text.skipToContent text.skipToNavigation

EpiTect Methyl II PCR Assay Service

使用MethylScreen技术,进行单个基因的甲基化分析

  • 对人类、小鼠或大鼠基因进行DNA甲基化分析
  • 湿法验证的定量PCR试剂
  • 经优化的限制性酶切条件
  • 详尽的项目审查,全面的质量控制
QIAGEN的EpiTect Methyl II PCR Assay Service利用EpiTect Methyl II PCR system,提供DNA甲基化谱分析服务。利用该项创新技术可以快速且准确地实现单个基因CpG岛DNA甲基化谱分析。EpiTect Methyl II PCR Assay采用了MethylScreen技术,该技术已获得了Orion Genomics, LLC许可。
Cat No./ID: EpiTectAssay
EpiTect Methyl II PCR Assay Service
Epigenetic analysis performed using EpiTect Methyl II PCR Assays

EpiTect Methyl II PCR Assay Service适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


Principle

EpiTect Methyl II PCR Array利用2种不同的限制性内切酶对目标序列进行差异性剪切,这2种酶的活性依赖于各自识别序列中甲基化的胞嘧啶的存在。利用real-time PCR检测每种酶切后的相对DNA残留量,可以可靠且轻松地计算出单个基因的甲基化状态以及整个基因检测板的甲基化谱。利用酶切和PCR扩增获得高产量DNA,可实现更小、异质性更高的样本的分析。

每种EpiTect Methyl II PCR Assay分别对应启动子区域的一个CpG岛(从转录起始位点(TSS)上游5 kb到下游3 kb)。我们提供了约13,000种启动子CpG岛分析,并根据UCSC基因组生物信息学预测及公开的证据注释。所有EpiTect Methyl II PCR Assay均利用严格优化的算法设计,针对基因组DNA和CpG岛中富含GC的序列。该设计算法还确保了每个扩增片段均包含足够的甲基化敏感性酶和甲基化依赖性酶的酶切位点,使甲基化检测的灵敏度最大化。利用经确认和优化的流程可获得最高的数据质量和快速周转时间。

Procedure

对一个DNA样本进行四种不同的酶切:甲基化敏感性酶、甲基化依赖性酶、利用这两种酶进行双酶切、空酶切。随后,对目的基因进行定量real-time PCR,检测各反应中DNA残留量。利用上述数据计算甲基化状态——甲基化、超甲基化或非甲基化。

请发送电子邮件至support@sabiosciences.com,联系技术支持代表,订购或者探讨您的特定需要。

样本

如需了解有关样本提交和运输方面的说明,请联系QIAGEN技术服务。我们接受的样本是细胞或组织或总DNA。对于细胞和组织,Service Core可提供DNA分离服务。 

各种样本

应在无DNA酶的环境中及时进行全部样本采集。请注意起始材料最低需要量(参见下文,了解各种样本类型的要求)。如果您未达到最低量或以前分离的样本未采用我们推荐的方法保存,请联系QIAGEN技术服务后再提交样本。

运输前:

咨询QIAGEN技术支持,获取样本递送表格 
填写表格,与样本一起运送 
说明原料数量及储存条件 
签上姓名及日期 
按照样本类型的说明书运输
细胞

每种样本提供至少50万个细胞(在提交表上注明细胞数量)。将细胞沉淀快速冻存于液氮中,置于–80°C冷冻保存样本,干冰运输。

组织

每种样本提供至少50 mg组织(在提交表上注明组织重量)。将组织快速冻存于液氮中。样本置于–80°C冷冻保存,干冰运输。

纯化的基因组DNA

纯化的基因组DNA用于甲基化分析。目前提供基因组DNA分离服务,请咨询获取。

分离基因组DNA使用标准的基因组DNA纯化试剂盒,如DNeasy Blood & Tissue Kit,与甲基化分析兼容。对于浓度≥30 ng/µl的DNA,我们推荐每个样本使用2 µg DNA(在不含DNase的纯水或TE缓冲液中)。要求A260/A280≥1.7,A260/A230≥1.7。将样本提交给QIAGEN前,用户应通过琼脂糖凝胶电泳检测样本的完整性。有的话,样本凝胶图片应于样本一同提交。

样本需附有样本提交单,推荐使用excel表格,该表格应该包含下面的信息:样本ID、浓度、A260/A280A260/A230、总体积、总DNA数量。

QIAGEN将利用Agilent Bioanalyzer测量DNA浓度并评估提交的DNA的质量。

其他样本类型

请联系QIAGEN技术服务。

样本处理

QIAGEN采用下列步骤,处理适用于EpiTect Methyl II PCR Assay的DNA样本:

基因组DNA分离服务(可选) 
采用PCR分析试剂进行DNA甲基化的real-time PCR检测。 
同时分析24或96个基因的DNA甲基化状态
数据分析

电子表格数据可通过安全的FEP网站下载或通过电子邮件发送。完整的数据和实验报告包括:

原始CT
ΔCT,校准值和内参值之差
Excel电子表格 
Applications
EpiTect Methyl II PCR Assay能够可靠且灵敏地实现DNA甲基化状态谱分析,应用于与干细胞增殖和分化、肿瘤及其他人类疾病相关的主要生物标记物的研究和开发。