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RNAprotect Bacteria Reagent

稳定细菌样本中的RNA

  • 立即稳定RNA
  • 室温下方便安全的操作
  • 可稳定革兰氏阳性和阴性菌
  • 立即稳定和保护RNA,确保可靠的基因分析

RNAprotect Bacteria Reagent可在RNA纯化步骤前立即稳定RNA,从而确保可靠的基因表达和分析数据。在细菌培养基中直接加入试剂即可稳定革兰氏阳性和革兰氏阴性菌。

Cat No./ID: 76506
RNAprotect Bacteria Reagent
RNAprotect Bacteria Reagent (2 x 100 ml)

RNAprotect Bacteria Reagent适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


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GeneChip分析。
使用RNeasy Protect Bacteria Kit(RNeasy Protect Bacteria)从RNAprotect稳定的E. coli培养物中分离总RNA,或者使用商品化的沉淀方法(Supplier EIII)从未稳定的培养物中分离总RNA。在分离RNA前将RNA聚合酶抑制剂利福平加入到一半的培养物中,以区分在限定培养条件下的基因表达以及在收集和RNA分离过程中人为基因诱导的作用。加入和未加入利福平时转录水平的差异基本上反映出RNA降解的程度。[A] 参照标准的Affymetrix实验方案对E. coli微阵列进行GeneChip分析。[B] 通过GeneChip分析测得的不同转录本数目除以微阵列中的转录本总数,评估基因表达百分比。(数据来自于与Affymetrix合作开展的一项研究。)
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RNAprotect Bacteria Reagent实验流程。
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RNAprotect Bacteria Reagent防止mRNA降解。
将RNA聚合酶抑制剂利福平加入到E. coli培养物中,停止转录,仅监测RNA的降解。培养物分为两半,在其中一半加入RNAprotect Bacteria Reagent。样本置于室温0、4、8和16分钟后离心并分离RNA。采用琼脂糖凝胶电泳分析获得的RNA(上图)。采用northern印迹分析检查两半培养物中两种标记基因的表达。中图:ompA(半衰期15分钟);下图:α-内酰胺酶(半衰期2–5分钟)。
Performance

RNAprotect Bacteria Reagent可在纯化RNA前,立即稳定样本,避免RNA降解和表达谱变化(参见"RNAprotect Bacteria Reagent prevents mRNA degradation"和"GeneChip analysis")。RNAprotect Bacteria Reagent适合多种细菌样本,包括革兰氏阳性菌(如:Staphylococcus aureusMycobacterium avium)和革兰氏阴性菌(如:Escherichia coliSalmonella typhimurium)。在纯化RNA前,细菌可在限制培养基或完全培养基中生长。

Principle

使用传统方法收集细胞并纯化RNA时,有可能导致细菌表达谱出现巨大变化。RNA酶降解会导致转录产物减少或缺失,因为细菌mRNA分子通常仅有几分钟的半衰期。此外,在加工和处理样本过程中,基因可能会被诱导,导致某些转录产物的表达水平升高。RNAprotect Bacteria Reagent可在纯化RNA前,立即稳定RNA,避免出现以上问题。

Procedure

在纯化RNA前,将2体积的试剂直接加入1体积的细菌培养基中,可立即稳定RNA(参见"RNAprotect Bacteria Reagent procedure")。这种稳定方法可实现高效的细菌裂解,有多种实验方案可供选择:酶裂解、机械破碎或这两种方法结合使用。QIAGEN推荐使用TissueLyser进行高效的机械破碎。

Applications

RNAprotect Bacteria Reagent稳定的细菌可应用RNeasy Kits分离总RNA。

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试剂盒操作手册 (1)
RNAprotect Bacteria ReagentFor in vivo stabilization of total RNA in bacteriaRNeasy Protect Bacteria Mini KitRNeasy Protect Bacteria Midi KitFor in vivo stabilization of total RNA in bacteria and subsequent RNA purification
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参考文献
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