QIAamp Fast DNA Tissue Kit

Für die Genotypisierung und andere DNA-Analysen mittels PCR oder Sequenzierung der nächsten Generation (NGS) wird eine geeignete Menge an qualitativ hochwertiger genomischer DNA als Ausgangsmaterial benötigt. Der häufigste Engpass bei der Gewinnung qualitativ hochwertiger DNA ist die Gewebelyse. Faserige oder andere schwierig zu lysierende Gewebe erfordern langwierige und aufwendige Protokolle, die häufig zu geringen Ausbeuten an minderwertiger DNA führen. Das QIAamp Fast DNA Tissue Kit, das auf bewährten QIAGEN-Technologien basiert, überwindet diesen Engpass durch den Einsatz innovativer Aufschlussröhrchen, die zu erheblich höheren Ausbeuten führen und die insgesamt benötigte Bearbeitungszeit verkürzen. Das Verfahren kann auf dem QIAcube Connect vollständig automatisiert werden.

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Das QIAamp Fast DNA Tissue Kit verwendet eine neuartige Kombination aus mechanischer, chemischer und enzymatischer Lyse. Jedes Kit wird mit Aufschlussröhrchen geliefert, die eine spezielle Edelstahlkugel mit einer einzigartigen Form enthalten, die den Gewebeaufschluss gründlicher unterstützt als andere Methoden. Zunächst werden die Gewebeprobe und die Reagenzienmischung in die Röhrchen gegeben und mit einem handelsüblichen Tischvortexer (mit entsprechenden Adaptern) oder in einer Kugelmühle wie dem TissueLyser II oder LT homogenisiert, gefolgt von einer kurzen Lyse im selben Röhrchen. Die DNA wird dann mit der bewährten QIAamp-Technologie aus dem Lysat extrahiert. Durch die Vorbehandlung wird die Gesamtdauer der DNA-Extraktion von mehreren Stunden auf nur 30 Minuten reduziert.
Durch den mechanischen Aufschluss und das gründliche Lyseprotokoll wird nicht nur die Gesamtzeit der DNA-Extraktion verkürzt, sondern auch die DNA-Ausbeute erhöht. Verbesserungen der Ausbeute bei verschiedenen Gewebetypen wurden mit dem QIAxpert und einem fluorometrischen Assay bewertet. Die Ergebnisse zeigen, dass das QIAamp Fast DNA Tissue Kit in der Lage ist, im Vergleich zu Standardmethoden bis zu zehnmal mehr DNA zu extrahieren, und es gleichzeitig eines der schnellsten Protokolle bietet.
Die meisten NGS-Anwendungen erfordern DNA mit hohem Molekulargewicht (>10 kb), damit größere Abschnitte sequenziert und mit bioinformatischen Tools assembliert werden können. Bei einigen Aufschlussmethoden kann die DNA durch Scherung fragmentiert werden, was die nachfolgende Analyse beeinträchtigen kann. Im Vergleich zu anderen Kits, die eine hohe Fragmentierung bis hinunter zu wenigen kb aufweisen, ermöglicht das QIAamp Fast DNA Tissue Kit die Gewinnung von DNA zwischen 25 und 50 kb und ist daher sehr gut für jede PCR- oder NGS-Anwendung geeignet.

Molekulare Techniken wie PCR und NGS enthüllen bisher unbekannte Detailinformationen aus komplexen experimentellen Proben. Um mit diesen Techniken zuverlässige Ergebnisse zu erzielen, ist es unerlässlich, ausreichende Mengen an qualitativ hochwertiger DNA zu erhalten. Dies kann bei der Arbeit mit faserigem oder hartem Gewebe eine Herausforderung darstellen, da es schwer zu lysieren ist, was sich direkt auf die Menge der freigesetzten DNA auswirkt. Unser neues QIAamp Fast DNA Tissue Kit kombiniert daher mechanische, chemische und enzymatische Gewebelyseverfahren, was die DNA-Ausbeuten im Vergleich zu Standardmethoden um das 5- bis 10-fache erhöht. Die Vorbehandlung reduziert die Gesamtdauer der DNA-Extraktion von mehreren Stunden auf nur 30 Minuten, sodass Sie nicht nur DNA mit hoher Integrität erhalten, die für PCR- und NGS-Anwendungen geeignet ist, sondern auch eine erhebliche Zeitersparnis erzielen.

Das QIAamp Fast DNA Tissue Kit verwendet eine Kombination aus mechanischer, chemischer und enzymatischer Lyse zur Homogenisierung der Proben. Die mitgelieferten Gewebe-Aufschluss-Röhrchen enthalten eine speziell geformte Kugel, die das Gewebe beim Schütteln effektiv aufschließt. Bereits 5 Minuten auf einem Tischvortexer oder 30 Sekunden in einer Hochleistungs-Kugelmühle reichen aus, um das Gewebe zu homogenisieren. Die optimierte Chemie ermöglicht die Homogenisierung des Gewebes und die gleichzeitige Stabilisierung der aus dem aufgeschlossenen Gewebe freigesetzten DNA. Die Aufschluss-Puffermischung enthält auch Proteinase K, die das Probenmaterial in einer kurzen anschließenden Inkubation vollständig auflöst und durch mechanische Homogenisierung nicht beeinträchtigt wird. Die genomische DNA wird anschließend mit der bewährten QIAamp-Technologie aufgereinigt und liefert so reine DNA für alle nachgelagerten Anwendungen wie PCR oder Sequenzierung. Darüber hinaus kann das QIAamp Fast DNA Tissue Kit bequem mit dem QIAcube zur automatisierten Probenvorbereitung verwendet werden.

Das QIAamp Fast DNA Tissue Kit liefert hohe Ausbeuten an reiner DNA aus jedem Gewebetyp und ist für PCR- und NGS-Anwendungen geeignet.