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PAXgene Tissue RNA Kit

从固定并稳定在PAXgene Tissue Containers的组织中纯化总RNA

  • 集固定、稳定和纯化RNA于一体
  • 从组织中获得高品质的RNA,保持组织形态

PAXgene Tissue是一种新型的、无交联反应的组织固定技术,可进行分子和传统的病理学检测。该技术可同时稳定分子内容物并维持组织形态。固定并储存于PAXgene Tissue Containers中的组织样品可用石蜡包埋并用于病理学研究,也可以用于下一步的RNA、miRNA和/或DNA纯化。PAXgene Tissue RNA Kit支持从固定并稳定于PAXgene Tissue Containers中的组织中纯化总RNA,RNA纯化应用基于硅胶膜技术的离心柱进行。配合PAXgene Blood RNA Tubes,该试剂盒提供了一个样本分析前处理的标准方案,包括从收集、稳定到RNA纯化的全过程,适用于分子生物学分析。

Cat No./ID: 765134
PAXgene Tissue RNA Kit (50)
For 50 RNA preps: PAXgene RNA MinElute Spin Columns, PAXgene Shredder Spin Columns, Processing Tubes, Microcentrifuge Tubes, Carrier RNA, RNase-Free DNase, and RNase-Free Buffers; to be used in conjunction with PAXgene Tissue Containers

仅限于科研应用,不适用于诊断,不为疾病的诊断、预防或治疗提供参考信息。


0
PAXgene Tissue RNA实验流程。
1
对从固定组织中纯化的RNA进行RT-PCR。
肠道组织用PAXgene Tissue Fix固定3小时,转移到PAXgene Tissue Stabilizer中储存24小时。处理完成后,使用PAXgene Tissue RNA Kit从石蜡包埋的组织切片中纯化RNA。使用QIAGEN OneStep RT-PCR Kit进行给定长度的扩增子的RT-PCR试验。:无模板对照组。 M:标记。
2
从固定的组织中纯化的高品质RNA。
肠道组织用PAXgene Tissue Fix固定3小时,转移到PAXgene Tissue Stabilizer中储存24小时。处理完成后,使用PAXgene Tissue RNA Kit从石蜡包埋的组织切片中纯化RNA。纯化所得的RNA用Agilent 2100 Bioanalyzer进行分析。
Performance
使用PAXgene Tissue RNA Kit纯化的总RNA具有高品质和高纯度(参见"High-quality RNA from fixed tissue"和"RT-PCR of RNA purified from fixed tissue")。基因组DNA污染减到最少,纯化的RNA可直接用于下游应用,无检测到的PCR抑制剂。可纯化所有大于200个核苷酸的RNA分子。该试剂盒不能富集大部分小于200个核苷酸的mRNA(如5.8S rRNA、5S rRNA和tRNAs,占总RNA的15–20%)。纯化的RNA大小与CsCl梯度离心获得的RNA大小相当,都不能有效沉淀小RNA。纯化小RNA,包括microRNA(miRNA),我们推荐使用PAXgene Tissue miRNA Kit。
Principle

传统组织学中使用的组织固定方法在分子分析中用处很小。含有甲醛的固定剂会交联生物分子并修饰核酸和蛋白。在组织固定、保存和处理过程中,交联反应会导致核酸降解。由于交联反应不能完全去除,化学修饰会抑制敏感的下游应用,如定量PCR或RT-PCR。

PAXgene Tissue System通过稳定分子内容物并维持形态学,可对相同样本进行分子和传统病理学检测。系统包含组织收集装置(PAXgene Tissue Container用于收集、稳定、保存和运输组织样本),以及用于纯化总RNA、DNA或miRNA的试剂盒。PAXgene Tissue Containers可进行组织固定,用于病理学研究,同时可从相同样本中纯化高品质核酸用于分子分析。固定和稳定方法可保护组织形态学和核酸完整性,而不会像福尔马林固定方法会对组织中的核酸产生破坏性交联反应和降解。

为纯化总RNA,系统需要PAXgene Tissue Containers用于收集和稳定组织,之后用PAXgene Tissue RNA Kit进行RNA分离和纯化。容器和试剂盒为分子生物学分析提供了完整的预分析方案,从收集、固定、稳定到纯化高品质RNA。
Procedure

PAXgene Tissue Containers是预装有2种试剂的双腔容器。PAXgene Tissue Fix快速插入并固定组织。固定之后,组织从PAXgene Tissue Fix中转移到同一容器的第二个腔室PAXgene Tissue Stabilizer中。当组织在PAXgene Tissue Stabilizer中保存时,组织样本的核酸和形态学根据组织类型可在室温下稳定保持3–7天,在2–8°C下保存2–4周。在–15°C到–30°C条件下可保存至少3个月,而不会对组织形态学和核酸完整性造成负面影响。稳定的样本可用石蜡包埋,用于组织学研究。在石蜡包埋的前后都可从稳定样本中分离核酸。关于组织固定、稳定、处理和石蜡包埋的信息,参见PAXgene Tissue Container Product Circular

PAXgene Tissue RNA Kit提供3种实验方案,可从固定并稳定在PAXgene Tissue Containers中的组织纯化总RNA。在结合缓冲液Buffer TR1中破碎并匀浆组织样本。离心取出残留的细胞碎片后,向裂解液中加入乙醇,为RNA结合提供合适的环境。样本加入到结合缓冲液Buffer TR1离心柱中,总RNA结合到膜上,污染物被有效洗去。在一二步漂洗步骤间,使用DNase I处理膜,可去除残留的DNA。漂洗之后,RNA在低盐洗脱缓冲液中洗脱并加热变性(参见"The PAXgene Tissue RNA procedure")。

Applications

纯化的RNA可直接用于一系列下游应用,包括:

RT-PCR和定量real-time RT-PCR
Expression-array和expression-chip分析
cDNA合成
RNase和S1核酸酶保护分析
Northern印记、点印记和狭缝印记
引物延伸
Features
Specifications
应用 PCR, qPCR, real-time PCR
洗脱体积 45–70 µl
规格 96-well plate
主要样本类型 Tissue samples
处理 Manual (centrifugation or vacuum)
样本量 25–100 mg
技术 Silica technology
Time per run Varies
产量 Varies
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