QuantiFast Multiplex RT-PCR Kits

使用序列特异性探针进行快速的多重一步法RT-PCR，适用于基因表达分析

  • 灵敏检测单管中的多个目标RNA
  • 快速获得结果，可节省多达50%的时间
  • 无需优化，即可成功进行多重RT-PCR
  • 准确区分起始量相近的模板
  • 可检测同一反应管内的对照基因和至多3个靶基因

应用QuantiFast Multiplex RT-PCR Kits可在单管内通过多重一步法real-time RT-PCR对多至4个RNA进行快速、可靠的定量检测。特制的逆转录酶混合液可快速、高效合成cDNA。Q-Bond和优化的预混液促进快速多重real-time RT-PCR的进行，适用于快速或标准PCR仪。即用型预混液中的热启动酶和独特的PCR缓冲液可确保在所有real-time PCR仪上进行灵敏的qPCR，无需优化。有两种规格的试剂盒：QuantiFast Multiplex RT-PCR Kit适用于需要ROX染料进行荧光信号校准的PCR仪，QuantiFast Multiplex RT-PCR +R Kit适用于其他所有PCR仪。为便于使用，预混液可保存在2–8°C。

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产品 货号 目录价：
QuantiFast Multiplex RT-PCR Kit (400)
For 400 x 25 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x QuantiFast Multiplex RT-PCR Master Mix (with ROX dye), 100 µl QuantiFast RT Mix, 2 x 2 ml RNase-Free Water
 204854
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QuantiFast Multiplex RT-PCR +R Kit (400)
For 400 x 25 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x QuantiFast Multiplex RT-PCR Master Mix (without ROX dye), 100 µl QuantiFast RT Mix, 210 µl ROX Dye Solution, 2 x 2 ml RNase-Free Water
 204954
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QuantiFast Multiplex RT-PCR +R Kit (2000)
For 2000 x 25 µl reactions: 25 ml 2x QuantiFast Multiplex RT-PCR Master Mix (without ROX dye), 500 µl QuantiFast RT Mix, 1.05 ml ROX Dye Solution, 1 x 20 ml RNase-Free Water
 204956
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QuantiFast Multiplex RT-PCR Kits适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


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RT-PCR时间极大缩短。|可靠的相对定量。|三重和单重RT-PCR的结果具有可比性。|四重RT-PCR具有高灵敏性。|退火时引物快速结合。|QIAGEN多重试剂盒。|独特的缓冲液能够促进稳定、高效的退火。|
使用QuantiFast Multiplex Kit进行一步法real-time RT-PCR，可缩短PCR总运行时间达50%（40个循环运行；与QuantiTect Multiplex Kit相比较）。I：iCycler iQ；L1：LightCycler 480；L2：LightCycler 2.0；A1：ABI PRISM 7900；A2：Applied Biosystems 7500 Fast System；M：Mx3005P。|细胞系X采用两种化合物之一 (Y或Z) 处理或者不处理 (U)。纯化RNA，在Applied Biosystems 7500 Fast System上使用QuantiFast Multiplex RT-PCR +R Kit和针对肌细胞生成素和GAPDH的TaqMan Gene Expression Assay进行一步法双重real-time RT-PCR。针对每次处理，进行5次独立实验。[A] 检测肌细胞生成素表达的变化，检测的准确度和重复性较高 (绿色曲线)。在所有实验中，管家基因GAPDH的表达相当 (蓝色曲线)，可利用ΔΔCT相对定量方法对肌细胞生成素的表达水平进行标准化。[B] 在不同实验之间，相对于未处理细胞，标准化的肌细胞生成素表达水平的倍数变化保持稳定，如图中较小的误差条所示。(数据由瑞士巴塞尔Novartis Pharma AG的Angelika Meyer提供)。|在LightCycler 480上使用QuantiFast Multiplex RT-PCR +R Kit和采用Primer Express设计的针对 [A] RPS27A (一种核糖体蛋白)、[B] GAPDH (管家基因) 和 [C] UBC (管家基因) 的TaqMan Assay进行三重和单重real-time RT-PCR。模板为HeLa细胞cDNA (10 ng、1 ng或0.1 ng)，进行两次重复反应。三重PCR (彩色曲线) 和单重PCR (灰色曲线) 的比较CT值证明了在分析不同丰度的靶点时，使用QuantiFast Multiplex RT-PCR +R Kit进行三重PCR的可靠性。|在Mx3005P上使用QuantiFast Multiplex RT-PCR +R Kit和采用Primer Express设计的TaqMan Assay进行4重一步法real-time RT-PCR。使用10 ng Ramos细胞RNA为模板，进行两次重复反应。以可重复的方法检测所有4个丰度差异极大的靶点。|[A] QuantiFast Buffer中的Q-Bond能使DNA聚合酶和引物结合为单一复合物，将退火时间缩短至几秒。此外，独特的缓冲液组分可支持DNA的熔解，缩短变性和延伸时间。[B] 若无Q-Bond，引物和聚合酶会相继与模板结合，退火时间较长。|QuantiFast Multiplex RT-PCR Kit提供了简单的多重定量real-time PCR步骤。与当前的方法相比，即便是进行复杂的分析（如目的基因的拷贝数明显少于对照基因的分析），该试剂盒亦无需优化引物、Mg2+和Taq DNA聚合酶的浓度，甚至是困难模板（例如：靶基因拷贝数大大少于参考基因）。
|[A] NH4+防止引物与模板的非特异性结合。[B] MP合成因子是创新的PCR添加剂，能够提高模板处局部的引物浓度，与K+和其他离子一起，MP合成因子能够特异性稳定结合的引物，使HotStarTaq Plus DNA Polymerase作用下的引物延伸更加高效。|
性能

QuantiFast Multiplex RT-PCR Kits可节省高达50%的RT-PCR运行时间，让您更快获得结果（参见"Significantly reduced RT-PCR times"）。您可极大地提高样本通量或与其它使用者有效地共享PCR仪。在同一个反应中同时扩增对照基因和靶基因，而非分开反应，减少了操作误差，提高了基因定量检测的可靠性（参见"Reliable relative quantification"）。QuantiFast Multiplex RT-PCR Kits提供的特制预混液可快速构建多重反应，通常初次使用即可得到成功的结果，且多重PCR反应结果可与单重PCR反应结果相媲美（参见"Comparable results in triplex and singleplex RT-PCR"）。

QuantiFast Multiplex RT-PCR Kits可清楚区分模板量的细微差别。即使模板量仅有两倍的差别，该试剂盒也能精确定量丰度差别较大的2个靶基因。该试剂盒可对多达4个靶基因进行快速多重real-time RT-PCR检测，且不会影响PCR结果（参见"Uncompromised sensitivity in 4-plex RT-PCR"）。

原理

QuantiFast Multiplex RT-PCR Kits在标准和快速PCR仪上快速、灵敏的进行检测，无需优化（参见"QIAGEN multiplex kits"）。特制的快速PCR缓冲液中含有新型成分Q-Bond，可大大缩短变性、退火和延伸所需时间（参见"Fast primer annealing"）。

在同一个反应中同时扩增对照基因和靶基因，而非分开反应，减少了操作误差，提高了基因定量检测的可靠性。QuantiFast Multiplex RT-PCR Buffer含有平衡的K+和NH4+配比，促进了引物的特异性退火，同时独特的MP因子可稳定特异性结合的引物（参见"Unique PCR buffer"）。此外，经优化的逆转录酶混合液确保cDNA合成在20分钟内完成。HotStarTaq Plus DNA Polymerase要求严谨的热启动，可阻止非特异性产物的形成。

2x QuantiFast Multiplex RT-PCR Kit的成分
成分特点 优势
HotStarTaq Plus DNA Polymerase 95ºC加热5分钟活化 在室温进行qPCR反应体系构建
QuantiFast Multiplex RT-PCR Buffer 平衡的NH4+和K+离子配比 引物探针的特异性结合确保获得可靠结果
合成的MP因子 在单管中对至多4个基因进行多重分析
独特的Q-Bond添加剂 PCR运行时间缩短，更快获得结果，一天内可完成更多PCR反应
ROX染料† 对Applied Biosystems和Agilent PCR仪进行荧光信号的校准 在需要ROX染料的PCR仪上进行准确定量，不影响PCR反应结果
QuantiFast RT Mix 特制的逆转录酶混合液，对RNA具有高度亲和性 RNA的逆转录可在20分钟内完成，包括复杂的二级结构
* 也含有dNTP混合液（dATP、dCTP、dGTP和dTTP）。 †  ROX染料或者在预混液中，或者另外提供。
操作流程

QuantiFast Multiplex RT-PCR Kits提供即用型的预混液，无需优化反应及循环条件。只需在预混液中加入模板RNA和引物-探针对，即可按照操作手册中的实验方案，在任何real-time PCR仪上进行快速、可靠的检测。试剂盒提供两种形式：预混液中含有或不含荧光校正用的ROX染料，因此适用于任何real-time PCR仪（参见下表）。由于ROX浓度经优化，即使是低拷贝数也可通过数据自动分析进行检测。

选择合适的QuantiFast Multiplex RT-PCR Kit
ROX染料试剂盒 适用的PCR仪
混合在预混液中 QuantiFast Multiplex RT-PCR Kit 除Applied Biosystems 7500外的所有Applied Biosystems仪器
单独装在管中 QuantiFast Multiplex RT-PCR +R Kit Applied Biosystems 7500、
Bio-Rad、Cepheid、Eppendorf、QIAGEN、Roche、Agilent和其他供应商的PCR仪
应用

QuantiFast Multiplex RT-PCR Kits可用于在各种real-time PCR仪上进行基因表达分析，包括Applied Biosystems、Bio-Rad、Cepheid、Eppendorf、Roche和Agilent的PCR仪。Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪或其他Rotor-Gene PCR仪上使用时，我们推荐使用专为快速PCR研发的Rotor-Gene Multiplex RT-PCR Kit。

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特点
参数
应用 Real-time quantification of RNA targets in a multiplex format
反应类型 Real-time one-step RT-PCR
real-time或终点法PCR Real-time
样本/目标类型 RNA
单一或多重 Multiplex
SYBR Green I或序列特异性探针 Sequence-specific probes
热循环仪 Real-time cyclers dedicated for multiplex PCR (e.g., most Applied Biosystems real-time PCR cyclers, Roche LightCycler 480, and Bio-Rad iCycler iQ)
有/无ROX Available with ROX in master mix or with ROX as separate vial

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试剂盒操作手册
1
(EN) - QuantiFast Multiplex RT-PCR Handbook
For quantitative, multiplex, real-time one-step RT-PCR with fast cycling using sequence-specific probes
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安全数据表
1
Safety Data Sheets
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
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