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RNeasy Protect Mini Kit

从组织中稳定并纯化多达100 μg的总RNA

  • 立即稳定和保护RNA
  • 基因表达和基因谱数据可靠
  • 无需使用液氮、干冰或苯酚
  • 数分钟可得到即用型高品质总RNA
  • 无需氯化铯梯度离心,无需氯化锂或乙醇沉淀
RNeasy Protect Mini Kit包含RNAlater RNA Stabilization Reagent和RNeasy离心柱,前者用于稳定组织样本中的RNA,后者使用硅胶膜技术纯化多达100 µg的高品质RNA。RNA纯化过程可在QIAcube全自动核酸纯化仪上自动运行。使用TissueRuptor或TissueLyser体系可有效地破碎组织样本。
Cat No./ID: 74124
RNeasy Protect Mini Kit (50)
RNAlater RNA Stabilization Reagent (50 ml), 50 RNeasy Mini Spin Columns, Collection Tubes (1.5 ml and 2 ml), RNase-free Reagents and Buffers
Cat No./ID: 74126
RNeasy Protect Mini Kit (250)
RNAlater RNA Stabilization Reagent (250 ml), 250 RNeasy Mini Spin Columns, Collection Tubes (1.5 ml and 2 ml), RNase-free Reagents and Buffers

RNeasy Protect Mini Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


0
RNeasy Protect Mini实验流程。
在对极少量DNA亦很敏感的特定RNA应用中,可以在RNeasy步骤过程中使用RNase-Free DNase Set进行方便的柱上DNA酶处理,去除残留的DNA。
1
防止组织中的mRNA降解。
使用标准步骤(Unstabilized)或RNeasy Protect Kit(Stabilized),0、5、10、15、30和60分钟后从新鲜的大鼠肾脏样本中分离RNA。采用琼脂糖凝胶电泳分析分离的RNA,使用northern印迹分析检查GAPDH的表达。M:分子量标准。
3
mRNA水平的变化。
生物样本在收获后,其RNA变得极不稳定。必须防止因样本处理引起的基因诱导或下调,以实现准确的基因表达分析。
Performance

RNAlater RNA Stabilization Reagent的RNA稳定特性可避免样本处理导致的基因诱导或下调,可纯化得到高品RNA(参见"Prevention of degradation of mRNA in tissues")。另外,组织样本在各种条件下保存后,从RNAlater稳定样本中纯化得到的RNA仍能保持完整(参见"Stable RNA in tissues"),使用RNeasy Protect Mini Kit可处理一系列类型的组织(参见下表)。

使用RNeasy Protect Mini Kit得到的总RNA产量
小鼠组织 样本量 (mg) 平均产量* (µg)
10 10
10 43
10 12
10 45
* 样本的发育阶段、种类和生长状况的不同可能造成RNA产量不同。

RNeasy技术纯化得到的RNA,其A260/A280比值为1.9–2.1(测于10 mM Tris·Cl、pH 7.5)。RNeasy操作流程能富集大于200 nt的RNA,得到的RNA不包括5S rRNA、tRNAs或其他低分子质量的RNAs。

Principle
RNeasy Protect体系提供RNA保护和分离的完整解决方案,在一个试剂盒中完成从样本收集到RNA纯化的整个过程。经验证的RNeasy硅胶膜技术采用离心柱规格,与具有RNA稳定特性的RNAlater RNA Stabilization Reagent相结合,可纯化得到高品质、完整的RNA。一旦生物样本被收集,其RNA会变得特别不稳定(参见"Changes in mRNA levels")。创新的水相RNAlater RNA Stabilization Reagent能快速地渗透组织,稳定并保护RNA的表达模式。样本收集时无RNA降解的风险,甚至多次冻融后也无影响。RNeasy技术整合了异硫氰酸胍的严谨性与硅胶膜纯化的速度及纯度,简化了RNA分离的过程(参见"RNeasy Mini spin column")。
Procedure

样本可在RNeasy Protect Kits提供的RNAlater RNA Stabilization Reagent中稳定和储存。RNA纯化时,样本(0.5–30 mg组织)首先被裂解和匀浆。将乙醇加入到裂解液中来提供理想的结合条件。然后将裂解液上样到RNeasy硅胶膜上(结合能力多达100 µg RNA)。RNA结合到膜上,污染物被高效洗去。可用30–100 µl纯水洗脱得到浓缩的纯RNA(参见"RNeasy Protect Mini procedure")。RNA纯化过程可在QIAcube全自动核酸纯化仪上自动运行。

Applications

使用RNeasy技术纯化得到的RNA非常适用于多种应用。下游应用包括:

Northern印迹、点印迹和狭缝印迹
终点法RT-PCR
定量real-time RT-PCR
芯片分析
Poly A+ RNA筛选
Features
Specifications
应用 PCR, qPCR, real-time RT-PCR, microarray
洗脱体积 30–100 µl
规格 Spin column
主要样本类型 Tissue samples
处理 Manual (centrifugation)
纯化总RNA、miRNA、poly A+ mRNA、DNA或蛋白 RNA
样本量 0.5–30 mg
稳定 Yes
技术 Silica technology
产量 10 –45 µg

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试剂盒操作手册 (1)
RNeasy Mini Kit - For purification of total RNA from animal cells, animal tissues, bacteria, and yeast, and for RNA cleanup; RNeasy Protect Mini Kit - For immediate stabilization of RNA in harvested animal tissues and subsequent total RNA purification; RNeasy Plant Mini Kit - For purification of total RNA from plants and filamentous fungi
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参考文献
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