Custom dPCR LNA-Assays

Von Expertinnen und Experten entwickelte Assays ermöglichen es Ihnen, das volle Potenzial der dPCR auszuschöpfen, um Ihre konkreten biologischen Fragestellungen bestmöglich zu beantworten. Nutzen Sie bei der Entwicklung und Durchführung von benutzerdefinierten Assays das Fachwissen von QIAGEN und lassen Sie Ihre Ergebnisse bei Bedarf von uns verifizieren.

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Durch das Erstellen einer Partitionierung, die die Konzentration des spezifischen Ziels erhöht, steigert dPCR die Sensitivität beim Nachweis und bei der absoluten Quantifizierung seltener Ereignisse und Sequenzvarianten. Beispielsweise kann mithilfe der dPCR eine mit einer Häufigkeit von 0,1 % vorliegende Mutation vor einem Hintergrund genomischer Wildtyp-DNA nachgewiesen werden. Die Endpunkt-Amplifikation und Detektion über dem Hintergrundrauschen mit einer binären positiven/negativen Zielerkennung ermöglicht eine präzise Quantifizierung unabhängig von der Amplifikationsleistung (die z. B. durch PCR-Inhibitoren beeinträchtigt wird).

Die benutzerdefinierten dPCR LNA-Assays werden je nach Bedarf für den Einsatz in einer Singleplex- oder Multiplex-Umgebung konzipiert und basieren entweder auf einer Sonde oder auf EvaGreen und einem Primer. Die digitale PCR ist das empfindlichste und zuverlässigste Verfahren zum Nachweis seltener Ereignisse gegen den Hintergrund. Custom dPCR LNA Mutation Assays nutzen LNA-verstärkte Primer und Sonden, die die Spezifität und Sensitivität des Assays erhöhen und den Nachweis von beispielsweise einer Mutation, die nur mit 0,1 % vor einem Hintergrund genomischer Wildtyp-DNA vorhanden ist, in einem einzigen Nanoplatten-Well ermöglichen.

Zur Durchführung Ihres dPCR-Experiments geben Sie ein Aliquot Ihrer genomischen DNA-Probe (isoliert aus frischen, gefrorenen oder fixierten Proben) zu dem im QIAcuity Probe PCR Kit oder im QIAcuity EG PCR Kit enthaltenen Master-Mix und dem benutzerdefinierten dPCR LNA Assay hinzu. Jede Reaktion wird in einem oder mehreren Wells einer QIAcuity Nanoplate analysiert.
Nach dem Laden und Versiegeln der Nanoplatte wählen Sie das empfohlene Zyklusprogramm auf dem QIAcuity-Gerät. Nach Abschluss der dPCR wird die Anzahl der Kopien/µl für jede Ihrer Zielsequenzen in der QIAcuity Software Suite angezeigt. Weitere Einzelheiten finden Sie im Quick-Start-Protokoll für Custom dPCR LNA Assays.

• Testen von Abwasser auf COVID-19
• Nachweis seltener Mutationen
• Kopienzahlvariation
• Genexpressions- und miRNA-Analyse
• Zell- und Gentherapie
• Nachweis mikrobieller Pathogene
• NGS-Validierung
• GMO-Nachweis