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Kat.-Nr. / ID. 10223
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QIAGEN Genomic-tips sind Schwerkraftfluss-Anionenaustauscherspitzen, die eine effiziente Aufreinigung genomischer DNA aus einer Vielzahl biologischer Proben ermöglichen. Die aufgereinigte DNA hat eine Größe von bis zu 150 kb mit einer durchschnittlichen Größe von 50–100 kb
Das Verfahren mit QIAGEN Genomic-tips ist sehr schonend und führt zu einer vernachlässigbaren DNA-Scherung. Die mit QIAGEN Genomic-tips aufgereinigte DNA hat eine Größe von bis zu 150 kb mit einer durchschnittlichen Länge von 50–100 kb (siehe Abbildung „Genomische DNA von bis zu 150 kb“). Die DNA ist frei von allen Verunreinigungen wie RNA, Proteinen und Metaboliten und hat ein A260 / A280-Verhältnis zwischen 1,7 und 1,9.
QIAGEN Genomic-tips sind in verschiedenen Größen erhältlich, um allen Präparationsanforderungen gerecht zu werden, und werden mit einem umfassenden Handbuch geliefert, das detaillierte Protokolle für die Präparation genomischer DNA aus jedem Probentyp enthält. Spezifische Lysepuffer für Blut, Gewebe, Zellkulturen, Hefe und Bakterien sowie alle anderen erforderlichen Puffer sind im Genomic DNA Buffer Set enthalten, das separat erworben werden kann.
Gereinigte DNA wurde für die direkte Sequenzierung bakterieller Genome verwendet (siehe Abbildung „ Direkte Sequenzierung bakterieller genomischer DNA“).
QIAGEN Genomic-tip – Spezifikationen
| Probenquelle | Menge | Ausbeute (µg) | ||||
| Genomic-tip 20/G | Genomic-tip 100/G | Genomic-tip 500/G | Genomic-tip 20/G | Genomic-tip 100/G | Genomic-tip 500/G | |
| Vollblut (human) | 1 ml | 5 ml | 20 ml | 15–20 | 80–100 | 350–400 |
| Zellkulturen (HeLa) | 5 x 106 | 2 x 107 | 1 x 108 | 15–20 | 80–100 | 350–450 |
| Gewebe (Leber) | 15 mg | 80 mg | 350 mg | 15–20 | 80–100 | 350–450 |
| Hefe (S. cerevisiae) | 1 ml | 5 ml | 20 ml | 18–20 | 85–95 | 350–450 |
| Gramnegative Bakterien (E. coli) | 0,6–1,2 ml | 3–6 ml | 15–30 ml | 16–20 | 85–95 | 300–400 |
| Grampositive Bakterien (B. subtilis) | 1,2–1,8 ml | 6–9 ml | 30–45 ml | 16–20 | 85–95 | 300–400 |
QIAGEN Genomic-tips nutzen die einzigartige QIAGEN-Anionenaustauschertechnologie für die Isolierung hochmolekularer DNA aus einer Vielzahl biologischer Proben ohne Phenol oder Chloroform. Die Lysepuffer sind für verschiedene Probentypen optimiert und bieten eine sofortige Denaturierung von Proteinen wie Nukleasen, Histonen und DNA-bindenden Proteinen sowie von potenziell infektiösen Viruspartikeln. Unter dem pH-Wert und den Niedrigsalz-Bedingungen des Puffers bindet die DNA an das QIAGEN-Harz in der Säule. Gleichzeitig fließen andere Zellbestandteile wie Proteine, Kohlenhydrate und Stoffwechselprodukte hindurch. Die aufgereinigte DNA wird in einem Hochsalzpuffer eluiert. Genomic-tips arbeiten nach dem Schwerkraftprinzip und können unbeaufsichtigt gelassen werden, ohne auszutrocknen. Dies reduziert den manuellen Zeitaufwand auf ein Minimum und macht das Verfahren ideal für die gleichzeitige Verarbeitung mehrerer Proben.
Die Proben werden zunächst lysiert (Gewebeproben werden mechanisch zerkleinert) und die Proteine gleichzeitig in dem entsprechenden Lysepuffer denaturiert (siehe Ablaufdiagramm „Verfahren mit QIAGEN Genomic-tips“). Anschließend wird QIAGEN Protease oder Proteinase K zugegeben und nach einer geeigneten Inkubationszeit werden die Lysate auf die QIAGEN Genomic-tip geladen. Die DNA bindet an die Säule, während andere Zellbestandteile durchlaufen. Nach einem Waschschritt zur Entfernung etwaiger Verunreinigungen wird reine, hochmolekulare DNA eluiert und mit Isopropanol ausgefällt. Die Bearbeitungszeit für das gesamte Verfahren beträgt nur 20 Minuten für Bakterien, 30 Minuten für Blut und Zellkulturen und 40 Minuten für Gewebe und Hefen.
Mit QIAGEN Genomic-tips aufgereinigte DNA eignet sich hervorragend für die folgenden Anwendungen:
