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RNeasy Plus Micro Kit

从细胞/组织样本中纯化至多45 µg总RNA,配有gDNA去除柱

  • 独特的gDNA Eliminator柱,无需DNase处理
  • 有效去除基因组DNA
  • 数分钟内得到RNA,产量重复性好
  • RNA在敏感的下游应用中表现出色
RNeasy Plus Micro Kit将快速方便的RNA纯化步骤和有效去除基因组DNA污染整合在一起,可纯化获得至多45 µg的RNA。细胞或组织裂解液流过gDNA Eliminator柱,去除基因组DNA。然后应用RNeasy MinElute离心柱纯化总RNA。可应用RNAlater RNA Stabilization Reagent或Allprotect Tissue Reagent方便的稳定组织样本,并应用TissueRuptor或TissueLyser体系高效破碎样本。对于较大的样本,可使用RNeasy Plus Mini Kit(柱子的结合能力为100 µg RNA)。
Cat No./ID: 74034
RNeasy Plus Micro Kit (50)
For 50 micropreps: RNeasy MinElute Spin Columns, gDNA Eliminator Spin Columns, Collection Tubes, Carrier RNA, RNase-Free Water and Buffers

RNeasy Plus Micro Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


0
RNeasy Plus procedure.

A short workflow enables RNA purification with genomic DNA removal in less than 30 minutes.

1
High, reproducible RNA yields.
Total RNA was purified from 10-fold serial dilutions of Jurkat cells (5 x 105 to 5 cells) using the RNeasy Plus Micro Kit; at each dilution, RNA was purified from 4 replicates. β-actin transcript was detected in down to 5 cells by real-time RT-PCR, and reproducible CT values were observed at each dilution. In control reactions without reverse transcriptase (-RT), β-actin DNA was not detected after 38 cycles, indicating the absence of genomic DNA contamination.
Performance
RNeasy Plus Micro操作流程整合了RNeasy技术,可选择性去除双链DNA。去除基因组DNA后,使用RNeasy MinElute离心柱纯化得到高品质RNA。由此确保可重复获得高产量RNA,并高效去除基因组DNA污染,用于敏感的下游应用(参见"High, reproducible RNA yields")。通常从组织和培养细胞中可获得Agilent RIN值接近10的总RNA。
Principle

细胞和易裂解组织首先在含有异硫氰酸胍的高变性Buffer RLT Plus中裂解和匀质化,能使RNases立即失活,以保证分离到完整的RNA。裂解液再流过gDNA Eliminator柱。该离心柱与高盐缓冲液共同作用,可选择性高效的去除基因组DNA。加入乙醇以提供RNA结合的合适条件,样本再加入到RNeasy MinElute离心柱。含有硅胶膜的特制离心柱能特异性的结合裂解细胞中的RNA。

Procedure

RNeasy Plus Micro Kit能从多达5 x 105个细胞或5 mg组织中纯化总RNA,非常适于小样本抽提。简洁的工作流程可在30分钟内纯化得到已去除基因组DNA的RNA(参见"RNeasy Plus procedure" )。样本首先被裂解和匀质化。裂解液流过gDNA Eliminator柱,在流过gDNA Eliminator柱的溶液中加入乙醇,样本再上样到RNeasy MinElute离心柱。RNA结合到膜上,污染物被洗去。获得高品质RNA,洗脱体积14 µl。

处理不同的起始样本可用不同的实验方案。实验方案的不同之处主要在于样本的裂解和匀质化。样本上样到gDNA Eliminator柱之后的步骤就类似。此操作流程适合富集mRNA,不包括大部分小于200 nt的RNAs(如rRNAs和tRNAs)。RNeasy Plus操作流程稍作修改后可从培养细胞中纯化含miRNA等小RNAs的总RNA。

使用Buffer RLT Plus(RNeasy Plus Micro Kit提供)进行组织破碎和匀质化时,可能会产生过多泡沫。在破碎和匀浆前向Buffer RLT Plus中加入Reagent DX(单独提供)可充分减少泡沫产生。Reagent DX经仔细检测,表明配合此试剂盒使用不会影响RNA的纯度或下游应用。

Applications

RNeasy Plus Micro Kit纯化得到的RNA适合对少量DNA污染敏感的下游应用,如定量real-time RT-PCR。纯化得到的RNA还可用于其他应用。

RNeasy Plus Micro Kit适用于小样本,包括:

激光显微切割冰冻切片
细针穿刺
Features
Specifications
应用 RT-PCR, realtime RT-PCR, microarray
洗脱体积 14 µl
规格 Spin column
整合基因组DNA去除步骤 Yes
主要样本类型 Tissue, cells
处理 Manual (centrifugation)
纯化总RNA、miRNA、poly A+ mRNA、DNA或蛋白 Total RNA
样本量 5 x 10e5 cells or 5 mg tissue
技术 Silica technology
每次运行或制备时间 25 min
产量 Varies

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试剂盒操作手册 (1)
For purification of total RNA using gDNA Eliminator columns from small samples, including
  • animal and human cells (≤5 x 10^5)
  • animal and human tissues (≤5 mg)
  • microdissected cryosections
and for RNA cleanup and concentration
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