の異なるプライマー/テンプレートシステムでR社のTaq DNA polymerase(R)、あるいはHotStarTaq DNA Polymerase (H)を用い、同じ条件下でPCRを行った。システム 1:ヒトゲノムDNAからD-IgIの1.1 kbのフラグメントを増幅した。システム 2:ヒトゲノムDNAからX連鎖性若年性網膜分離症に関与している領域の296 bpのフラグメントを増幅した。システム 3:トータルRNAより合成されたcDNAからβ-アクチンの214 bpのフラグメントを増幅した。M:マーカー。注:HotStarTaq DNA Polymeraseのデータを示す。 同じ感度および特異性がHotStarTaq Plus DNA Polymeraseを用いて得られた。|ヒト・インターロイキン1レセプター(タイプII)遺伝子の1.1 kbフラグメントをcDNAから増幅した。増幅反応は以下の組み合わせで3セット調製した。 L社のTaq DNA polymeraseとバッファー(No hot start);L社の抗体修飾した酵素とバッファー(抗体利用);QIAGENのHotStarTaq DNA PolymeraseとPCR Buffer(HotStarTaq)。M:マーカー。注:HotStarTaq DNA Polymeraseのデータを示す。 同等の感度および特異性がHotStarTaq Plus DNA Polymeraseを用いて得られた。|フローサイトメトリ-を用いて直接各PCRチューブに分離した1個の細胞からマウスp53 遺伝子の500 bp フラグメントを増幅した。各反応は以下の組み合わせで行なった:QIAGENのHotStarTaq DNA PolymeraseとPCR Buffer(HotStarTaq)、AII社のホットスタート酵素とバッファー(Hot-start enzyme)、L社の抗体修飾した酵素とバッファー(抗体利用)。M:マーカー。注:HotStarTaq DNA Polymeraseのデータを示す。 同等の感度および特異性がHotStarTaq Plus DNA Polymeraseを用いて得られた。|QIAGEN PCRバッファー中のアンモニウムイオンとカリウムイオンにより、プライマーのアニーリングにおける特異性が増加。K+ はDNA バックボーンのリン酸基(P)に結合し、テンプレートへのプライマー·アニーリングを安定化する。サーマルサイクリング条件下では、アンモニウムイオンおよびアンモニアの両方として存在するNH4+は、塩基(B)間の水素結合に相互作用するため、ミスマッチの塩基間の水素結合を不安定にする。これら2 種類の陽イオンの組み合わせ効果により、幅広い温度範囲において非特異的なプライマー·テンプレート結合に対して特異的な結合の比率が高く保たれる。|
パフォーマンス
HotStarTaq Plus DNA Polymeraseは全てのロットで、低コピー数のターゲットを増幅する実験によりPCR特異性の厳密さや再現性をチェックするなど、広範囲の品質管理テストを受けています。HotStarTaq Plus DNA Polymeraseは他社のキットに比べて高性能で、特異性と感度の高いホットスタートPCRを実現します (図“最高の特異性”、“異なるプライマー/テンプレートシステムにおける高特異性”、および表)。キットに付属の画期的なPCRバッファーは、様々なPCR条件において特異性を実現し、至適化を最小限に抑えます。また、キットに付属のQ - Solutionにより、不適切なPCR条件を改善することができます(図 “増幅困難なテンプレートの増幅”)。これらの成分により様々なアプリケーションで特異的な増幅を実現します(図 “RT-PCRにおけるホットスタートの効果”および “高感度のシングルセルPCR”)。
ホットスタート法の比較  
HotStarTaq Plus DNA Polymerase HotStarTaq DNA Polymerase ホットスタート酵素AII R社 I社(抗体利用) マニュアル ワックスバリア
特異的な増幅 ++ ++ + ++ + +/– +/–
最小限のPCR至適化 ++ ++ +/– +/– +/–
取り扱いの簡便さ ++ ++ ++ + +
活性化のスピード ++ + ++ ++ ++
HotStarTaq Plus DNA Polymerases詳細データ

濃度:5 units/µl
組み換え酵素:Yes
基質アナログ:dNTP、ddNTP、dUTP、biotin-11-dUTP、DIG-11-dUTP、 fluorescent-dNTP/ddNTP
エクステンション速度:72℃ で2~4 kb/min 
半減期:97℃で10分、94℃で60分 
増幅効率:≥105
5'–>3' エキソヌクレアーゼ活性:Yes
余分なA付加:Yes
3'–>5' エキソヌクレアーゼ活性:No
ヌクレアーゼの混入:No
RNasesの混入:No
プロテアーゼの混入:No
自己プライマー活性:なし

原理

HotStarTaq Plus DNA Polymerase は、わずか5分間の迅速な活性化時間で、従来のHotStarTaq DNA Polymeraseの優れた性能を保持しています。

QIAGEN Taq DNA Polymerase を改良したHotStarTaq Plus Plus DNA Polymerase は、常温では不活性状態でポリメラーゼ活性はありません。この特性により、PCR セットアップや最初のPCR サイクル中の低温での非特異的なプライマーのアニーリングやプライマーダイマーの形成を回避できます(図“最高の特異性”および“異なるプライマー/テンプレートシステムにおける高特異性”)。HotStarTaq Plus DNA Polymeraseは、95℃、5 分間のインキュベーションステップで活性化され、このステップは既存のサーマルサイクリングのプログラムに容易に導入できます。

QIAGEN PCR Buffer

QIAGEN PCR Buffer は、各PCRサイクルでアニーリングステップ中にプライマー特異的な結合の割合を非特異的な結合に対して高めることにより、各PCRサイクルの特異的な増幅を維持します(図“プライマーのアニーリングにおける特異性が増加”)。このバッファーはユニークな配合比のKClと (NH4)2SO4を含み、従来のPCRバッファーに比べ、幅広いアニーリング温度やMg2+濃度の範囲で厳密で特異的なプライマー・アニーリングを実現します。従って、異なるアニーリング温度あるいはMg2+ 濃度を用いて行なうPCRの至適化は最小限ですみ、または不要なこともあります。 

CoralLoad PCR Buffer

HotStarTaq Plus DNA Polymeraseに付属のCoralLoad PCR BufferはQIAGEN PCR Bufferの特長をすべて備え、さらにPCR反応液を直接アガロースゲルにロードできます。 ゲルローディング用バッファーを前もって添加する必要がありません。CoralLoad PCR Bufferは従来のQIAGEN PCR Bufferと同様の高いPCR特異性をもち、反応の至適化は最小限に抑えられます。さらに、これに入っている2種類のマーカー色素(オレンジ色の色素と赤色の色素)により、DNAの移動距離の予測とアガロースゲルの泳動時間の至適化を容易に行なえます(図“CoralLoad PCR Buffer”)。本バッファーはピペッティングの目視化を改良し、PCR産物をゲルに直接ロードすることが可能なので、簡便性が増加します。  

Q-Solution

HotStarTaq Plus DNA Polymeraseに添付されている画期的なPCR添加剤であるQ-Solution は、DNA の変性環境を改善し、増幅困難なテンプレートの増幅を可能にします。このユニークな試薬により、高度な二次構造をもつテンプレートやGC リッチなテンプレートなどにより生じる不適切なPCR 条件が改善されることがあります(図“増幅困難なテンプレートの増幅”)。DMSOのような汎用されているPCR添加物と異なり、Q-Solutionは一定の濃度で作用し、毒性もなく、PCR純度は保証されています。Q-Solution の添加により、PCR の信頼性は損なわれません。

操作手順
HotStarTaq Plus DNA Polymeraseに付属の至適化済みのプロトコールにより、PCRセットアップを迅速かつ容易に行なえます。HotStarTaq Plus DNA Polymerase は、95℃、5分間のインキュベーションステップで活性化され、このステップは既存のサーマルサイクリングのプログラムに容易に導入できます。反応は室温で設定することができるので、使いやすく便利です(図“HotStarTaq Plus 操作手順”)。また、本キットに付属のCoralLoad PCR Bufferはピペッティングの目視化を改良し、PCR産物をゲルに直接ロードすることが可能なので、簡便性が増加します。
アプリケーション

HotStarTaq Plus DNA Polymeraseは以下のような増幅を含めた高度なアプリケーションをはじめ様々なアプリケーションに最適です。

  • 複雑なゲノムテンプレート
  • 複雑なcDNAテンプレート(例;RT-PCR)
  • 低コピーのターゲット(例;シングルセルPCR)
  • マルチプレックスPCR
特点
参数
应用 PCR, RT-PCR, Complex genomic templates, very low-copy targets
酶活 5' -> 3' exonuclease activity
预混液 No
反应类型 PCR amplification
real-time或终点法PCR Endpoint
样本/目标类型 Genomic DNA and cDNA
单一或多重 Single
有/无热启动酶 With hotstart

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产品介绍与指南
2
试剂盒操作手册
1
For highly specific hot-start PCR without optimization  
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参考文献
0
图片
Ready-to-load PCR buffer
CoralLoad PCR Buffer。
[A] CoralLoad染料包含两种凝胶示踪染料,能够便利的进行凝胶上样,[B] 以及清楚的看到DNA的迁移。
HotStarTaq Plus procedure
HotStarTaq Plus实验流程。
HotStarTaq Plus实验流程快速、简单,十分便利。
Highest specificity with HotStarTaq Plus Polymerase
高特异性。
使用QIAGEN的HotStarTaq Plus DNA Polymerase、HotStarTaq DNA Polymerase和Taq DNA Polymerase,以及指定供应商的三种热启动PCR酶进行PCR反应。使用50 ng人基因组DNA,遵循供应商的建议进行并行反应。采用35个PCR循环扩增1.5 kb的人CFTR基因片段。M:分子量标准。
Amplification of Difficult Templates with Q-Solution
扩增困难模板。
使用QIAGEN PCR Buffer和Taq DNA Polymerase,不加入 (–) 或者加入 (+) 1x Q-Solution,对两种不同的引物-模板系统进行扩增,重复两次。Q-Solution可实现难以处理的模板的特异性扩增。[A] 人血管紧张素受体II基因;[B] 小鼠蛋白激酶C基因;M:分子量标准。
Higher Specificity with Different Primer–Template Systems
对不同引物-模板体系均有较高的特异性。
在相同的条件下,使用Supplier R的Taq DNA聚合酶 (R) 或HotStarTaq DNA Polymerase (H),对三种不同的引物-模板系统进行扩增。System 1:从人基因组DNA中扩增1.1 kb的D-IgI同系物片段。System 2:从人基因组DNA中扩增与X染色体链锁型青年型视网膜裂损症相关的296 bp的染色体区域片段。System 3:利用总RNA合成的cDNA,扩增214 bp的β-actin基因片段。M:分子量标准。
Effect of Hot Start on RT-PCR Performance
RT-PCR中高效的热启动。
利用cDNA扩增1.1 kb的人白介素1受体 (II型) 片段。使用Supplier L的Taq DNA聚合酶和缓冲液(No hot start);使用Supplier L的抗体介导的热启动酶和缓冲液(Antibody-mediated);使用QIAGEN的HotStarTaq DNA Polymerase和PCR Buffer (HotStarTaq)制备扩增反应,重复三次。M:分子量标准。
Single-Cell PCR
高度灵敏的单细胞PCR。
利用流式细胞术分离单细胞,并直接分选至单个PCR管内,扩增500 bp的鼠p53基因片段。使用QIAGEN的HotStarTaq DNA Polymerase和PCR Buffer(HotStarTaq)、Supplier AII的热启动酶和缓冲液(Hot-start enzyme)或Supplier L的抗体介导的热启动酶和缓冲液(Antibody-mediated)制备并行反应。M:分子量标准。
NH4+ and K+ cations in QIAGEN PCR buffers increase specific primer annealing
退火时引物结合的特异性增强。
QIAGEN PCR缓冲液中的铵态氮和钾离子能够在退火时促进引物的特异性结合。K+结合到DNA主链上的磷酸基团(P)上,稳定结合到模板上的引物。在热循环中,NH4+以铵离子和氨的形式存在,可以与碱基(B)之间的氢键发生相互作用,使错配碱基间的不稳定的氢键容易断开。两种阳离子的共同作用,在广泛的温度范围内保持特异性结合比例高。