Zur schnellsten und praktischsten Aufreinigung von bis zu 10 mg Plasmid-DNA in Transfektionsqualität
Kat.-Nr. / ID. 12943
Die QIAGEN Plasmid Plus Kits erlauben eine ultraschnelle Aufreinigung im großen Maßstab bis zu
10 mg hochreiner Plasmid-DNA. Durch den Einsatz eines Vakuumverteilers können bis zu 24 Proben parallel aufgereinigt werden, wodurch sich der Zeitaufwand für die manuellen Schritte verringert. Geringe Elutionsvolumina ergeben hochkonzentrierte Plasmid-DNA zur direkten Weiterverarbeitung ohne Ethanolausfällung. Die QIAGEN Plasmid Plus Kits enthalten außerdem einen speziellen Waschpuffer zur Endotoxinreduktion. Die so gewonnene Plasmid-DNA eignet sich hervorragend für eine Vielzahl von Anwendungen, einschließlich der Transfektion sensitiver Zelllinien.
Für optimale Ergebnisse wird empfohlen, dieses Produkt zusammen mit QIAvac 24 Plus zu verwenden.
Möchten Sie diese Lösung erstmalig versuchen? Fordern Sie ein Angebot für ein Test-Kit an.
Die QIAGEN Plasmid Plus Technologie zeichnet sich durch die gleiche Leistung und Qualität aus wie die Anionenaustauschtechnologie. Die einzigartige Bindungschemie der QIAGEN Plasmid Plus Säulen stellt sicher, dass stets reine Plasmid-DNA isoliert wird. Den QIAGEN Plasmid Plus Kits liegen Protokolle für hohe Ausbeuten und zusätzliche Puffervolumina bei. Es werden Ausbeuten von bis zu 10 mg (Giga),
2 mg (Mega), 1 mg (Maxi) und 250 μg (Midi) hochreiner Plasmid-DNA erzielt, die frei von Verunreinigungen wie RNA, Proteinen und genomischer DNA ist (siehe Abbildungen „ QIAGEN Plasmid Plus Kits (QPP) gewährleisten hohe Ausbeuten“ und „ Analytisches Chromatogramm“).
Endotoxine, auch bekannt als Lipopolysaccharide oder LPS, sind Bestandteile der Zellmembran gramnegativer Bakterien wie E. coli und werden während des Lyseschrittes der Plasmidaufreinigung freigesetzt. Endotoxine können eine unspezifische Aktivierung von Immunantworten auslösen und stellen beim Aufbau von Transfektionsexperimenten somit eine nicht beeinflussbare Variable dar, die das Resultat und die Reproduzierbarkeit der Ergebnisse beeinflusst sowie deren Vergleich und Interpretation erschwert.
Der in den Kits enthaltene Endotoxin-Waschpuffer reduziert bakterielle Endotoxine auf Spiegel von üblicherweise unter 1 EU/μg DNA. (Der Endotoxingehalt kann je nach Wirtsstamm, Kulturmedium und Zelldichte abweichen. Bei sehr hoher Zelldichte kann der Endotoxinspiegel geringfügig höher ausfallen und bei 1–3 EU/μg DNA liegen). Dadurch eignet sich die Plasmid-DNA für eine Vielzahl von Anwendungen, einschließlich der Transfektion sensitiver Zelllinien (siehe Abbildungen „ Endotoxinspiegel mit QIAGEN Plasmid Plus Kits“, „ Endotoxinspiegel bei verschiedenen Isolierungsverfahren“, und „ Effiziente Transfektion sensitiver Zelllinien“).
Die QIAGEN Plasmid Plus Kits stellen die praktischste Methode zur Plasmidgewinnung in großem Maßstab dar. Der Aufbau und die einzigartige Bindungschemie der QIAGEN Plasmid Plus Säulen ermöglichen ein einfaches Binden-Waschen-Eluieren-Verfahren, das auf einer neuartigen Chemie basiert. Durch das Verfahren ermöglichen diese Kits äußerst schnelles Ansetzen im großen Maßstab — 20 Minuten für das Ansetzen der Maxi- und Midi-Präparationen. Die resultierende Plasmid-DNA ist hochkonzentriert und kann ohne weitere Ethanolausfällung sofort für nachfolgende Anwendungen genutzt werden. Daher eignet sich die Plasmid-DNA hervorragend für Anwendungen, die nur kleine Reaktionsvolumina zulassen.
Im Kit enthalten ist auch LyseBlue, ein optionaler Farbindikator, der die optimale Puffermischung sichtbar macht. Dadurch werden häufige Handhabungsfehler vermieden, die zu ineffizienter Zelllyse und unvollständiger Ausfällung von SDS, genomischer DNA und Zelltrümmern führen. Durch einfache Farbänderung stellt dieser einzigartige Pufferzusatz sicher, dass eine optimale Zelllyse und Neutralisierung erfolgt und die Ausbeute maximiert wird.
Merkmale | Plasmid Plus Giga Kit | Plasmid Plus Mega Kit | Plasmid Plus Maxi Kit | Plasmid Plus Midi Kit |
|---|---|---|---|---|
| Anwendungen | Transfektion der meisten Zelllinien, Klonierung, enzymatische Restriktion, In-vitro-Translation/-Transkription, Sequenzierung | Transfektion der meisten Zelllinien, Klonierung, enzymatische Restriktion, In-vitro-Translation/-Transkription, Sequenzierung | Transfektion der meisten Zelllinien, Klonierung, enzymatische Restriktion, In-vitro-Translation/-Transkription, Sequenzierung | Transfektion der meisten Zelllinien, Klonierung, enzymatische Restriktion, In-vitro-Translation/-Transkription, Sequenzierung |
| Kulturvolumen/Ausgangsmaterial | 2500 ml Kulturvolumen | 500 ml Kulturvolumen | 50–200 ml Kulturvolumen | 25–50 ml Kulturvolumen |
| Finale DNA-Konzentration | ≥1 µg/µl | ≥1 µg/µl | ≥1 µg/µl | ≥1 µg/µl |
| Plasmidtyp | Plasmide, Cosmide | Plasmide, Cosmide | Plasmide, Cosmide | Plasmide, Cosmide |
| Verfahren | Manuell (Zentrifugation und Vakuum), Parallelverarbeitung | Manuell (Zentrifugation und Vakuum), Parallelverarbeitung | Manuell (Zentrifugation und Vakuum), Parallelverarbeitung | Manuell (Zentrifugation und Vakuum), Parallelverarbeitung |
| Proben pro Lauf; Durchsatz | 1–12 Proben pro Lauf | 1–12 Proben pro Lauf | 1–24 Proben pro Lauf | 1–24 Proben pro Lauf |
| Technologie | Fortschrittliche Silikatechnologie (nichtchaotroph), Endotoxin-Reduktion | Fortschrittliche Silikatechnologie (nichtchaotroph), Endotoxin-Reduktion | Fortschrittliche Silikatechnologie (nichtchaotroph), Endotoxin-Reduktion | Fortschrittliche Silikatechnologie (nichtchaotroph), Endotoxin-Reduktion |
| Dauer pro Lauf | 50 min | 40 min | 20 min | 20 min |
| Ausbeute | bis zu 10 mg | bis zu 2,5 mg | bis zu 1 mg | bis zu 250 µg |
Die in den QIAGEN Plasmid Plus Kits enthaltenen QIAfilter-Kartuschen ermöglichen die schnelle Bereinigung von Lysaten. Das Beschicken der Säule mit dem bereinigten Lysat kann in einem Schritt erfolgen, was Zeit spart. Um das bereinigte Lysat und die nachfolgenden Waschpuffer durch die QIAGEN Plasmid Plus Säule zu leiten, kommt ein Vakuumverteiler (wie der QIAvac 24 Plus) zum Einsatz. Nach dem Waschen und Trocknen der Membran wird die hochkonzentrierte DNA durch Zentrifugation in geringen Volumina eluiert (siehe Flussdiagramm „ QIAGEN Plasmid Plus Verfahren“).
Die QIAGEN Plasmid Plus Kits liefern Plasmid-DNA in Transfektionsqualität, die sich für alle Anwendungen eignet, beispielsweise für:
