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RNeasy Fibrous Tissue Mini Kit

从富含纤维的组织中纯化至多100 µg的总RNA

  • 优化的实验方案,用于富含纤维的组织
  • 总RNA产量高
  • 获得高品质RNA,用于多种下游应用
  • 使用DNase I去除基因组DNA
RNeasy Fibrous Tissue Mini Kit包含蛋白酶K和RNeasy离心柱,前者用于去除富含纤维的组织样本中大量的蛋白,后者用于纯化至多100 µg高品质RNA。该试剂盒可在QIAcube全自动核酸纯化仪上实现完全自动化。可使用RNAlater RNA Stabilization Reagent或Allprotect Tissue Reagent方便的稳定纤维组织样本,使用TissueRuptor或TissueLyser体系有效地裂解样本。处理更大的样本可使用RNeasy Fibrous Tissue Midi Kit(离心柱的结合能力为1 mg RNA)。
Cat No./ID: 74704
RNeasy Fibrous Tissue Mini Kit (50)
50 RNeasy Mini Spin Columns, Collection Tubes (1.5 ml and 2 ml), Proteinase K, RNase-free DNase I, RNase-free Reagents and Buffers

RNeasy Fibrous Tissue Mini Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


0
从富含纤维的组织中纯化高品质RNA。
使用RNeasy Fibrous Tissue Mini Kit从图示的大鼠组织中分离RNA。利用 [A] 甲醛琼脂糖凝胶电泳测定RNA的质量,并在 [B] Agilent 2100 BioAnalyzer上检测。
1
RNeasy Fibrous Tissue Mini实验流程。
RNeasy Fibrous Tissue实验方案在RNA分离过程中整合了蛋白酶K和不含RNA酶的DNA酶切步骤,以降解蛋白质和基因组DNA。这可以提高富含纤维组织的高质量RNA的产量。
2
在多种富含纤维的组织中进行real-time基因表达分析。
使用RNeasy Fibrous Tissue Mini Kit从图示的大鼠组织中分离RNA。使用QuantiTect Probe RT-PCR Kit及α-actin特异性的引物和探针,对100 ng总RNA进行定量real-time RT-PCR扩增。
3
对从心脏中纯化的高品质RNA在LightCycler进行分析。
使用RNeasy Fibrous Tissue Mini Kit从小鼠心脏中分离RNA。使用Omniscript RT Kit进行逆转录后,在LightCycler系统上使用QuantiTect SYBR® Green PCR Kit和α-连环蛋白特异性的引物进行定量real-time PCR。图示量的总RNA的扩增曲线如图所示。NTC:无模板对照。
Performance

RNeasy Fibrous Tissue Kits适用于从纤维丰富组织中提取RNA,RNeasy Fibrous Tissue操作流程能简单有效的提取高品质总RNA(参见"High-quality RNA from fiber-rich tissues"),纯化的RNA适用于多种下游应用,包括芯片分析和real-time RT-PCR (参见 "Real-time gene expression analysis in a variety of fibrous tissues" 和"LightCycler analysis of high-quality RNA from heart")。与其他硅胶方法相比,RNeasy Fibrous Tissue Mini Kit从纤维丰富组织中提取的RNA产量更高(参见下表)。

与其他硅胶方法相比使用RNeasy Fibrous Tissue Kits具有最高的RNA产量
大鼠组织(10 mg) 使用RNeasy Fibrous
Tissue Mini Kit 得到的RNA产量* (µg)
使用硅胶试剂盒得到的RNA产量*(µg)(供应商AV 使用硅胶试剂盒得到的RNA产量*(µg)(供应商R) 使用硅胶试剂盒得到的RNA产量*(µg)(供应商S)
心脏 8.2 3.5 <0.5 2.5
肌肉 5.3 0.5 2.0 2.2
皮肤 6.0 未确定 未确定 未确定
食道 13.9 未确定 未确定 未确定
* 根据试剂盒供应商的说明书从组织中纯化的RNA。 离心柱被阻塞,产生低品质RNA。制备样本中的污染 物可能导致产量被高估。
Principle

RNeasy技术具有异硫氰酸胍裂解的严谨性以及硅胶膜纯化的速度和纯度,简化了总RNA的纯化流程。RNeasy Fibrous Tissue Kits适用于处理纤维丰富的组织,例如骨骼肌、心脏和主动脉。因为含有大量的收缩性蛋白、连接组织和胶原蛋白,这些组织非常难裂解。RNeasy Fibrous Tissue操作流程将蛋白酶K和RNase-free DNase消化步骤结合起来,在RNA分离的同时能降解蛋白和基因组DNA,纯化得到的高品质总RNA的产量更高。RNeasy技术适用于大于200 nt的RNA,因此RNA产物不包括5S rRNA、tRNA或其他小分子量RNAs,产物占细胞内总RNA的15–20%。

Procedure

0.5–30 mg纤维组织样本在异硫氰酸胍缓冲液中裂解。裂解液被稀释后,样本经蛋白酶K处理。离心使碎片沉淀。然后加入乙醇使裂解液澄清,之后RNA结合到RNeasy硅胶膜上。在RNeasy离心柱中加入DNase去除残留的DNA。DNase和其他污染物被洗涤后,使用150–500 µl不含RNase的水即可洗脱得到至多100 µg的高品质总RNA(参见"RNeasy Fibrous Tissue Midi procedure")。

Applications

RNeasy Fibrous Tissue Kits从纤维丰富的样本中纯化得到的高品质总RNA,适用于多种下游应用,包括芯片分析和real-time RT-PCR。

Features
Specifications
应用 PCR, real-time PCR, microarray
洗脱体积 30–100 µl
规格 Spin column
主要样本类型 Fibre-rich tissue samples
处理 Manual
纯化总RNA、miRNA、poly A+ mRNA、DNA或蛋白 RNA
样本量 0.5–30 mg
技术 Silica technology
每次运行或制备时间 55 minutes
产量 5–12 µg

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试剂盒操作手册 (1)
For purification of total RNA from heart, skeletal muscle, aorta, and other fiber-rich tissues
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参考文献
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