QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit

从人类血浆或血清中浓缩和纯化游离DNA和RNA

  • 浓缩的核酸,高上样量,低洗脱体积
  • 高效回收DNA和RNA碎片
  • 无需有机提取或乙醇沉淀
  • 完全去除污染物和抑制剂

QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit大大简化了从血浆或血清中浓缩和纯化游离DNA和RNA的过程。

製品名 Cat. no. List price:
QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit (50)
For 50 preps: QIAamp Mini Columns, Tube Extenders (20 ml), QIAGEN Proteinase K, Carrier RNA, Buffers, VacConnectors, and Collection Tubes (1.5 ml and 2 ml)
55114
¥116,000
Carrier RNA(poly A) 12x1350µg-15-25°C,KG
Carrier RNA(poly A) 12x1350µg-15-25°C,KG
1017647
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QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit  は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。


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遊離DNAの再現性の高い回収|改良されたDNAフラグメントの回収|遊離miRNA の効率的な精製|メチル化DNAの効率的な回収|
同量のDNAフラグメント(200 bpと1000 bp)を血漿24サンプルに添加した。DNAを5 ml の血漿からQIAamp Circulating Nucleic Acid Kit で精製し、80 μl で溶出した。QuantiTect Multiplex PCR Kit を用いて、各DNAフラグメントに特異的な66 bpターゲットのduplexリアルタイムPCRを行なった。|遊離DNA を5 ml の血漿からQIAamp Circulating Nucleic Acid Kit で、1 ml の血漿からQIAamp MinElute Virus Vacuum Kit で精製し、100 μl で溶出した。QuantiTect Multiplex PCR Kit を用いて、18S rRNA遺伝子のアンプリコン66 bpと500 bpのduplexリアルタイムPCRを行なった。500 bp と66 bp のアンプリコンの増幅差はDNAのフラグメント化を示し、短い66 bp ターゲットと比較してインタクトな500 bp ターゲット配列が少なかった(この差は使用したサンプル量の5倍差より大きいことに注意)。|標準プロトコールで5 ml、miRNA 専用プロトコールで 3 ml のプール血漿から、QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit で遊離RNA を精製し、50 μl で溶出した。標準プロトコール
をmiRNA 専用プロトコールと比較した。 miRNA 30bの収量はTaqMan microRNA Assay(Applied Biosystems)で、miRNA 16の収量はHuman miScript Assay(QIAGEN)でそれぞれ定量した。miRNA プロトコールでの低いCT 値は両miRNA の収量が高いことを示唆している。|メチル化DNAと非標的poly-A RNA(キャリア)を添加した血漿4 ml からQIAamp Circulating Nucleic Acid Kit を用いて精製し、45 μlで溶出した。EpiTect Bisulfite Kit (QIAGEN)を用いてBisulfite変換し、リアルタイムMSP アッセイとQuantiTect Multiplex PCR Kit の試薬を用いたMSP(methylation-specific PCR)をABI PRISM 7900HT Sequence Detection Systemで行なった。2つの完全にメチル化された遺伝子座データを解析した。|
パフォーマンス

分析血液中肿瘤特异性的胞外DNA片段和mRNA可对普通血液样品进行特异性地肿瘤类型检测。这些存在于血清或血浆中的游离核酸通常都是<1000 bp(DNA)或<1000 nt(RNA)的片段。此外,小至21 nt的miRNAs可作为某些癌症和疾病状态的生物标记。

QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit可从人类血浆、血清和其他无细胞体液中高效纯化游离核酸。纯化效率高、重现性好、产量高(参见"Reproducible recovery of circulating DNA")。应用延长的上样管和真空装置QIAvac 24 Plus可将样品处理量提至5 ml,洗脱体积可在20–150 μl之间灵活变化,可浓缩低浓度核酸。 该试剂盒采用先进的技术,硅胶膜选择性的结合目标核酸,提高片段化核酸的回收率(参见"Improved recovery of fragmented DNA")。

使用RNase-Free DNase Set进行DNA柱上消化,纯化获得不含DNA的游离RNA 。特别设计的流程确保高效纯化诸如miRNA等小RNA(参见"Efficient purification of circulating miRNA")。使用QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit高效纯化甲基化DNA,经纯化的DNA维持其甲基化状态,可进行亚硫酸氢盐转化实验,进行甲基化状态分析(参见"Efficient recovery of methylated DNA")。

经纯化和浓缩的游离DNA和RNA不含蛋白、核酸酶和其他杂质,可即用于各种下游应用,包括:

PCR 和定量real-time PCR以及RT-PCR
用于基于血液样品的癌症生物标记的研究、验证和检测
病毒核酸检测 
原理

QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit简化了从血浆或血清中纯化游离DNA和RNA的过程。无需苯酚-氯仿抽提。核酸特异性结合到QIAamp Mini离心柱上,污染物流走。PCR抑制物,如:二价阳离子和蛋白,可通过三步有效的洗涤步骤被完全去除,结合在离心柱上的纯核酸可用水或试剂盒中的缓冲液洗脱。使用QIAamp Circulating Nucleic Acid技术从人类血浆、血清或尿液中获得游离的DNA和RNA。

QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit有可选择性结合的硅胶膜和20–150 μl灵活的洗脱体积。使用RNase-Free DNase Set进行DNA柱上消化,可纯化游离RNA。

操作手順

QIAamp Circulating Nucleic Acid的流程包括4步(裂解、结合、洗涤和洗脱),使用QIAamp Mini离心柱在真空装置上处理。简单的操作适用于同时处理多个样品,可在2小时内处理24个样品。QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit有待使用者验证是否能适用于所有的病毒种类的RNA和DNA纯化。

アプリケーション

QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit可从含低浓度DNA和RNA碎片的原始样本(人血浆中常规游离DNA的浓度为1–100 ng/ml)中纯化和浓缩游离的DNA、RNA、miRNA,包括病毒核酸。起始样本体积至多5 ml。

QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit可从以下样本类型中纯化和浓缩核酸:

人类血浆
血清
尿液
Feature
Specifications
Applications PCR, real-time PCR
CE/FDA/IVD compatible -
Elution volume 20–150 µl
Format QIAamp Mini Columns
Main sample type Serum, plasma
Processing Manual (vacuum)
Purification of total RNA, miRNA, poly A+ mRNA, DNA or protein Free-circulating DNA, RNA and miRNA, viral DNA, viral RNA
Sample amount 1-5 ml
Technology Silica technology
Time per run or per prep <2 hour for 24 preps
Yield Varies, due to donor-to-donor variations and disease status

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キットハンドブック
2
MSDS
2
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
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画像
Reproducible recovery of circulating DNA
遊離DNAの再現性の高い回収
同量のDNAフラグメント(200 bpと1000 bp)を血漿24サンプルに添加した。DNAを5 ml の血漿からQIAamp Circulating Nucleic Acid Kit で精製し、80 μl で溶出した。QuantiTect Multiplex PCR Kit を用いて、各DNAフラグメントに特異的な66 bpターゲットのduplexリアルタイムPCRを行なった。
Improved recovery of fragmented DNA
改良されたDNAフラグメントの回収
遊離DNA を5 ml の血漿からQIAamp Circulating Nucleic Acid Kit で、1 ml の血漿からQIAamp MinElute Virus Vacuum Kit で精製し、100 μl で溶出した。QuantiTect Multiplex PCR Kit を用いて、18S rRNA遺伝子のアンプリコン66 bpと500 bpのduplexリアルタイムPCRを行なった。500 bp と66 bp のアンプリコンの増幅差はDNAのフラグメント化を示し、短い66 bp ターゲットと比較してインタクトな500 bp ターゲット配列が少なかった(この差は使用したサンプル量の5倍差より大きいことに注意)。
Specialized protocol for efficient purification of circulating miRNA
遊離miRNA の効率的な精製
標準プロトコールで5 ml、miRNA 専用プロトコールで 3 ml のプール血漿から、QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit で遊離RNA を精製し、50 μl で溶出した。標準プロトコール
をmiRNA 専用プロトコールと比較した。 miRNA 30bの収量はTaqMan microRNA Assay(Applied Biosystems)で、miRNA 16の収量はHuman miScript Assay(QIAGEN)でそれぞれ定量した。miRNA プロトコールでの低いCT 値は両miRNA の収量が高いことを示唆している。
Efficient recovery of methylated DNA
メチル化DNAの効率的な回収
メチル化DNAと非標的poly-A RNA(キャリア)を添加した血漿4 ml からQIAamp Circulating Nucleic Acid Kit を用いて精製し、45 μlで溶出した。EpiTect Bisulfite Kit (QIAGEN)を用いてBisulfite変換し、リアルタイムMSP アッセイとQuantiTect Multiplex PCR Kit の試薬を用いたMSP(methylation-specific PCR)をABI PRISM 7900HT Sequence Detection Systemで行なった。2つの完全にメチル化された遺伝子座データを解析した。