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HotStarTaq Plus DNA Polymerase

快速、高特异性扩增，适合多种应用

  • 高特异性PCR，所需优化次数少
  • 快速激活热启动酶，只需5分钟
  • 即用型PCR上样缓冲液，操作更简单快速
该聚合酶具备高特异性、高灵敏度，HotStarTaq DNA Polymerase所需的优化次数少，激活时间为5分钟。可在室温下构建PCR反应体系，且反应产物可直接上样至凝胶，因为新型的CoralLoad PCR缓冲液包含两种凝胶示踪染料。同时提供标准QIAGEN PCR缓冲液，便于操作。此外，一种新型的添加剂Q-Solution可确保高效扩增难扩增的模板（如富含GC的模板）。独特的试剂盒组成和经优化的实验方案使PCR流程更加高效。
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HotStarTaq Plus DNA Polymerase (250)
250 units HotStarTaq Plus DNA Polymerase, 10x PCR Buffer, 10x CoralLoad PCR Buffer, 5x Q-Solution, 25 mM MgCl2
 203603
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HotStarTaq Plus DNA Polymerase (1000)
1000 units HotStarTaq Plus DNA Polymerase, 10x PCR Buffer, 10x CoralLoad PCR Buffer, 5x Q-Solution, 25 mM MgCl2
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HotStarTaq Plus DNA Polymerase (5000)
5000 units HotStarTaq Plus DNA Polymerase, 10x PCR Buffer, 10x CoralLoad PCR Buffer, 5x Q-Solution, 25 mM MgCl2
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HotStarTaq Plus DNA Polymerase (25000)
25,000 units HotStarTaq Plus DNA Polymerase, 10x PCR Buffer, 10x CoralLoad PCR Buffer, 5x Q-Solution, 25 mM MgCl2
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HotStarTaq Plus DNA Polymerase适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


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CoralLoad PCR Buffer。|HotStarTaq Plus实验流程。|高特异性。|扩增困难模板。|对不同引物-模板体系均有较高的特异性。|RT-PCR中高效的热启动。|高度灵敏的单细胞PCR。|退火时引物结合的特异性增强。|
[A] CoralLoad染料包含两种凝胶示踪染料，能够便利的进行凝胶上样，[B] 以及清楚的看到DNA的迁移。|HotStarTaq Plus实验流程快速、简单，十分便利。|使用QIAGEN的HotStarTaq Plus DNA Polymerase、HotStarTaq DNA Polymerase和Taq DNA Polymerase，以及指定供应商的三种热启动PCR酶进行PCR反应。使用50 ng人基因组DNA，遵循供应商的建议进行并行反应。采用35个PCR循环扩增1.5 kb的人CFTR基因片段。M：分子量标准。|使用QIAGEN PCR Buffer和Taq DNA Polymerase，不加入 (–) 或者加入 (+) 1x Q-Solution，对两种不同的引物-模板系统进行扩增，重复两次。Q-Solution可实现难以处理的模板的特异性扩增。[A] 人血管紧张素受体II基因；[B] 小鼠蛋白激酶C基因；M：分子量标准。|在相同的条件下，使用Supplier R的Taq DNA聚合酶 (R) 或HotStarTaq DNA Polymerase (H)，对三种不同的引物-模板系统进行扩增。System 1：从人基因组DNA中扩增1.1 kb的D-IgI同系物片段。System 2：从人基因组DNA中扩增与X染色体链锁型青年型视网膜裂损症相关的296 bp的染色体区域片段。System 3：利用总RNA合成的cDNA，扩增214 bp的β-actin基因片段。M：分子量标准。|利用cDNA扩增1.1 kb的人白介素1受体 (II型) 片段。使用Supplier L的Taq DNA聚合酶和缓冲液（No hot start）；使用Supplier L的抗体介导的热启动酶和缓冲液（Antibody-mediated）；使用QIAGEN的HotStarTaq DNA Polymerase和PCR Buffer （HotStarTaq）制备扩增反应，重复三次。M：分子量标准。|利用流式细胞术分离单细胞，并直接分选至单个PCR管内，扩增500 bp的鼠p53基因片段。使用QIAGEN的HotStarTaq DNA Polymerase和PCR Buffer（HotStarTaq）、Supplier AII的热启动酶和缓冲液（Hot-start enzyme）或Supplier L的抗体介导的热启动酶和缓冲液（Antibody-mediated）制备并行反应。M：分子量标准。|QIAGEN PCR缓冲液中的铵态氮和钾离子能够在退火时促进引物的特异性结合。K+结合到DNA主链上的磷酸基团（P–）上，稳定结合到模板上的引物。在热循环中，NH4+以铵离子和氨的形式存在，可以与碱基（B）之间的氢键发生相互作用，使错配碱基间的不稳定的氢键容易断开。两种阳离子的共同作用，在广泛的温度范围内保持特异性结合比例高。|
性能
每一批HotStarTaq Plus DNA Polymerase都经过全方位的质量控制测试，包括：严格的PCR特异性和重复性分析，即使低拷贝的靶分子也可扩增。通过检测，HotStarTaq Plus DNA Polymerase优于其它供应者提供的试剂盒，确保高度特异性和在热启动PCR中的卓越表现（参见"Highest specificity"、"Higher specificity with different primer–template systems"和表格）。该试剂盒提供的新型PCR缓冲液使得在多种PCR条件下都维持高特异性，无需优化。Q-Solution可进一步优化PCR，且该试剂盒中提供（参见"Amplification of difficult templates"）。总之，这些组合确保了在多种应用中的特异性扩增（参见"Effect of hot start on RT-PCR performance"和"Highly sensitive single-cell PCR"）。
热启动模式比较
HotStarTaq Plus DNA Polymerase HotStarTaq DNA Polymerase Supplier AII提供的热启动酶 供应商R 供应商I （抗体介导） 手动 石蜡屏障
特异性扩增 ++ ++ + ++ + +/– +/–
PCR优化需求 ++ ++ +/– +/– +/– – –
易用性 +++ ++ ++ + + – –
激活速度 ++ + ++ ++ ++ – –
HotStarTaq Plus DNA Polymerase特性

浓度：5 units/µl
重组酶：是
底物类似物：dNTP、ddNTP、dUTP、biotin-11-dUTP、DIG-11-dUTP、fluorescent-dNTP/ddNTP
延伸速度：72°C条件下2–4 kb/min
酶半衰期：97°C条件下10 min，94°C条件下60 min
扩增效率：≥105倍
5'–>3'外切酶活性：是
额外添加A：是
3'–>5' 外切酶活性：否
核酸酶污染：否
蛋白酶污染：否
RNases污染：否
自启活性：否  

原理

HotStarTaq Plus DNA Polymerase具备同HotStarTaq DNA Polymerase一样的卓越表现，激活时间只需5分钟。

 HotStarTaq Plus DNA Polymerase，是一种经修饰的QIAGEN Taq DNA Polymerase，以非活性形式提供，常温下没有聚合酶活性。避免PCR构建和循环初始阶段低温条件下非特异性引物的延伸和引物二聚体的形成（参见"Highest specificity"和"Higher specificity with different primer-template systems"）。95°C条件下孵育5分钟即可激活HotStarTaq Plus DNA Polymerase，这个步骤可整合入已有的热循环程序中。

QIAGEN PCR Buffer

QIAGEN PCR Buffer通过提高每个PCR扩增退火过程特异性引物的结合比例，确保PCR每个循环特异性扩增（参见"Increased specificity of primer annealing"）。独特的KCl和(NH4)2SO4平衡组合，使得该缓冲液与传统的PCR缓冲液相比在很宽的温度和Mg2+浓度范围内都有严格的引物退火条件和高度的特异性，无需进行耗时的优化。

CoralLoad PCR Buffer

HotStarTaq Plus DNA Polymerase同时提供CoralLoad PCR Buffer，CoralLoad PCR Buffer具备QIAGEN PCR Buffer的所有优点，同时可直接将PCR产物上样到琼脂凝胶上，无需加入凝胶上样缓冲液。CoralLoad PCR Buffer具备同样高的PCR特异性，与常规的QIAGEN PCR Buffer一样可减少优化过程。此外，它包含两种指示染料，橙色染料和红色染料，可方便的判断DNA的迁移距离和优化跑胶时间（参见"CoralLoad PCR Buffer"）。该缓冲液提高移液的可见性，并可直接将PCR产物上样至凝胶，提高便利性。

Q-Solution

该产品同时提供Q-Solution，一种新型的PCR添加剂，通过修饰DNA熔解行为促进难扩增模板的扩增。这种独特的试剂可进一步优化由模板引起的表现不理想的PCR，如过多的二级结构和富含GC的模板（参见"Amplification of difficult templates"）。不同于DMSO和其他PCR添加剂，Q-Solution的浓度是确定的，没有毒性，并且保证PCR的纯度。而且PCR中加入Q-Solution不会影响PCR的准确性。

操作流程
HotStarTaq Plus DNA Polymerase提供高效、经优化的实验方案，用于快速、方便的构建PCR反应体系。95°C条件下孵育5分钟激活HotStarTaq DNA Polymerase，可以整合入已有的热循环程序。反应可在室温下建立，更加方便和易于使用（参见"HotStarTaq Plus procedure"）。该试剂盒同时提供CoralLoad PCR Buffer，提高移液的可见性，并可直接将PCR产物上样至凝胶，提高便利性。
应用

HotStarTaq Plus DNA Polymerase适合多种应用，包括各种富有挑战性的研究，如各种扩增应用：

  • 复杂的基因模板
  • 复杂的cDNA模板（如RT-PCR）
  • 低拷贝的靶分子（如单细胞PCR）
  • 多重引物对反应
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特点
参数
应用 PCR, RT-PCR, Complex genomic templates, very low-copy targets
酶活 5' -> 3' exonuclease activity
预混液 No
反应类型 PCR amplification
real-time或终点法PCR Endpoint
样本/目标类型 Genomic DNA and cDNA
单一或多重 Single
有/无热启动酶 With hotstart

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产品介绍与指南
2
Analyzing Genetic Differences - (EN)
Second edition — innovative tools
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(EN) - Maximizing PCR and RT-PCR success — Third Edition
Addressing critical factors and new solutions
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试剂盒操作手册
1
HotStarTaq Plus PCR Handbook - (EN)
For highly specific hot-start PCR without optimization  
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安全数据表
1
Safety Data Sheets
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
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Ready-to-load PCR buffer
CoralLoad PCR Buffer。
[A] CoralLoad染料包含两种凝胶示踪染料，能够便利的进行凝胶上样，[B] 以及清楚的看到DNA的迁移。
HotStarTaq Plus procedure
HotStarTaq Plus实验流程。
HotStarTaq Plus实验流程快速、简单，十分便利。
Highest specificity with HotStarTaq Plus Polymerase
高特异性。
使用QIAGEN的HotStarTaq Plus DNA Polymerase、HotStarTaq DNA Polymerase和Taq DNA Polymerase，以及指定供应商的三种热启动PCR酶进行PCR反应。使用50 ng人基因组DNA，遵循供应商的建议进行并行反应。采用35个PCR循环扩增1.5 kb的人CFTR基因片段。M：分子量标准。
Amplification of Difficult Templates with Q-Solution
扩增困难模板。
使用QIAGEN PCR Buffer和Taq DNA Polymerase，不加入 (–) 或者加入 (+) 1x Q-Solution，对两种不同的引物-模板系统进行扩增，重复两次。Q-Solution可实现难以处理的模板的特异性扩增。[A] 人血管紧张素受体II基因；[B] 小鼠蛋白激酶C基因；M：分子量标准。
Higher Specificity with Different Primer–Template Systems
对不同引物-模板体系均有较高的特异性。
在相同的条件下，使用Supplier R的Taq DNA聚合酶 (R) 或HotStarTaq DNA Polymerase (H)，对三种不同的引物-模板系统进行扩增。System 1：从人基因组DNA中扩增1.1 kb的D-IgI同系物片段。System 2：从人基因组DNA中扩增与X染色体链锁型青年型视网膜裂损症相关的296 bp的染色体区域片段。System 3：利用总RNA合成的cDNA，扩增214 bp的β-actin基因片段。M：分子量标准。
Effect of Hot Start on RT-PCR Performance
RT-PCR中高效的热启动。
利用cDNA扩增1.1 kb的人白介素1受体 (II型) 片段。使用Supplier L的Taq DNA聚合酶和缓冲液（No hot start）；使用Supplier L的抗体介导的热启动酶和缓冲液（Antibody-mediated）；使用QIAGEN的HotStarTaq DNA Polymerase和PCR Buffer （HotStarTaq）制备扩增反应，重复三次。M：分子量标准。
Single-Cell PCR
高度灵敏的单细胞PCR。
利用流式细胞术分离单细胞，并直接分选至单个PCR管内，扩增500 bp的鼠p53基因片段。使用QIAGEN的HotStarTaq DNA Polymerase和PCR Buffer（HotStarTaq）、Supplier AII的热启动酶和缓冲液（Hot-start enzyme）或Supplier L的抗体介导的热启动酶和缓冲液（Antibody-mediated）制备并行反应。M：分子量标准。
NH4+ and K+ cations in QIAGEN PCR buffers increase specific primer annealing
退火时引物结合的特异性增强。
QIAGEN PCR缓冲液中的铵态氮和钾离子能够在退火时促进引物的特异性结合。K+结合到DNA主链上的磷酸基团（P–）上，稳定结合到模板上的引物。在热循环中，NH4+以铵离子和氨的形式存在，可以与碱基（B）之间的氢键发生相互作用，使错配碱基间的不稳定的氢键容易断开。两种阳离子的共同作用，在广泛的温度范围内保持特异性结合比例高。