miRCURY LNA miRNA Power Target Site Blockers

miRCURY LNA miRNA Power Target Site Blockers sind Antisense-Oligonukleotide, die sich an die miRNA-Zielsequenz einer mRNA binden und so verhindern, dass miRNAs an diese Stelle gelangen. Dies ermöglicht es, die Auswirkungen einer miRNA auf ein einzelnes Ziel zu untersuchen. miRCURY LNA miRNA Power Target Site Blockers sind bereits in sehr geringen Konzentrationen wirksam. Aufgrund ihrer hohen Affinität durch LNA-Verstärkung verdrängen die Target Site-Blocker miRNAs von ihren Zielsequenzen.

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Entschlüsseln Sie die miRNA-Funktion mit Target Site-Blockern

miRNAs regulieren gewöhnlich die Genexpression mehrerer Ziele. Daher führt die Inhibition einer miRNA zur Aufhebung der Repression (Derepression) all dieser Ziele. Der bei der miRNA-Inhibition beobachtete Phänotyp ist daher ein zusammengesetztes Ergebnis der Derepression mehrerer Ziele (siehe Abbildung  miRNA-Inhibitoren vs. Target Site-Blocker). Allerdings trägt die Deregulierung einiger dieser Ziele oft entscheidend zum Phänotyp bei. Die Identifizierung dieser Ziele ist wichtig, um die Funktion der miRNA zu verstehen.
miRCURY LNA miRNA Power Target Site Blockers können für folgende Anwendungen eingesetzt werden:

• Bestimmung, welcher Signalweg an einem bei Inhibition der miRNA beobachteten Phänotyp beteiligt ist.
• Bestimmung, welche miRNA/mRNA-Interaktionen in einem Signalweg mit mehreren prognostizierten Zielen am wichtigsten sind.

Die Abbildungen  Beispiele für den Einsatz von Target Site-Blockern – Signalwege X und Y und  Beispiele für den Einsatz von Target Site-Blockern – Signalweg Z beschreiben Beispiele für den Einsatz von Target Site-Blockern.
Die Abbildung  Der CAV1-Zielsequenzblocker phänokopiert den miR-199a-5p-Inhibitor in vielen wichtigen Aspekten zeigt ein Beispiel für den Einsatz eines Target Site-Blockers, um darzustellen, wie miR-199a-5p als Schlüsseleffektor des TGFβ-Signalwegs in Lungenfibroblasten fungiert.

Was sind Target Site-Blocker?

miRCURY LNA miRNA Target Site Blockers sind  LNA-verstärkte Antisense-Oligonukleotide, die an die miRNA-Zielsequenz einer mRNA binden und so verhindern, dass miRNAs an diese Zielsequenz gelangen. Dies ermöglicht Forschenden, die Auswirkungen einer miRNA auf ein einzelnes Ziel zu untersuchen. Hingegen spiegelt der bei der Inhibition einer miRNA beobachtete Phänotyp die kombinierten Auswirkungen dieser miRNA auf alle Ziele wider.

LNA-verstärkte Target Site-Blocker

Der Einbau von LNA in den miRCURY LNA miRNA Power Target Site Blocker (TSB) ermöglicht dem TSB eine wirksamere Konkurrenz mit dem miRNA/RISC-Komplex um die Zielsequenz der miRNA. Darüber hinaus stellt die Verteilung der LNA im gesamten LNA/DNA-Mixmer sicher, dass das Antisense-Oligonukleotid keinen RNase-H-abhängigen Abbau der mRNA katalysiert. Indem er die Translationshemmung durch die miRNA verhindert, erhöht der TSB die Expression des von der Ziel-mRNA kodierten Proteins (siehe Abbildung  LNA-verstärkte Target Site-Blocker konkurrieren wirksam mit RISC um die miRNA-Bindungsstelle).

Nach der Resuspension werden miCURY LNA miRNA Target Site Blockers mit einem Transfektionsreagenz oder durch Elektroporation in Zellen transfiziert. Die phänotypischen Auswirkungen des Target Site-Blockers werden normalerweise 24–72 Stunden nach der Transfektion untersucht. Bei einigen Anwendungen, wie z. B. Assays zur Zelldifferenzierung, kann die phänotypische Auswertung 7–10 Tage nach der Transfektion erfolgen.

miRCURY LNA miRNA Target Site Blockers eignen sich für folgende Anwendungen:

• Bestimmung, welcher Signalweg an einem Phänotyp beteiligt ist, der bei miRNA-Inhibition beobachtet wird.
• Bestimmung, welche miRNA/mRNA-Interaktionen in einem Signalweg mit mehreren prognostizierten Zielen am wichtigsten sind.