Für Ihren reibungslosen Übergang zur besseren miRNA-PCR

Wir haben das Ziel, möglichst innovative und hochwertige Produkte bereitzustellen, um Wissenschaftlern dabei zu helfen, Hürden zu überwinden und ihre Forschung voranzutreiben. Dementsprechend haben wir zum 1. Mai 2021 die Produktion unserer miScript miRNA PCR-Produkte eingestellt. Die miScript PCR-Produkte bleiben auch nach diesem Datum verfügbar, solange sie noch vorrätig sind. Wie empfehlen miScript PCR-Anwendern den Umstieg auf unsere miRCURY LNA miRNA PCR-Systeme.

Die qPCR-basierte miRNA-Analyse ist mit besonderen Herausforderungen verbunden: Ihre geringe Menge in üblichen Probentypen macht häufig einen Präamplifikationsschritt erforderlich und die kurzen Sequenzen erschweren das Design hochspezifischer Primer und Sonden. Unsere miRCURY LNA miRNA PCR-Systeme lösen diese Probleme und stellen robuste und hochsensitive miRNA-Profile ohne Präamplifikation bereit – selbst für die anspruchsvollsten Applikationen.

Die miRCURY LNA miRNA PCR bietet mehrere einzigartige Vorteile:

• Beispiellose Sensitivität bei Quantifizierung ab nur 1 miRNA-Kopie
• Genauer Nachweis ohne Präamplifikation in Proben mit geringem miRNA-Gehalt wie Serum/Plasma, FFPE-Schnitten und LCM-Proben
• Hohe Spezifität und Unterscheidung nahe verwandter miRNA
• Einfache Online-Anpassung von Assays und Panels
• Ein schnelles und einfaches Protokoll, dass nur 2–3 Stunden dauert

miRCURY LNA PCR – wenn es wirklich auf Sensitivität, Genauigkeit und Flexibilität ankommt

Die miRCURY LNA miRNA PCR-Systeme sind sowohl auf Basis von SYBR® Green als auch sondenbasiert verfügbar und kombinieren die Geschwindigkeit und den Komfort einer universellen reversen Transkriptionsreaktion mit der Sensitivität und Spezifität LNA-optimierter qPCR-Primer. Der einfache Workflow wurde für ein hoch leistungsfähiges miRNA-Profiling konzipiert und liefert schnelle, genaue Ergebnisse für alle Probentypen – selbst jene mit geringem RNA-Gehalt.

Passen Sie den Versuchsaufbau durch Verwendung individueller Assays oder komplett flexibler benutzerdefinierter Panels Ihren speziellen Bedürfnissen an. Wechseln Sie bei Einsatz der gleichen cDNA-Reaktion nahtlos zwischen individuellen, vordesignten oder benutzerdefinierten Primer-Assays oder -Panels. Unser umfassendes Angebot an vordesignten Assays und Panels erlaubt Ihnen Nachweis und Quantifizierung selbst seltenster Targets mit höchster Effizienz.

Genaue Quantifizierung ohne Präamplifikation

Die Quantifizierung von in geringen Mengen vorliegenden miRNAs mittels qPCR erfordert in der Regel eine Präamplifikation, doch die miRCURY LNA miRNA PCR-Systeme liefern auch ohne diesen zusätzlichen Schritt genaue Ergebnisse. Was ist das Geheimnis? miRCURY PCR Assays und Panels enthalten optimal positionierte verbrückte Nukleinsäure(locked nucleic acid, LNA)-Basen. LNA-optimierte Oligos weisen eine gesteigerte Primer-Bindungsaffinität auf, was das Design sehr kurzer Primer (und Sonden) ermöglicht, die sowohl miRNA-spezifisch sind als auch kurz genug, um eine Überlappung beim Binden an die Zielsequenz zu vermeiden. Mit herkömmlichen Oligos ist das schlicht und ergreifend nicht möglich. Folglich waren wir in der Lage, einen optimalen Assay für den Nachweis jeder beliebigen biologisch relevanten miRNA mit der höchsten Spezifität und Sensitivität zu entwickeln – ohne das Erfordernis einer Präamplifikation.

Das miRCURY LNA miRNA PCR-System hat bereits vielen Wissenschaftlern geholfen, ihre Forschung voranzubringen. Sie möchten mehr erfahren? Dieses Team hat unser System verwendet, um neue miRNA-Biomarker für die frühe Diagnose von Osteoporose zu identifizieren. Diese Forscher verwenden es für den Nachweis von miRNA-Signaturen im Plasma, die mit Phänotypen in Verbindung stehen, die mit häufigen Erkrankungen des Menschen zusammenhängen. In unseren Guidelines for Profiling Biofluid miRNA (Richtlinien zum Profiling von miRNA in Körperflüssigkeiten) sprechen wir darüber, wie sich die Effizienz Ihrer PCR mit RNA-Spike-ins überwachen lässt. Außerdem stellen wir weitere Tipps und Tricks für eine erfolgreiche PCR-Analyse von Bioflüssigkeitsproben mit geringem miRNA-Gehalt ohne Präamplifikation vor.

Wenn Sie mit einer spezialisierten Applikation arbeiten, die eine Präamplifikation erfordert, wenden Sie sich für weitere Unterstützung bitte an unsere Experten.

Ihre Wahl der Nachweischemie

Assays auf Basis von SYBR® Green lassen sich flexibel konzipieren und bieten geringe Einrichtungs- und Durchführungskosten, aber viele Forscher befürchten falsch positive Ergebnisse, da der Farbstoff an jede doppelsträngige DNA bindet. Falsch Positive sind in der Regel auf suboptimale PCR-Bedingungen und nicht die Nachweischemie zurückzuführen. Hinzu kommt, dass die SYBR® Green-Detektion eine Schmelzkurvenanalyse direkt im Anschluss an die PCR erlaubt, sodass Sie eine hohe Reaktionsspezifität bestätigen und die Bildung von Primer-Dimeren oder unspezifischen Amplifikaten ausschließen können.

Hydrolysesonden bieten einen hochsensitiven und robusten Nachweis, da nur das gewünschte PCR-Produkt nachgewiesen wird. Die Assay-Konzipierung kann jedoch bei kurzen Targets wie miRNA eine Herausforderung sein, und das Design herkömmlicher DNA-Oligo-Primer und -Sonden ist häufig unmöglich. Darüber hinaus können Amplifikationsartefakte um Reaktionskomponenten konkurrieren und so die Assay-Sensitivität und -Effizienz beeinträchtigen und die Ausbeute an Ihrem gewünschten PCR-Produkt verringern.

Beide Methoden können ausgezeichnete Ergebnisse liefern, solange Sie ein hochspezifisches PCR-System mit gut designten Primern (und Sonden) sowie optimierte Reaktionsbedingungen verwenden, um sicherzustellen, dass nur die gewünschten Targets amplifiziert werden. Die miRCURY LNA miRNA PCR Assays und Panels sind mit LNA optimiert, was die Erstellung sehr kurzer Primer (und Sonden) ermöglicht, die räumlich getrennt sind und trotzdem eine sehr hohe Affinität und Spezifität aufweisen. Bei der miRCURY LNA PCR ist wird Ihre Analyse jedes Mal zum Erfolg – ohne Störung durch Primer-Dimere oder falsch positive Ergebnisse.