HotStarTaq Master Mix Kit

高特异性扩增，用于多种PCR分析

  • 高PCR特异性，无需优化
  • 操作简单，室温下进行反应体系的构建
  • 即用型预混液，减少移液步骤
HotStarTaq Master Mix包含HotStarTaq DNA Polymerase、可将优化需求最小化的独特的QIAGEN PCR Buffer、以及dNTPs。预混液中提供各种所需组分，减少移液步骤，降低污染风险，同时提高通量和可重复性。
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产品 货号 目录价：
HotStarTaq Master Mix Kit (250 U)
3 x 0.85 ml HotStarTaq Master Mix (contains 250 units HotStarTaq DNA Polymerase, PCR Buffer with 3 mM MgCl2, and 400 µM of each dNTP)and 2 x 1.7 ml RNase-Free Water
 203443
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HotStarTaq Master Mix Kit (1000 U)
12 x 0.85 ml HotStarTaq Master Mix (contains 1000 units HotStarTaq DNA Polymerase, PCR Buffer with 3 mM MgCl2, and 400 µM of each dNTP) and 8 x 1.7 ml RNase-Free Water
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Hot StarTaq Master Mix Kit (2500 U)
1 x 25 ml HotStarTaq Master Mix (contains 2500 units HotStarTaq DNA Polymerase PCR Buffer with 3 mM MgCl2, and 400 µM of each dNTP) and 1 x 50 ml RNase-Free Water
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HotStarTaq Master Mix Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


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HotStarTaq实验流程。|出色的表现。|对不同引物-模板体系均有较高的特异性。|RT-PCR中高效的热启动。|高度灵敏的单细胞PCR。|对不同镁离子浓度的耐受性。|多重PCR中特异性结合。|退火时引物结合的特异性增强。|
HotStarTaq实验流程快速、简单，十分便利。|将50拷贝的HIV-pol基因重组体加入1 µg人基因组DNA中，扩增497 bp的片段。采用不同的热启动酶：QIAGEN的HotStarTaq DNA Polymerase（HotStarTaq）；Supplier AII的热启动酶（Hot-start enzyme）；Supplier L的Taq抗体混合物（Antibody-mediated）；Supplier R的非热启动酶（No hot start）。特异性的PCR产物如箭头所示。取等体积的反应产物在2%的琼脂糖凝胶上分析。M：分子量标准。|在相同的条件下，使用Supplier R的Taq DNA聚合酶 (R) 或HotStarTaq DNA Polymerase (H)，对三种不同的引物-模板系统进行扩增。System 1：从人基因组DNA中扩增1.1 kb的D-IgI同系物片段。System 2：从人基因组DNA中扩增与X染色体链锁型青年型视网膜裂损症相关的296 bp的染色体区域片段。System 3：利用总RNA合成的cDNA，扩增214 bp的β-actin基因片段。M：分子量标准。|利用cDNA扩增1.1 kb的人白介素1受体 (II型) 片段。使用Supplier L的Taq DNA聚合酶和缓冲液（No hot start）；使用Supplier L的抗体介导的热启动酶和缓冲液（Antibody-mediated）；使用QIAGEN的HotStarTaq DNA Polymerase和PCR Buffer （HotStarTaq）制备扩增反应，重复三次。M：分子量标准。|利用流式细胞术分离单细胞，并直接分选至单个PCR管内，扩增500 bp的鼠p53基因片段。使用QIAGEN的HotStarTaq DNA Polymerase和PCR Buffer（HotStarTaq）、Supplier AII的热启动酶和缓冲液（Hot-start enzyme）或Supplier L的抗体介导的热启动酶和缓冲液（Antibody-mediated）制备并行反应。M：分子量标准。|[A] 使用QIAGEN PCR Buffer和Taq DNA Polymerase (QIAGEN)在图示退火温度下进行PCR扩增。同时使用另一供应商（Supplier AII）的PCR缓冲液和Taq DNA聚合酶进行平行反应。扩增单拷贝人类囊性纤维化基因。M：分子量标准。[B] 对不同镁离子浓度的耐受性。使用标示浓度的Mg2+和Taq DNA Polymerase及QIAGEN PCR Buffer (QIAGEN) 构建PCR反应。使用另一家供应商 (Supplier AII) 提供的PCR缓冲液和Taq DNA聚合酶，同时进行相同的PCR反应。扩增单拷贝的人朊病毒蛋白基因。M：分子量标准。|利用多重PCR，从基因组DNA中扩增鼠p53基因片段。在标准反应条件下使用Supplier R的酶（No hot start），或者使用QIAGEN的HotStarTaq Master Mix Kit（HotStarTaq Master Mix）制备并行反应。M：分子量标准。|QIAGEN PCR缓冲液中的铵态氮和钾离子能够在退火时促进引物的特异性结合。K+结合到DNA主链上的磷酸基团（P–）上，稳定结合到模板上的引物。在热循环中，NH4+以铵离子和氨的形式存在，可以与碱基（B）之间的氢键发生相互作用，使错配碱基间的不稳定的氢键容易断开。两种阳离子的共同作用，在广泛的温度范围内保持特异性结合比例高。|
性能

每一批HotStarTaq Master Mix Kit都经过全方位的质量控制测试，包括：严格的PCR特异性和可重复性分析，即使低拷贝的靶分子也可扩增。通过检测，HotStarTaq DNA Polymerase优于其它供应商提供的试剂盒，确保高度特异性和在热启动PCR中的卓越表现（参见"Higher specificity with different primer–template systems"、"Superior performance"和表格）。该试剂盒提供的新型PCR缓冲液使得在多种PCR条件下都维持高特异性，无需优化（参见"Tolerance to variable magnesium concentration"）。

高度特异性配合简单的操作使HotStarTaq Master Mix Kit适用于复杂的基因组或cDNA模板（参见"Effect of hot start on RT-PCR performance"）、多重引物对（参见"Specific amplification in multiplex PCR"）、从珍贵样本或低拷贝靶分子中抽提的模板（参见"Highly sensitive single-cell PCR"）。该试剂盒还适用于大量样本的扩增，诸如基因筛查等项目。

热启动模式比较
HotStarTaq DNA Polymerase Supplier AII提供的热启动酶 抗体介导 手动 蜡屏障
特异性扩增 ++ + + +/– +/–
PCR优化需求 ++ +/– +/– – –
易用性 ++ ++ + – –
HotStarTaq DNA Polymerase特性

浓度：5 units/µl
重组酶：是
底物类似物：dNTP、ddNTP、dUTP、biotin-11-dUTP、DIG-11-dUTP、fluorescent-dNTP/ddNTP
延伸速度：72°C条件下2–4 kb/min
酶半衰期：97°C条件下10 min，94°C条件下60 min
扩增效率：≥105倍
5'–>3'外切酶活性：是
额外添加A：是
3'–>5' 外切酶活性：否
核酸酶污染：否
蛋白酶污染：否
RNases污染：否
自启活性：否  

原理

HotStarTaq Master Mix是一种即用型预混液，包含HotStarTaq DNA Polymerase、QIAGEN PCR Buffer和dNTPs。HotStarTaq DNA Polymerase是一种经修饰的Taq DNA Polymerase，确保热启动PCR的高特异性。

HotStarTaq DNA Polymerase

HotStarTaq DNA Polymerase以非活性形式提供，常温下没有聚合酶活性。避免PCR构建和循环初始阶段低温条件下非特异性引物的延伸和引物二聚体的形成（参见"Superior performance in hot-start PCR"和"Higher specificity with different primer–template systems"）。95°C条件下孵育15分钟即可激活HotStarTaq DNA Polymerase，这个步骤可整合入已有的热循环程序中。

QIAGEN PCR Buffer

QIAGEN PCR Buffer通过提高每个PCR扩增退火过程特异性引物的结合比例，确保PCR每个循环特异性扩增（参见"Increased specificity of primer annealing"）。独特的KCl和(NH4)2SO4平衡组合，使得该缓冲液与传统的PCR缓冲液相比在很宽的温度和Mg2+浓度范围内都有严格的引物退火条件和高度的特异性，无需进行耗时的优化（参见"Tolerance to variable magnesium concentration"）。

操作流程
HotStarTaq Master Mix Kit以方便的预混液形式提供，易于使用。95°C条件下孵育15分钟即可激活HotStarTaq DNA Polymerase，可以整合入已有的热循环程序。在室温下应用该预混液可快速、简单地构建反应体系，只需将25 µl HotStarTaq Master Mix移入每个PCR反应管，并加入25 µl溶于该试剂盒提供的不含RNase的纯水中的引物和模板DNA（参见"HotStarTaq procedure"）。移液步骤最少化，降低操作误差和污染风险，确保提高通量和可重复性。该试剂盒提供高效、经优化的实验方案，用于快速、方便的PCR反应体系构建。
应用

HotStarTaq Master Mix Kit适合多种应用，包括各种富有挑战性的研究，如各种扩增应用：

  • 复杂的基因模板
  • 复杂的cDNA模板（如RT-PCR）
  • 低拷贝的靶分子（如单细胞PCR）
  • 多重引物对反应
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特点
参数
应用 PCR, RT-PCR, Complex genomic templates, very low-copy targets
酶活 5'-> 3' exonuclease activity
预混液 Yes
反应类型 PCR amplification
real-time或终点法PCR Endpoint
样本/目标类型 Genomic DNA and cDNA
单一或多重 Single
有/无热启动酶 With hotstart

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试剂盒操作手册
1
HotStarTaq PCR Handbook - (EN)
HotStarTaq DNA Polymerase; HotStarTaq Master Mix Kit - For highly specific hot-start PCR without optimization  
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用户开发的实验方案
1
Isolation of bacterial DNA from soil using the QIAamp® DNA Stool Mini Kit and QIAamp DNA Blood Midi Kit - (EN)
As starting material, 5 g soil was mixed with different amounts of Bacillus subtilis cells. Sensitivity was 5 x 103 cells/5g soil.
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安全数据表
1
Safety Data Sheets
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
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