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RNeasy Protect Saliva Mini Kit

从人类唾液中稳定并纯化总RNA

  • 立即稳定唾液样本中的RNA
  • 在室温下进行方便的稳定
  • 无需冰或干冰储存和运输唾液样本
  • 可在–20ºC或–80ºC下存档唾液样本
  • 数分钟内即可纯化高品质RNA

RNeasy Protect Saliva Mini Kit包含RNAprotect Saliva Reagent和RNeasy Micro Kit,前者用于稳定唾液样本中的RNA以保存基因表达谱,后者使用独特的RNeasy MinElute离心柱纯化和浓缩总RNA。稳定后的唾液样本在RNA纯化之前可以方便地保存或运输,37°C(1天)、15–25°C(14天)或2–8°C(4周)。200 μl唾液样本经RNA纯化之后浓缩在14 μl的体积中。

Cat No./ID: 74324
RNeasy Protect Saliva Mini Kit (50)
RNAprotect Saliva Reagent (50 ml) and RNeasy Micro Kit (50)

RNeasy Protect Saliva Mini Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


0
RNeasy Protect Saliva实验流程。
1
将唾液中转录本降解水平最低化。
在唾液样本中加入或不加入RNAprotect Saliva Reagent,置于室温下孵化0或7天。RNA纯化后,使用Human Genome U133 Plus 2.0 GeneChip Array分析样本。0和7天的样本比较显示了未稳定的样本中有159个转录本的信号强度下降2倍,但采用RNAprotect稳定的样本中仅有38个转录本的信号强度下降2倍(以红点表示)。(数据由美国加利福尼亚州洛杉矶加州大学的David Wong博士提供。)
2
高效稳定beta-actin转录本。
RNAprotect Saliva Reagent可在25°C下稳定唾液中的β-actin mRNA水平达3天。使用QuantiTect Probe RT-PCR Kit,采用real-time RT-PCR定量mRNA水平。各时间点显示的是来自3个供体的4或6个唾液样本的平均CT值。
3
癌症生物标记物的mRNA水平稳定。
RNAprotect Saliva Reagent可稳定口腔癌的生物标记物的mRNA水平达168小时。各时间点显示的是来自9个供体的3个唾液样本的real-time RT-PCR分析的平均CT值。H3F3A:H3组蛋白,3A家族;OAZ1:鸟氨酸脱羧酶抗酶1;SAT:精脒/精胺N1-乙酰转移酶;S100P:S100钙结合蛋白P;DUSP1:双位点特异性磷酸酯酶1;IL8:白介素8;S100A8:S100钙结合蛋白A8(唾液中含量丰富的mRNA;非癌症生物标记物)。(数据由美国加利福尼亚州洛杉矶加州大学的David Wong博士提供。)
Performance
RNAprotect Saliva Reagent中稳定的的唾液可在37ºC运输或储存1天,在室温(15–25ºC)下14天,在2–8ºC长达4周,或在–20ºC或–80ºC长期储存(参见"Effective stabilization of β-actin transcript")。从唾液中纯化得到的RNA作为血液RNA的替代品,可通过生物芯片分析研究口腔和系统疾病,还可通过real-time RT-PCR进行癌症RNA生物标记的基因表达分析(参见"Minimization of transcript degradation in saliva"和"Stable mRNA levels of cancer biomarkers")。
Principle

RNeasy Protect Saliva Mini Kit提供RNA保护和分离的完整解决方案,在一个试剂盒中完成从样本收集到RNA纯化的整个过程。经验证的RNeasy硅胶膜技术与具有RNA稳定特性的RNAprotect Saliva Reagent相结合,可纯化得到高品质、完整的RNA。唾液中除了含有细胞和游离的核酸外,还含有细菌。当唾液从供体收集并与RNAprotect Saliva Reagent混合时,RNA立即被稳定并避免了细菌不受控制的生长,从而保证下游基因表达分析结果可靠。样本经稳定后,RNeasy技术整合了异硫氰酸胍的严谨性与硅胶膜纯化的速度及纯度,简化了总RNA分离过程。当收集的样本在RNAprotect Saliva Reagent中稳定前,细菌中的RNA就已经降解,纯化得到的RNA与从培养细胞和动物组织中纯化的RNA相比,质量会相对更低。

Procedure
从供体采集到唾液后(200 µl)立即与RNAprotect Saliva Reagent混合以稳定唾液中的RNA。使用RNeasy Micro Kit可从稳定的唾液中纯化总RNA(参见"RNeasy Protect Saliva procedure")。首先对唾液样本进行离心,再向得到的沉淀中加入Buffer RLT。加入乙醇后,将样本加到RNeasy MinElute离心柱中,离心后RNA结合到膜上。DNase消化可去除基因组DNA残留,在数次洗涤步骤中可洗去污染物。高纯度RNA可在仅为14 µl体积的RNase-free纯水中洗脱下来。RNAprotect Saliva Reagent也能稳定DNA。还可选用实验方案从稳定的唾液中纯化DNA或RNA及DNA。
Applications

使用RNeasy Micro Kit从稳定的唾液中纯化总RNA是血液分析的一种无侵害的替代方式。此试剂盒可用于鉴定RNA生物标记的研究:

口腔疾病
系统疾病(如癌症)
Features
Specifications
应用 PCR, qPCR, real-time RT-PCR, microarray
洗脱体积 8–14 µl
规格 Spin column
主要样本类型 Saliva samples
处理 Manual (centrifugation)
纯化总RNA、miRNA、poly A+ mRNA、DNA或蛋白 RNA
样本量 200 µl
稳定 Yes
技术 Silica technology
产量 Varies

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试剂盒操作手册 (1)
For immediate stabilization of total RNA in saliva and subsequent RNA purification
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