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RNeasy Protect Cell Mini Kit

从细胞中稳定并纯化总RNA

  • 立即稳定分选或培养细胞的RNA
  • 无需去除培养液即可稳定细胞
  • 无需干冰即可保存或运输细胞
  • 可在–20ºC或–80ºC下长期保存细胞
  • 只需数分钟,即可得到高品质RNA

RNeasy Protect Cell Mini Kit中含有RNAprotect Cell Reagent,可稳定分选细胞或培养细胞中的RNA和DNA,细胞可在室温下便利的运输。稳定的细胞可在30°C(1天)、15–25°C(7天)或 2–8°C(四周)储存或运输。RNeasy Protect Cell Mini Kit提供RNeasy Plus Mini Kit,可用于纯化总RNA。裂解稳定的细胞后,使用gDNA去除柱高效去除基因组DNA。之后使用RNeasy离心柱纯化高品质RNA。纯化过程可在QIAcube全自动核酸纯化仪上实现自动化。

Cat No./ID: 74624
RNeasy Protect Cell Mini Kit (50)
RNAprotect Cell Reagent (50 ml) and RNeasy Plus Mini Kit (50)

RNeasy Protect Cell Mini Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


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有效抑制PMA诱导。
将PMA刺激的Jurkat细胞置于RNAprotect Cell Reagent中孵育,防止了PMA诱导的c-fos表达及c-fos转录本的降解,证明利用RNAprotect Cell reagent可稳定RNA(各误差条代表两个细胞重复样本的平均值)。
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RNeasy Protect Cell实验流程。
Performance

在进行基因表达分析实验时,如需在不同实验室间运输细胞,RNeasy Protect Cell Mini Kit是理想选择(参见表1)。

表1. 从RNAprotect Cell Reagent中保存10天的白细胞中纯化的RNA产量更高*
分析结果 RNAprotect Cell Reagent RNAlater Reagent
使用RNeasy技术得到的RNA产量(µg) 10 3.5
Real-time RT-PCR of abl (CT value) 25 26
* 白细胞由Ficoll梯度法制备。数据由法国Pascale Cornillet-Lefebvre, Hôpital Robert Debré, Reims提供.

RNAprotect Cell Reagent中的细胞可在30ºC运输或储存1天,在室温(15–25ºC)下7天,在2–8ºC长达4周,在–20ºC或–80ºC长期储存(参见表2及"Effective inhibition of PMA induction"和"More reliable quantification of CD83 transcript")。

表2. 在室温下储存Jurka 的完整RNA
细胞储存条件 纯化RNA的RIN值*
30ºC (1 天) 9.8
25ºC (7 天) 9.7
2–8ºC (28 天) 10
–20ºC (28 天) 9.8
–80ºC (28 天) 9.8
* 使用Agilent 2100 Bioanalyzer评估RNA的完整性,得到的RIN值的范围为1RNA完全降解)至10RNA百分之百完整)
Principle

RNeasy Protect Cell Mini Kit提供RNA保护和分离的完整解决方案,在一个试剂盒中完成从样本收集到RNA纯化的整个过程。经验证的RNeasy硅胶膜技术与具有RNA稳定特性的RNAprotect Cell Reagent相结合,可纯化得到高品质、完整的RNA。分选或培养的细胞与RNAprotect Cell Reagent混合,可立即稳定细胞内的RNA,确保下游的基因表达分析结果可靠。RNAprotect Cell Reagent可直接加入到细胞培养基或缓冲液中,不需洗涤或处理细胞(如胰酶处理)。或者,RNAprotect Cell Reagent可加入到细胞沉淀中。样本经稳定后,RNeasy技术整合了异硫氰酸胍的严谨性与硅胶膜纯化的速度及纯度,简化了总RNA的分离过程。

Procedure
分选或培养细胞与RNAprotect Cell Reagent混合可立即稳定细胞中的RNA。RNA稳定后,使用RNeasy Plus Mini Kit纯化总RNA(参见"RNeasy Protect Cell procedure")。离心RNAprotect Cell Reagent中的细胞,在Buffer RLT Plus中裂解并匀浆细胞沉淀。将裂解液通过gDNA去除柱,快速、高效去除基因组DNA。在裂解液中加入乙醇,然后使其通过RNeasy离心柱。离心后,总RNA结合在RNeasy离心柱膜上。污染物被高效洗去,在30–50 µl 不含RNase的纯水中洗脱得到高品质总RNA。纯化DNA或RNA及DNA需要另外购买QIAGEN DNA纯化试剂盒。更多细节可参考RNAprotect Cell Reagent Handbook。
Applications

RNAprotect Cell Reagent中保存的细胞可在室温下运输,无需在液氮中冷冻细胞沉淀,也无需干冰运输冷冻的细胞沉淀。RNeasy Protect Cell Mini Kit纯化得到的RNA非常适用于对低量DNA污染敏感的下游应用,如:定量real-time RT-PCR。

Features
Specifications
应用 PCR, qPCR, real-time RT-PCR, microarray
洗脱体积 30–50 µl
规格 Spin column
主要样本类型 Cultured cells
处理 Manual (centrifugation)
纯化总RNA、miRNA、poly A+ mRNA、DNA或蛋白 Total RNA
样本量 Max. 10e7 cells
稳定 Yes
技术 Silica technology
产量 Varies

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试剂盒操作手册 (1)
RNAprotect Cell Reagent
For immediate stabilization of nucleic acids in cells

RNeasy Protect Cell Mini Kit
For immediate stabilization of nucleic acids in cells
and subsequent total RNA purification
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