Ni-NTA Superflow 96 BioRobot Kit

• Vollautomatisierte Aufreinigung von bis zu 2 mg Protein je Well
• Hochreines Protein frei von Kreuzkontaminationen
• Aufreinigung unter nativen oder denaturierenden Bedingungen

Das Ni-NTA Superflow 96 BioRobot Kit ermöglicht die parallele automatisierte Aufreinigung von bis zu 300 µg rekombinantem Protein aus 96 Proben (Standardprotokoll, 5 ml Kulturvolumen je Probe). Geklärte Bakterienzelllysate fließen auf eine von der BioRobot Workstation mit Ni-NTA Superflow vorbeladene Filterplatte. Dieses einzigartige 96-Well-Metallchelat-Affinitätschromatographiemodul bindet stark und selektiv an Proteine mit His-tag. Für die Aufreinigung unter nativen oder denaturierenden Bedingungen stehen gebrauchsfertige Protokolle zur Verfügung.

Als Reaktion auf den Bedarf der Kunden an größeren Proteinmengen aus automatisierten Verfahren hat QIAGEN das Ni-NTA Superflow 96 BioRobot Protokoll angepasst, um die Verarbeitung größerer Zellkulturvolumina und die Aufreinigung von bis zu 2 mg an Proteinen mit His-tag je Well zu ermöglichen. Die Erhöhung der Menge des in dem Verfahren verwendeten Ni-NTA Superflow Harzes auf 200 µl je Well und eine optimierte Lysepuffer-Zusammensetzung ermöglichen die Verarbeitung von Kulturen bis zu 25 ml (Aufreinigung unter nativen Bedingungen) oder 15 ml (Aufreinigung unter denaturierenden Bedingungen) (Protokolle für hohe Ausbeute). Die Zellkulturen werden zur Verarbeitung in 24-Well-Blöcke überführt. Die entsprechende Zunahme der Biomasse kann eine erhöhte Ausbeute an reinem Protein mit His-tag je Well liefern (siehe Tabelle und Abbildung  Milligramm-Mengen an Proteinen mit His-tag je Well), so dass mehrere Assays mit derselben Proteincharge durchgeführt werden können und die Gesamtzahl der erforderlichen Proteinpräparationen reduziert wird; siehe auch Abbildung  Automatisiertes Expressionsklonscreening. Die Ein-Schritt-Aufreinigung liefert hochreine Proteine über einen weiten Bereich an Ausbeuten, und auch die Aufreinigung großer Proteinkomplexe ist möglich.

Das QIAexpress Ni-NTA Protein Purification System, einschließlich des Ni-NTA Superflow 96 BioRobot Kit, basiert auf der bemerkenswerten Selektivität des patentierten Ni-NTA(Nickel-Nitrilotriessigsäure)-Harzes für Proteine mit einem Affinitätstag aus sechs oder mehr Histidinresten – dem His-tag. Diese Technologie erlaubt die Ein-Schritt-Aufreinigung nahezu jedes Proteins mit His-tag aus jedem Expressionssystem unter nativen oder denaturierenden Bedingungen. NTA, das über vier Chelationen-Bindestellen für Nickelionen verfügt, bindet Nickel fester als metallchelatbildende Aufreinigungssysteme, die nur drei verfügbare Bindestellen für die Interaktion mit Metallionen besitzen. Die zusätzliche Chelation-Bindestelle verhindert das Auswaschen von Nickelionen und führt zu einer höheren Bindungskapazität und damit zu Proteinpräparationen mit höherer Reinheit verglichen mit denen, die mit anderen metallchelatbildenden Aufreinigungssystemen gewonnen wurden. Das QIAexpress System kann für die Aufreinigung von Proteinen mit His-tag aus jedem Expressionssystem, einschließlich Baculoviren, Säugerzellen, Hefen und Bakterien verwendet werden. (Siehe Abbildung  Proteinaufreinigung mit dem Ni-NTA-Proteinaufreinigungssystem.)

Das Ni-NTA Superflow 96 BioRobot Kit ist für die Verwendung mit BioRobot 3000, 8000 oder 9600 Workstations vorgesehen. .

Das QIAexpress Ni-NTA Protein Purification System ermöglicht eine zuverlässige Ein-Schritt-Aufreinigung von Proteinen, die sich für verschiedenste Applikationen eignen, einschließlich:

• Struktur- und Funktionsuntersuchungen
• Kristallisierung zur Bestimmung der dreidimensionalen Struktur
• Assays mit Protein-Protein- und Protein-DNA-Interaktionen
• Immunisierung zur Antikörperproduktion